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基于Survivin的模拟病毒瘤苗体外激发CTL杀伤活性的实验研究: 2006年; 目的探讨基于Survivin的模拟病毒瘤苗体外激发细胞毒性T细胞(cytotoxicTlymphocytes,CTL)对乳腺癌细胞的杀伤作用。方法制备含有Survivin的模拟病毒瘤苗,体外刺激HLA-A2·1阳性健康者外周血单个核细胞(peripheralbloodmononu-clearcell,PBMC),用酶联免疫斑点实验(enzymelinkedimmunospotassay,ELISPOT)和标准51Cr释放实验分别检测瘤苗所诱导的特异性CTL活性。结果Survivin模拟病毒瘤苗能够在体外诱导出特异性CTL,对HLA-A2·1阳性的乳腺癌细胞系MCF-7有明显的杀伤毒性,杀伤率为56·4%;并可诱导CTL产生IFN-γ等细胞因子,ELISPOT显示斑点数为287个/105细胞,P<0·05。结论模拟病毒瘤苗能有效激发出特异性CTL应答,为新型乳腺癌治疗性疫苗的设计提供了新思路。; 杨空明牛微李晋涛吴玉章赵建平王莉; 关键词：癌症疫苗 T淋巴细胞细胞毒性乳腺肿瘤

胰岛素A链HLA-A*0201限制性CTL表位改造肽配体及其应用: 本发明公开了一种胰岛素A链HLA-A*0201限制性CTL表位改造肽配体（APL），是将人源化NOD小鼠的胰岛素A链HLA-A*0201限制性天然CTL表位mInsA<Sub>2-10</Sub>中的第6位氨基酸<I>L...; 王莉舒驰陈晓玲牛微吴玉章; 文献传递

护理专业免疫学理论教学探讨被引量：2: 2008年; 免疫学是生命科学中的前沿学科，具有理论性强、内容抽象等特点，初学者普遍感到难以接受。如何把握好免疫学的教学方法，针对护理专业的临床应用方向，分析了护理专业的免疫学教学特点。在教学方法上，首先应该消除学生的畏难情绪，提高学习免疫学的兴趣；优化课程内容，突出重点与难点；充分利用多媒体技术，使教学内容丰富多彩；理论联系实际，实现教学互通。; 牛微李晋涛王晴王莉吴玉章; 关键词：免疫学教学方法护理专业

免疫磁珠法分离人外周血CD4^+ CD25^+调节性T细胞被引量：13: 2007年; 目的建立人外周血单个核细胞中CD4+CD25+调节性T细胞(regulatery T cells,Treg)免疫磁性细胞分离方法(megnetic activated cell sorting,MACS),并鉴定其分离效率。方法采用免疫磁珠两步法(即阴性分选和阳性分选2步)分离人外周血单个核细胞中的CD4+CD25+调节性T细胞,首先采用生物素标记的鸡尾酒抗体和抗生物素标记的磁珠阴性分选CD4+T细胞,再用抗CD25+的磁珠阳性分选CD4+CD25+T细胞。分离后的细胞经抗体染色后再通过流式细胞仪检测其分离纯度;胞内因子染色检测其转录因子FOXP3的表达频率;台盼蓝染色检测细胞的存活率;3H-TdR掺入法检测其对CD4+CD25-T细胞增殖抑制效应。结果阴性分选CD4+T细胞的纯度为(92.2±1.7)%,阳性分选后CD4+CD25+Treg细胞的纯度为(95.1±1.2)%。胞内因子染色FOXP3在CD4+CD25+Treg细胞中的表达率为(80.4±1.2)%,台盼蓝染色细胞存活率为(95.6±3.3)%3。H-TdR掺入法检测其对CD4+CD25-T细胞具有明显的抑制作用。结论采用免疫磁性细胞分离技术能够高效、快速地得到一群纯度高并且细胞活力好的CD4+CD25+Treg,为进一步研究其功能提供了方便。; 牛微杨曌尚小云傅晓岚唐艳黎万玲姜曼王莉吴玉章; 关键词：CD4^+CD25^+调节性T细胞

