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张宝云: 作品数：14 被引量：117H指数：6; 供职机构：中国预防医学科学院更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金引进国际先进农业科技计划更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学更多>>

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中国株白喉杆菌白喉毒素全基因编码序列的克隆被引量：1: 1995年; 中国株白喉杆菌白喉毒素全基因编码序列的克隆张新建，李晶，张宝云，洪涛白喉毒素（Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｔｏｘｉｎ，ＤＴ）是由携带β棒状噬菌体（Ｃｏｒｙｎｅｐｈａｇｅβ）的白喉棒状菌（ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）所产生的由５３５氨...; 张新建李晶张宝云洪涛; 关键词：白喉杆菌白喉毒素基因克隆

中国株白喉杆菌白喉毒素全基因编码序列的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达被引量：1: 1995年; 通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ）从一中国株中型白喉产毒杆菌的β噬菌体基因组中克隆出１０６５碱基对的白喉毒素全基因编码序列，将ＰＣＲ产物直接克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ／载体系统，经有关限制性内切酶消化，核苷酸序列分析表明，成功的克隆出白喉毒素全基因编码序列。利用上下游引物中导人的ＮｄｅＩ和ＢａｍＨＩ位点，将白喉毒素基因插入原核表达载体ＰＥＴ－３ａ，从而构建出白喉毒素表达载体ＰＥＴ／ＤＴ。以ＢＬ２１（ＤＥ３）为工程菌，用ＩＰＴＧ诱导Ｔ７启动子进行表达，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明，在５８０００处可见一产物条带，表达量可达菌体蛋白的２５％，经豚鼠毒性实验和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ实验表明，表达产物与白喉杆菌分泌的毒素有相同的免疫学及生物学活性。; 张新建李晶张宝云洪涛; 关键词：白喉杆菌白喉毒素克隆大肠杆菌

中国不同民族人群中PrP蛋白基因第129位氨基酸多态性分析被引量：22: 2002年; 目的　研究人类PrP基因 (PRNP)第 1 2 9位氨基酸多态性在中国汉族及维吾尔族人群中的分布。方法　从抽样人群外周血中提取白细胞DNA ,进行聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析 (PCR RFLP) ,使用SASforWindows 6 1 2对结果进行分析。结果　 83例汉族人群 1 2 9Met基因频率为 97 0 % ,1 2 9Val为 3 0 % ;35例维吾尔族人群 1 2 9Met基因频率为 91 4% ,1 2 9Val为 8 6 %。分别比较不同人群PRNP第 1 2 9位氨基酸基因型的分布情况 ,结果显示汉族人群和维吾尔族人群 (P =0 0 4 90 )、汉族人群和高加索人群 (P =0 0 0 0 5)、维吾尔族人群和高加索人群间 (P =0 0 0 1 0 )差异有显著性 ,而汉族人群与大和民族人群间差异无显著性 (P =0 50 4 0 )。结论　中国汉族人群PRNP第 1 2 9位氨基酸基因型的分布与大和民族人群相似。; 侯星生高晨张宝云周伟董小平刘红; 关键词：朊病毒多态现象遗传学

成人腹泻轮状病毒抗体在人体内维持时间的研究被引量：1: 2000年; 目的　观察成人腹泻轮状病毒 (ADRV)抗体在人体内维持时间。方法　采用特异性的ADRV ELISA阻断试验检测ADRV抗体 ,对河南义马地区 1992、1987、1983年患成人腹泻的病人恢复 1年、6年、10年后的血清进行ADRV抗体的检测。结果　 2 6 0例ADRV病人恢复 1年、6年、10年后其血清中ADRV抗体阳性率分别为 2 2 .7% (34 15 0 )、36 .3 % (2 9 80 )、2 3 .3% (7 30 ) ;对 92例ADRV抗体阳性者进行了抗体维持时间的观察 ,ADRV抗体在人体内可维持 1～ 6年。结论　成人腹泻轮状病毒感染人后一旦产生了抗体 ,可维持; 王长安李多敬赵同兴张宝云周伟屈建国崔德广吕德祥李晓刚洪涛; 关键词：成人腹泻轮状病毒抗体酶联免疫吸附测定

