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黄燕颖: 作品数：11 被引量：27H指数：4; 供职机构：杭州医学院更多>>; 发文基金：浙江省卫生高层次创新人才培养工程项目国家自然科学基金浙江省自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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肺炎链球菌StkP激酶与β-内酰胺类抗生素结合能力及耐药相关性分析被引量：5: 2017年; 目的确定肺炎链球菌丝氨酸/苏氨酸激酶StkP与耐药相关性及其胞外区与β-内酰胺类抗生素结合的能力.方法采用插入失活法构建肺炎链球菌ATCC6306株stkP基因敲除（ΔstkP）突变株.采用E-test检测青霉素（PCN）和头孢噻肟（CTX）对Δstkp突变株及其野生株的最低抑菌浓度（MIC）.采用生物信息学软件确定肺炎链球菌ATCC6306株丝氨酸/苏氨酸激酶编码基因（stkP）胞外区（EC-StkP）、构建EC-StkP三维空间结构模型、分析EC-StkP结构与功能关系.采用PCR扩增stkP基因胞外区片段（EC-stkP）,T-A克隆后测序.构建EC-stkP原核表达系统,SDS-PAGE联合凝胶图像分析系统检查目的重组蛋白（EC-rStkP）表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯EC-rStkP.采用等温滴定量热法（VT-ITC）和表面等离子共振法（Biacore）检测EC-rStkP与PCN和CTX结合能力.结果肺炎链球菌ATCC6306株对PCN和CTX敏感（MIC=0.06和0.12 μg/ml）,但ΔstkP突变株对PCN和CTX高度耐药（MIC=16和32 μg/ml）.肺炎链球菌ATCC6306株StkP C端295 aa片段为胞外区,该胞外区有4个青霉素结合蛋白和丝氨酸/苏氨酸激酶相关（PASTA）功能结构域.克隆的stkP胞外区序列与GenBank中相应基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.6%和100%.构建的EC-stkP原核表达系统可表达可溶性EC-rStkP.PCN和CTX均能与EC-rStkP结合,但后者结合EC-rStkP能力强于前者.结论肺炎链球菌stkP基因与β-内酰胺类抗生素耐药性密切相关,其表达产物丝氨酸/苏氨酸激酶StkP具有识别并结合β-内酰胺类抗生素的能力.; 黄燕颖张新蔚楼永良严杰孙爱华; 关键词：肺炎链球菌 Β-内酰胺类抗生素

一种治疗流感嗜血杆菌感染的血清的制备方法及该血清的应用: 一种治疗流感嗜血杆菌感染的血清的制备方法及该血清的应用，属于生物技术领域。该方法包括：抗原表位融合片段的构建；串联表位融合片段的构建；串联式目的表位基因原核表达；目的重组融合蛋白水解和提纯；多抗原MAP交联肽制备；免疫获...; 孙爱华严杰王荣山金洪星黄燕颖; 文献传递

血清降钙素原在儿童细菌性上呼吸道感染中的诊断价值被引量：7: 2018年; 目的探讨血清降钙素原(PCT)在儿童细菌性上呼吸道感染中的诊断价值。方法回顾性分析2015年1月-2017年6月271例上呼吸道感染患儿相关信息,以细菌培养结果为金标准,比较PCT、C-反应蛋白(CRP)及白细胞(WBC)计数在革兰阳性或阴性菌感染区分及儿童细菌性上呼吸道感染诊断中的价值。结果细菌培养阳性148例(54.6%),共分离到致病菌191株,单一感染革兰阳性菌和阴性菌分别有73例和55例。以2.0μg/L为界限PCT检测革兰阳性和阴性菌阳性率差异有统计学意义(P<0.01),当PCT≥10.0μg/L时,革兰阴性菌感染可能性更大。以细菌培养结果为金标准,PCT检测的灵敏度、特异度、准确度均高于CRP与WBC检测,漏诊率、误诊率均低于CRP与WBC检测。结论血清PCT作为区分革兰阳性和阴性菌感染指标有一定价值,采用PCT诊断儿童细菌性上呼吸道感染较传统的CRP和WBC更快速和准确,PCT检测为区分上呼吸道感染性质提供了一种新途径。; 邱海蓉黄燕颖汤礼泽王家学; 关键词：降钙素原细菌性儿童上呼吸道感染

