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HPV16的新型伪病毒对DNA特异性B细胞的靶向实验研究: 2008年; 目的:构建人乳头状病毒(human papilloma virus,HPV)16型的新型伪病毒,并检测其对DNA特异性B细胞(R4A)的靶向性。方法:利用昆虫杆状病毒表达系统表达病毒蛋白,在体外变性与复性过程中将病毒蛋白包装绿色荧蛋白EGFP表达型质粒,形成伪病毒。透射电镜观察病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)的结构,并转染R4A细胞,荧光显微镜和流式细胞仪检测其转染效率。结果:透射电镜观察证实病毒蛋白可自我组装成VLP,在转染R4A细胞后,荧光显微镜和流式细胞仪成功检测到荧光的表达。结论:HPV16的新型伪病毒能成功转染R4A细胞,为系统性红斑狼疮(SLE)的靶向治疗提供了理想的策略。; 杨曌王惠明; 关键词：人乳头状瘤病毒16型靶向性

基于survivin的肿瘤生物治疗研究进展被引量：3: 2006年; survivin是一种细胞凋亡抑制蛋白,属于IAP(inhibitor apoptosis protein)蛋白质家族。由于其独特的结构、特殊的组织学分布,成为肿瘤生物治疗领域的研究热点,已有大量研究证明其作为治疗靶点的有效性。本文着重综述survivin在肿瘤生物治疗策略中的研究进展。; 杨曌王莉; 关键词：SURVIVIN 生物治疗

免疫磁珠法分离人外周血CD4^+ CD25^+调节性T细胞被引量：13: 2007年; 目的建立人外周血单个核细胞中CD4+CD25+调节性T细胞(regulatery T cells,Treg)免疫磁性细胞分离方法(megnetic activated cell sorting,MACS),并鉴定其分离效率。方法采用免疫磁珠两步法(即阴性分选和阳性分选2步)分离人外周血单个核细胞中的CD4+CD25+调节性T细胞,首先采用生物素标记的鸡尾酒抗体和抗生物素标记的磁珠阴性分选CD4+T细胞,再用抗CD25+的磁珠阳性分选CD4+CD25+T细胞。分离后的细胞经抗体染色后再通过流式细胞仪检测其分离纯度;胞内因子染色检测其转录因子FOXP3的表达频率;台盼蓝染色检测细胞的存活率;3H-TdR掺入法检测其对CD4+CD25-T细胞增殖抑制效应。结果阴性分选CD4+T细胞的纯度为(92.2±1.7)%,阳性分选后CD4+CD25+Treg细胞的纯度为(95.1±1.2)%。胞内因子染色FOXP3在CD4+CD25+Treg细胞中的表达率为(80.4±1.2)%,台盼蓝染色细胞存活率为(95.6±3.3)%3。H-TdR掺入法检测其对CD4+CD25-T细胞具有明显的抑制作用。结论采用免疫磁性细胞分离技术能够高效、快速地得到一群纯度高并且细胞活力好的CD4+CD25+Treg,为进一步研究其功能提供了方便。; 牛微杨曌尚小云傅晓岚唐艳黎万玲姜曼王莉吴玉章; 关键词：CD4^+CD25^+调节性T细胞

乙肝疫苗无应答者外周血Treg细胞的PD-1表达研究被引量：8: 2009年; 目的:检测乙肝疫苗无应答者外周血Treg细胞的PD-1表达情况及PD-1在Treg中发挥的作用。方法:用流式细胞术检测乙肝疫苗无应答者外周血Treg细胞的PD-1表达情况。结果:乙肝疫苗无应答者外周血Treg细胞的PD-1表达率为(48.7±2.9)%,显著高于乙肝疫苗应答者外周血Treg细胞的PD-1表达率(16.3±1.4)%。结论:乙肝疫苗无应答者外周血Treg细胞的PD-1表达率的显著上调,有可能参与了Treg的抑制机制。; 杨燕杨曌; 关键词：乙肝疫苗无应答 TREG

医学本科生免疫学实验课程建设的探讨被引量：6: 2007年; 医学免疫学是一门重要的医学基础课程,实验课程是医学免疫学的重要部分。为了提高实验课的教学质量,对免疫学实验课程体系进行了较系统的改革,取得了较好的教学效果。; 杨曌王莉李晋涛吴玉章; 关键词：医学免疫学实验课程教学改革

基于survivin的“模拟病毒”瘤苗对结肠癌免疫治疗的作用被引量：1: 2007年; 背景与目的:结肠癌的免疫治疗在肿瘤的综合治疗中发挥了重要作用。本研究以结肠癌的survivin为靶分子,构建基于survivin的"模拟病毒"瘤苗,并探讨该瘤苗对结肠癌的免疫治疗作用。方法:制备基于survivin的"模拟病毒"瘤苗,用扫描电镜和免疫印迹(Western blot)进行鉴定。酶联免疫斑点试验(Enzyme linked immunos-pot assay,ELISPOT)和标准51Cr释放试验分别检测瘤苗所诱导的特异性CTL活性,并对Babl/c小鼠荷瘤模型进行免疫学效应评价。结果:扫描电镜和免疫印迹证实"模拟病毒"瘤苗制备成功,并能有效介导"模拟病毒"瘤苗所携带基因的表达。ELISPOT和标准51Cr释放试验显示体内有效激发抗原特异性CTL效应,可诱导CTL产生IFN-γ等细胞因子,对结肠癌细胞系CT26有明显的杀伤毒性,杀伤率为56.4%;肿瘤治疗实验证实"模拟病毒"瘤苗能有效抑制肿瘤的生长速度,提高荷瘤动物的生存率,与对照组相比差异显著(P<0.05)。结论:基于survivin的"模拟病毒"瘤苗能有效激发出特异性CTL应答,并在荷瘤动物模型中有效抑制结肠癌细胞CT26的生长,提高荷瘤动物的生存率,为新型结肠癌治疗性疫苗的设计提供了新思路。; 杨曌王莉傅晓岚牛微吴玉章赵建平; 关键词：SURVIVIN 结肠癌免疫治疗