人PrP特异性多肽抗体的鉴定和应用被引量：3: 2001年; 目的　为了进一步检测制备的人PrP特异性多肽抗体的免疫反应性和特异性。方法　构建人PrPN端缺失原核表达质粒 ,表达并纯化N端缺失的PrP蛋白 ;Westernblot检测多肽抗体与纯化的各种人全长、N端缺失以及C端缺失PrP蛋白的反应能力 ;免疫荧光法检测多肽抗体与真核表达的人PrP蛋白反应能力 ;提取Creutzfeldt Jakob病 (CJD)病人以及Scrapie感染的仓鼠脑组织 ,Westernblot检测多肽抗体与致病性PrP res蛋白的反应能力。结果　所制备的PrP多肽抗体能与原核及真核细胞表达的各种不同长度的PrP蛋白反应 ,同时还能特异性识别Scrapie感染鼠脑组织中和CJD病人脑组织中的PrP res蛋白。结论　多肽抗体具备良好的免疫反应性和特异性。; 孙宪锋董小平张宝云张福萍周伟洪涛; 关键词：羊瘙痒病

人朊病毒多肽抗体的制备及应用被引量：13: 2000年; 目的　利用人工合成人朊病毒蛋白(PrP)多肽制备特异性抗PrP抗体,以期用于朊病毒相关疾病的临床诊断。方法　根据PrP基因编码的氨基酸序列合成多肽,与载体偶联后免疫动物,所制备的抗血清用ELISA及Westernblot鉴定。结果　ELISA检测表明所制备的抗血清可同多种PrP发生阳性反应;Westernblot结果显示抗血清可与正常组织PrPc和病理组织的PrPsc反应;用蛋白酶K处理,可鉴别二者。此外,人、小鼠和兔的脑组织细胞膜提取物在Westernblot中显示一相对分子质量约30×103的条带,而相应肝、脾细胞膜提取物中无此条带出现。结论　所制备的PrP多肽抗血清可识别正常的PrPc和病理的PrPsc,合成肽抗原是制备抗朊病毒PrP抗体的一条有效的途径,可用于临床病例的检测。; 孙宪锋董小平张宝云周伟王长安赵同兴洪涛; 关键词：朊病毒多肽抗体病毒

免疫印迹法检测牛海绵状脑病和羊瘙痒病被引量：15: 2001年; 用大肠杆菌表达的牛朊病毒正常成熟蛋白 (BoPrPC)免疫新西兰白兔 ,获得了与朊病毒蛋白 (PrP)反应的抗体T1。根据致病型朊病毒 (PrPSC)能抵抗蛋白酶消化的特性 ,用蛋白酶K消化脑组织提取物 ,以抗体T1进行免疫印迹反应 ,结果表明从接种羊瘙痒病朊病毒 2 6 3K的金黄地鼠脑组织提取物内检测到抗蛋白酶K消化的致病型PrPSC ,而正常金黄地鼠脑组织中没有抗蛋白酶消化的蛋白。以我国正常牛羊为材料 ,制备其脑组织提取物 ,用上述方法和抗体T1进行检测 ,结果没有发现抗蛋白酶K的任何蛋白存在 ,说明没有牛海绵状脑病和羊瘙痒病存在。用 1A8抗体也获得了同样的结果。这些结果表明可以用自制的抗血清检疫牛海绵状脑病和羊瘙痒病。; 李运敏田波张宝云董小平; 关键词：牛海绵状脑病羊瘙痒病抗体免疫印迹