一种治疗流感嗜血杆菌引起鼻窦炎的血清及该血清的应用: 一种治疗流感嗜血杆菌引起鼻窦炎的血清及该血清的应用，属于生物技术领域。该血清由重组蛋白MAP‑rHap‑C4‑GGGS‑Hap‑C150免疫得到。该血清（及血清10倍稀释液）具有有效杀菌功能。由于该血清除具有杀菌作用的抗...; 孙爱华严杰刘小香黄燕颖

一种治疗流感嗜血杆菌感染的血清的制备方法及该血清的应用: 一种治疗流感嗜血杆菌感染的血清的制备方法及该血清的应用，属于生物技术领域。该方法包括：抗原表位融合片段的构建；串联表位融合片段的构建；串联式目的表位基因原核表达；目的重组融合蛋白水解和提纯；多抗原MAP交联肽制备；免疫获...; 孙爱华严杰王荣山金洪星黄燕颖

肺炎链球菌CiaR调控pbps和csRNAs基因表达作用及其与耐药相关性被引量：5: 2017年; 目的构建肺炎链球菌ciaR基因敲除（ΔciaR）突变株，了解该菌二元信号传导系统CiaH/CiaR中反应调节蛋白CiaR对青霉素结合蛋白基因（pbps）和cia-依赖小RNA基因（csRNAs）表达的作用。方法采用电泳迁移率试验（ESMA）确定与重组表达CiaR蛋白（rCiaR）结合的pbps基因。构建用于敲除肺炎链球菌ciaR基因的自杀质粒pEVP3ciaR，通过自杀质粒同源重组、插入失活及氯霉素筛选获得ΔciaR突变株。采用PCR及测序鉴定ΔciaR突变株。采用E-test测定青霉素（PCN）和头孢噻肟（CTX）对肺炎链球菌菌株最低抑菌浓度（MIC）。采用实时荧光定量RT-PCR，检测ΔciaR突变株及其野生株1/4 MIC PCN或CTX作用前后pbps-mRNAs和csRNAs水平变化与差异。结果CiaR能与肺炎链球菌pbp1a、pbp1b和pbp2b基因启动子区结合。PCR和测序结果证实ΔciaR突变株中ciaR基因被插入失活。1/4 MIC PCN或CTX作用后，肺炎链球菌ΔciaR突变株pbps-mRNAs水平明显升高（P〈0.05）、csRNAs水平明显降低（P〈0.05），但其野生株pbps-mRNAs水平明显降低（P〈0.05）、csRNAs水平明显升高（P〈0.05）。E-test结果显示，PCN和CTX对ΔciaR突变株MIC均较野生株增加250倍。结论肺炎链球菌CiaR可通过下调PBP1a、PBP1b和PBP2b表达或上调csRNAs表达抑制PBPs表达，使该菌对PCN和CTX耐药性增强。; 张新蔚黄燕颖楼永良严杰孙爱华; 关键词：肺炎链球菌耐药

金黄色葡萄球菌肠毒素基因的检测和耐药性分析被引量：7: 2018年; 目的了解金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)临床分离株的肠毒素基因携带情况和耐药现状。方法 PCR扩增SA肠毒素编码基因sea、seb、sec、sed、see和sef,电泳检测扩增结果。K-B法检测SA临床菌株对药物敏感性,头孢西丁法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。结果 89株临床菌株中,68株肠毒素基因阳性,阳性率为76.4%,sea、seb、sec、sed、see和sef检出率分别为58.4%、5.6%、43.8%、3.4%、2.2%和14.6%,36株(40.4%)同时检测到2种或2种以上肠毒素基因。MRSA和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)分别占42.7%(38/89)和57.3%(51/89),MRSA肠毒素基因携带率(92.1%,35/38)明显高于MSSA的携带率(64.7%,33/51),差异有统计学意义(P<0.05)。金黄色葡萄球菌除对万古霉素、利奈唑胺和呋喃妥因敏感外,对青霉素、苯唑西林等9种抗菌药物均有耐药性,且MRSA的耐药性比MSSA的强。结论应重视对金黄色葡萄球菌肠毒素和MRSA的检测,合理使用抗菌药物,以利于医院MRSA感染的控制。; 邱海蓉黄燕颖汤礼泽王家学; 关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素基因耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性

