刘倩
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
- 供职机构：广东医学院医学检验学院更多>>
- 发文基金：广东省大学生创新实验项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- IL-37融合EGFP真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达被引量：3
- 2015年
- 目的:构建白介素-37(interleukin-37,IL-37)与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)融合基因真核表达载体,并检测其在293T细胞中的表达。方法 :通过PCR分别扩增出IL-37和EGFP基因,经酶切和测序鉴定正确后,克隆入真核表达载体pc DNA3.1,用Linker(G4S)3连接2个目的基因片段,构建IL-37-GFP融合基因真核表达质粒pc DNA3.1/IL-37-EGFP,将其转染到293T细胞中,观察荧光产生情况,用实时荧光定量RT-PCR和Western blot检测IL-37的表达情况。结果:经酶切和测序鉴定,由linker连接的IL-37-GFP融合基因正确克隆入表达载体pc DNA3.1,重组表达质粒pc DNA3.1/IL-37-EGFP转染293T细胞后,用荧光显微镜检测显示荧光蛋白在细胞中表达,RT-PCR与Western blot均检测到高水平IL-37 m RNA和IL-37蛋白的表达。结论:成功构建了IL-37-融合报告基因EGFP的真核表达载体,并在293T细胞中得到了有效表达,为进一步研究IL-37的功能和表达调控奠定了实验基础。
- 刘倩梁庄严何素辉王森陈章权
- 关键词：绿色荧光蛋白293T细胞