中国对虾非包涵体型杆状病毒核衣壳的分离纯化被引量：3: 2000年; An effective procedure for isolation and purification of nucleocapsids of Penaeus chinensis non-occluded baculovirus (PcNOBV) which has destroyed the Chinese shrimp industry since 1993 was described. Gill, stomach, gut and cuticle epidermis under exoskeleton were excised from cultured P. chinensis diseased with typical white spot syndrome and homogenized in liquid nitrogen with TNE buffer containing PMSF and β-ME. The homogenized mixture was filtered through a 0.45μm millipore filter membrane to remove cell debris and ultracentrifuged to pellet the remaining material.The pellet was suspended in PMTNE buffer and laid onto a handmade CsCl gradient. An obvious viral band was observed in the middle of the gradient. Large amounts of virus nucleocapsids were visualized under electron microscope consistently corresponding to the milk-colored viral band. The viral envelope was all lost after purification. The nucleocapsid was bacilliform averaging 80±13nm×380±24nm in size. The negatively stained PcNOBV nucleocapsids revealed 13-16 conspicuous stripes located periodically perpendicular to the longitudinal axis of the nucleocapsids. Six to seven capsomers of 9 nm in diameter were visualized on each side of the stripe.; 徐洪涛朴春爱王雷杨朵屈建国张宝云候云德; 关键词：中国对虾杆状病毒核衣壳

利用GST融合蛋白表达系统表达人PrP蛋白被引量：4: 1999年; 目的研究与人类海绵状脑病发病有关的膜蛋白ＰｒＰｃ的生物学功用，同时以其为抗原建立有效的免疫学诊断方法。方法采用ＰＣＲ扩增并克隆２例中国人ｐｒｐ基因，经ＤＮＡ序列分析后，亚克隆至ＧＳＴ融合蛋白表达质粒。结果１例正常人ｐｒｐ基因带有点突变，导致形成终止密码，另１例ｐｒｐ基因序列与已发表的标准ｐｒｐ基因序列相同。在ＧＳＴ融合蛋白表达系统中，标准及突变ｐｒｐ基因可有效地表达完整及缺损的ＰｒＰ蛋白。Ｗｅｓｔｅｒｎ蛋白转印试验证实，所表达的ＧＳＴＰｒＰ融合蛋白具有良好的免疫反应性。结论人ｐｒｐ基因能在大肠杆菌ＧＳＴ融合蛋白表达系统中得到高效地表达。; 赵霞董小平王长安张宝云洪涛; 关键词：朊病毒

羊瘙痒因子263K毒株感染金黄地鼠后鼠脑组织中检出PrP-res蛋白及其神经病理学研究被引量：28: 2001年; 羊瘙痒病是累及山羊及绵羊的可传播海绵状脑病。为了观察羊瘙痒因子 (Scrapie)的病原特征及病理组织改变特点 ,将羊瘙痒因子 2 6 3K毒株颅内接种至金黄地鼠。经过 81～ 110天的潜伏期 ,89%的动物发病 (17/19只 )。对发病地鼠的神经病理学检测发现 ,海绵状空泡变性的检出率为 5 9% ,淀粉样斑的检出率为 17 6 %。利用免疫组化和蛋白酶消化后的Westernblotting检测证实 ,10 0 %的发病地鼠的脑组织中都出现蛋白酶抗性朊蛋白 (PrP res)。17只发病地鼠脑组织提取物中 ,PrP res的泳动位置和分子量大小完全一致 ,出现两条分子量在 2 5kD～ 31kD的反应带。尝试应用快速玻片印迹法检测病变组织中的PrP res,结果显示 ,与常规固定包埋切片的免疫组化检出效果相似。这提示脑组织印片法可成为临床检测克雅氏病 (Creutzfeldt Jacobdisease ,CJD)患者脑组织活检标本中PrP res的快速、有效的方法。羊瘙痒因子 2 6 3K成功感染金黄地鼠再次证明 ,金黄地鼠是TSE感染因子良好的动物模型 ,发病率高 ,潜伏期短 ,发病动物PrP res的检出率明显高于典型病理改变的检出率。新生成的PrP res的电泳类型与接种的TSE因子有关 ,与宿主的个体差异无关 ,提示TSE感染因子的确存在“株”的现象。; 孙宪锋董小平张宝云侯星生胥爱源赵同兴洪涛; 关键词：羊瘙痒病

张宝云

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