基于HPV16肿瘤基因治疗载体的构建与鉴定: 2008年; 目的:构建基于人乳头状瘤病毒16型(human papilloma virus type-16,HPV16)的肿瘤基因治疗载体,并鉴定其对Hela肿瘤细胞的转染活性。方法:利用昆虫杆状病毒表达系统表达病毒蛋白,在体外变性与复性过程中用病毒蛋白包装绿色荧光表达质粒EGFP形成治疗载体。透射电镜观察治疗载体的结构,并转染Hela肿瘤细胞,荧光显微镜和流式细胞仪检测其转染效率。结果:透射电镜观察证实病毒蛋白可自我组装成病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)的结构,在转染Hela肿瘤细胞后,荧光显微镜和流式细胞仪成功检测到荧光的表达。结论:基于HPV16的新型肿瘤基因治疗载体能成功转染Hela肿瘤细胞,为肿瘤的基因治疗策略提供了理想的工具。; 杨曌王惠明; 关键词：乳头状瘤病毒基因疗法

激动型抗4-1BB抗体3H3交联促进CD8^+ T细胞中Akt激酶活性: 2007年; 目的:研究4-1BB信号促进CD8+T细胞增殖、存活及Akt活性的变化。方法:利用小鼠CD8α+T细胞磁珠负性分选试剂盒制备高纯度CD8+T细胞,并通过体外抗CD3单克隆抗体(mAb)刺激活化CD8+T细胞。再通过流式细胞术(FCM)分析3H3交联与否,四唑盐(WST-1)/ECS检测CD8+T细胞的增殖程度,Annexin V检测抗凋亡能力,免疫印迹法分析胞内Akt磷酸化水平及Akt激酶活性。结果:3H3交联可以明显促进活化的CD8+T细胞增殖和存活,并且3H3介导的4-1BB信号可明显促进CD8+T细胞内Akt磷酸化水平及Akt激酶活性。结论:Akt途径可能参与了3H3交联介导的4-1BB信号对CD8+T细胞增殖与存活的调节效应。; 杨曌傅晓岚尚小云牛微吴玉章王莉; 关键词：4-1BB CD8^+T细胞

低亲和力CTL表位肽在治疗性肿瘤疫苗中应用的研究被引量：1: 2007年; 因为细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTLs)在肿瘤控制中起着重要作用,所以基于CTL表位(epitope)的治疗性肿瘤多肽疫苗已经成为当前肿瘤综合生物治疗中一个倍受瞩目的策略。传统的免疫治疗策略通常选择与MHC-Ⅰ类分子具有高亲和力的CTL表位肽作为治疗工具,但部分高亲和力的CTL表位肽在体内往往有免疫耐受或者副反应。近来研究表明:低亲和力的CTL表位肽及其改构体能很好地克服这些问题。本文就低亲和力CTL表位肽及其改构体在肿瘤免疫治疗中的研究进展做一综述。; 杨曌王莉; 关键词：肿瘤疫苗 CTL表位

小鼠4-1BB特异性RNA干扰表达载体的构建及体外瞬时干扰效应的研究: 2007年; 目的采用小片段RNA干扰(small interference RNA,siRNA)技术,通过构建系列小鼠4-1BB(m4-1BB)基因的特异性siRNA表达载体,体外观察对m4-1BB基因的瞬时沉默作用,筛选具有最佳干扰效果的siRNA表达载体。方法设计并合成4条针对小鼠4-1BB全长特异性的siRNA寡核苷酸序列,插入真核表达载体(pENTRTM/U6),构建m4-1BB序列特异性siRNA表达载体,根据靶位点分别命名为p336、394、498及763 siRNA,无关干扰质粒为pLacZ siRNA;通过体外m4-1BB真核表达质粒p4-1BB分别与各siRNA表达载体同时转染COS-7细胞,48h后通过RT-PCR和FACS(fluorescence-activated cell sorter,荧光活化细胞分选仪)观测COS-7细胞4-1BB mRNA及蛋白表达水平。结果经测序分析,各m4-1BB siRNA表达载体构建成功;其中p498 siRNA与p4-1BB双质粒转染COS-7细胞,48h后可观察到细胞表面4-1BB分子明显下调,其胞内mRNA水平也显著降低,与无关干扰组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。其余siRNA载体,几乎无干扰效应,与无关干扰组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论我们所构建的p498 siRNA真核表达载体,能明显干扰m4-1BB蛋白的瞬时表达,可望用于m4-1BB Lentivirus干扰表达系统的构建,进一步在小鼠原代T淋巴细胞内实现高效4-1BB表达沉默,以深入研究4-1BB对T淋巴细胞的生物学影响。; 傅晓岚杨曌王莉牛微赵建平吴玉章; 关键词：RNA干扰 COS-7

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杨曌

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