一种治疗流感嗜血杆菌引起鼻窦炎的血清及该血清的应用: 一种治疗流感嗜血杆菌引起鼻窦炎的血清及该血清的应用，属于生物技术领域。该血清由重组蛋白MAP‑rHap‑C4‑GGGS‑Hap‑C150免疫得到。该血清（及血清10倍稀释液）具有有效杀菌功能。由于该血清除具有杀菌作用的抗...; 孙爱华严杰刘小香黄燕颖; 文献传递

不可分型流感嗜血杆菌Hap黏附素T-B优势抗原表位及其免疫原性研究: 2017年; 目的了解无荚膜型流感嗜血杆菌（NTHi）临床菌株中Hap黏附素编码基因（hap）分布及其序列保守性,筛选并鉴定Hap蛋白优势T和B细胞（T-B）联合抗原表位及其免疫原性.方法采用生物信息学软件分析NTHi菌株hap基因序列保守性并预测其T-B联合抗原表位.采用PCR扩增NTHi临床菌株hap基因5′端156 bp和3′端855 bp片段（hap-5′-156和hap-3′-855）后测序.构建Hap蛋白N端52 aa和C端285 aa片段（Hap-N52和Hap-C285）7个T-B联合抗原表位肽噬菌体展示系统.采用Western blot和ELISA分别检测重组噬菌体PⅢ蛋白（rPⅢ）展示的T-B联合抗原表位肽抗原性和免疫反应性.结果 hap基因产物为NTHi膜表面蛋白.不同NTHi菌株hap基因5′端156 pb和3′端855 bp序列相对保守,中间区变异较大.56株NTHi临床菌株均能检出hap-5′-156和hap-3′-855片段,其核苷酸和氨基酸序列相似性为92.3％～100％.Hap-N52片段中Hap-N5-24以及Hap-C285片段中Hap-C4-27、Hap-C28-47、Hap-C114-129、Hap-C150-173、Hap-C200-227和Hap-C241-267为评分较高且变异较小的预测T-B联合抗原表位.Western blot和ELISA检测结果显示,rPⅢ展示的Hap-C4-27或Hap-C150-173表位肽能与NTHi抗血清产生较强的杂交条带且96.9％（63/65）和92.3％（60/65）NTHi感染患儿血清标本相应抗体阳性.结论 hap基因在NTHi临床菌株中分布广泛且5′端156 pb和3′端855 bp序列保守.Hap-C4-27和Hap-C150-173为Hap蛋白优势T-B联合抗原表位,可作为NTHi多抗原肽疫苗的候选表位.; 吴中秀王荣山黄燕颖金洪星严杰; 关键词：不可分型流感嗜血杆菌免疫原性

解甘露醇罗尔斯顿菌的耐药性和原卟啉亚铁螯合酶毒力因子研究被引量：4: 2017年; 目的:检测与分析解甘露醇罗尔斯顿菌的耐药性和β-内酰胺酶基因、原卟啉亚铁螯合酶基因及其结构和功能。方法:采用血平板分离划线培养、全自动细菌检测分析系统和16S RNA基因PCR分离并鉴定病原菌。采用微量稀释法对分离菌株进行药敏试验,β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶和碳青酶烯酶确证试验确定其产酶情况。采用PCR扩增分离菌株5个β-内酰胺酶基因和原卟啉亚铁螯合酶基因并测序。采用生物信息学软件分析该原卟啉亚铁螯合酶基因产物结构与功能。结果:患者血液中分离出解甘露醇罗尔斯顿菌。该菌株对头孢吡肟、环丙沙星、左氧氟沙星、替加环素敏感,但对五种青霉素类、四种头孢菌素类和两种碳青酶烯类抗菌药物耐药。该菌株产β-内酰胺酶但不产超广谱β-内酰胺酶和碳青酶烯酶。该菌株具有5个独特的β-内酰胺酶基因和原卟啉亚铁螯合酶基因,该基因产物为含2个Ⅱ类螯合酶超家族原卟啉亚铁螯合酶功能结构域,与脑膜炎奈瑟菌原卟啉亚铁螯合酶亲缘关系最近。结论:该株解甘露醇罗尔斯顿菌对β-内酰胺类抗菌药物有较高耐药性,其β-内酰胺酶基因与常见细菌β-内酰胺酶基因不同,原卟啉亚铁螯合酶可能是其重要毒力因子。; 葛玉梅陈学波黄燕颖吕火烊赵钊周永列; 关键词：Β内酰胺酶类

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