小鼠4-1BB特异性RNA干扰表达载体的构建及体外瞬时干扰效应的研究: 2007年; 目的采用小片段RNA干扰(small interference RNA,siRNA)技术,通过构建系列小鼠4-1BB(m4-1BB)基因的特异性siRNA表达载体,体外观察对m4-1BB基因的瞬时沉默作用,筛选具有最佳干扰效果的siRNA表达载体。方法设计并合成4条针对小鼠4-1BB全长特异性的siRNA寡核苷酸序列,插入真核表达载体(pENTRTM/U6),构建m4-1BB序列特异性siRNA表达载体,根据靶位点分别命名为p336、394、498及763 siRNA,无关干扰质粒为pLacZ siRNA;通过体外m4-1BB真核表达质粒p4-1BB分别与各siRNA表达载体同时转染COS-7细胞,48h后通过RT-PCR和FACS(fluorescence-activated cell sorter,荧光活化细胞分选仪)观测COS-7细胞4-1BB mRNA及蛋白表达水平。结果经测序分析,各m4-1BB siRNA表达载体构建成功;其中p498 siRNA与p4-1BB双质粒转染COS-7细胞,48h后可观察到细胞表面4-1BB分子明显下调,其胞内mRNA水平也显著降低,与无关干扰组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。其余siRNA载体,几乎无干扰效应,与无关干扰组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论我们所构建的p498 siRNA真核表达载体,能明显干扰m4-1BB蛋白的瞬时表达,可望用于m4-1BB Lentivirus干扰表达系统的构建,进一步在小鼠原代T淋巴细胞内实现高效4-1BB表达沉默,以深入研究4-1BB对T淋巴细胞的生物学影响。; 傅晓岚杨曌王莉牛微赵建平吴玉章; 关键词：RNA干扰 COS-7

外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞与乙型肝炎疫苗接种后应答关系的研究被引量：2: 2009年; 目的通过检测乙型肝炎（简称乙肝）疫苗接种后弱应答和无应答人外周血CIM＋CD25＋调节性T细胞（CIM＋CD25＋regulatoryTcell，简称Treg细胞）的频率，探讨CIM＋CD25＋调节性T细胞与乙肝疫苗接种后弱和（或）无应答之间的关系。方法利用流式细胞分析方法对25例乙肝疫苗无应答、30例乙肝疫苗弱应答者外周血Treg细胞的频率进行分析，另外选取20例乙肝疫苗强应答者作为对照。结果强应答组Treg细胞的频率为（4．32±1．21）％，弱应答组Treg细胞的频率为（7．01±1．06）％，无应答组Treg细胞的频率为（12．75±2．01）％，无应答组和弱应答组与强应答组相比Treg细胞频率显著升高（t=8．426，t=3．289，P值均〈0．01）。结论乙肝疫苗接种后无应答和弱应答现象与外周血CIM＋CD25＋调节性T细胞频率升高存在一定关系。; 牛微杨曌尚小云傅晓岚唐艳姜曼王莉; 关键词：抗体生成流式细胞术

Fucoidan选择性抑制LPS诱导巨噬细胞分泌IL-12被引量：1: 2006年; 目的探讨配体fucoidan活化清道夫受体后能否抑制LPS刺激巨噬细胞分泌IL-12。方法不同剂量的fu-coidan(以多价阴离子chondroitin为阴性对照)与RAW264.7作用10 min后,加入等量的LPS刺激,检测上清中IL-12p70I、L-6和TNF-α;同时观察不同剂量fucoidan对RAW264.7贴壁的影响。结果不同剂量的fucoidan能不同程度促进LPS诱导RAW264.7分泌炎症因子IL-6和TNF-α,但却能明显地抑制IL-12的分泌;随着所加fucoidan量的增加,RAW264.7细胞的贴壁能力逐渐下降。结论Fucoidan可能通过与清道夫受体SR-A(scavenger receptor A)结合发挥其特异抑制LPS诱导巨噬细胞分泌IL-12的作用。; 徐文岳吴玉章王莉王惠明王沂芹赵婷婷梁云飞牛微; 关键词：IL-12 RAW264.7 LPS

肿瘤坏死因子及其受体家族研究进展: 肿瘤坏死因子的研究历史可追溯到19世纪末,Carswell研究这些血清因子,并鉴定其主要生物学活性是导致肿瘤出血坏死,而正式出用肿瘤坏死因子来命名。肿瘤坏死因子参与各种炎症和免疫反应的调控,他们的生物学作用方式主要是通过...; 牛微; 文献传递

乙肝疫苗弱与无应答者外周血HBsAg抗原特异性CD4^+CD25^+调节性T细胞的体外诱导被引量：5: 2008年; 目的用乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)在体外刺激乙肝疫苗弱、无应答者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC),看是否能够诱导出一群HBsAg特异性的CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+ regulatory T cell,简称Treg)。方法分离并培养乙肝疫苗强应答、弱应答和无应答者的外周血PBMCs,用植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)和HBsAg刺激,并设不加抗原的空白对照。流式细胞仪检测抗原刺激后Treg细胞的表达频率,并用噻唑蓝比色法(MTT)检测培养细胞的增殖反应。结果弱、无应答组PBMC经HBsAg刺激后Treg细胞的表达频率与PHA刺激孔和不加抗原的空白对照孔相比,明显上升(P<0.01);而强应答组HBsAg,PHA刺激孔以及空白对照孔三孔之间Treg细胞的表达频率均无显著差异。MTT法检测细胞增殖反应,发现弱、无应答组与强应答组相比,HBsAg刺激后细胞增殖反应明显降低(P<0.01),但三组之间PHA刺激孔以及空白对照孔均无显著差异。结论乙肝疫苗弱、无应答现象可能是由于注射疫苗后,在体内诱导出了一群HBsAg特异性的Treg细胞,而这群具有抑制功能的T细胞介导了机体细胞及体液免疫功能的下降,从而导致弱、无应答现象的发生。; 牛微杨明空尚小云傅晓岚姜曼王莉; 关键词：乙肝疫苗无应答 CD4^+CD25^+调节性T细胞细胞增殖反应

基于survivin的“模拟病毒”瘤苗对结肠癌免疫治疗的作用被引量：1: 2007年; 背景与目的:结肠癌的免疫治疗在肿瘤的综合治疗中发挥了重要作用。本研究以结肠癌的survivin为靶分子,构建基于survivin的"模拟病毒"瘤苗,并探讨该瘤苗对结肠癌的免疫治疗作用。方法:制备基于survivin的"模拟病毒"瘤苗,用扫描电镜和免疫印迹(Western blot)进行鉴定。酶联免疫斑点试验(Enzyme linked immunos-pot assay,ELISPOT)和标准51Cr释放试验分别检测瘤苗所诱导的特异性CTL活性,并对Babl/c小鼠荷瘤模型进行免疫学效应评价。结果:扫描电镜和免疫印迹证实"模拟病毒"瘤苗制备成功,并能有效介导"模拟病毒"瘤苗所携带基因的表达。ELISPOT和标准51Cr释放试验显示体内有效激发抗原特异性CTL效应,可诱导CTL产生IFN-γ等细胞因子,对结肠癌细胞系CT26有明显的杀伤毒性,杀伤率为56.4%;肿瘤治疗实验证实"模拟病毒"瘤苗能有效抑制肿瘤的生长速度,提高荷瘤动物的生存率,与对照组相比差异显著(P<0.05)。结论:基于survivin的"模拟病毒"瘤苗能有效激发出特异性CTL应答,并在荷瘤动物模型中有效抑制结肠癌细胞CT26的生长,提高荷瘤动物的生存率,为新型结肠癌治疗性疫苗的设计提供了新思路。; 杨曌王莉傅晓岚牛微吴玉章赵建平; 关键词：SURVIVIN 结肠癌免疫治疗

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牛微

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