屈建国
- 作品数：86 被引量：523H指数：11
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- SARS-CoV在Vero细胞培养中的多形性特征
- 2006年
- 为揭示SARS相关冠状病毒（SARS—associated coronavirus，SARS-CoV）的复制特点，并探讨该病毒的致病机制，利用负染电子显微镜（EM），超薄切片EM和免疫EM技术研究了SARS-CoV在Vero细胞E的形态学特征。结果显示，成熟病毒颗粒多为圆形或椭圆形，直径80～120nm，包膜上有放射状排列的纤毛样突起，长约20nm，基底窄。此外可见哑铃形、肾形及“钉子样”等多形性成熟病毒颗粒，这屿颗粒能与病人恢复期血清和抗S蛋白抗体反应。细胞内病毒颗粒多位于包涵体内，呈显著的多形性，直径为20～400nm，其形状可分为：①圆形、肾形或椭圆形；②管样结构；③不规则形，如三角形、哑铃形等，另外可见一种特殊的分枝样颗粒。颗粒电子密度不一，有实心和空心两种，其中守心颗粒周边的电子密度高。还观察到螺旋形的病毒核衣壳结构。
- 王健伟任丽丽屈建国孙异临陈良标洪涛
- 关键词：形态学特征细胞培养
- 蓝舌病毒L3基因的克隆与表达被引量：2
- 1999年
- 目的 通过高效表达，研究蓝舌病毒（ＢＴＶ） ＶＰ３ 的功能，为后续ＢＴＶ病毒样颗粒的装配作准备。方法 克隆出完整的ＢＴＶ１３ Ｌ３ 基因，将其插入杆状病毒表达载体进行表达。结果 获得了含有全长Ｌ３ 基因的克隆，ＶＰ３ 在昆虫细胞中得到了高效表达，表达蛋白占细胞总蛋白的１０％ ～１５％ ，ＶＰ３ 与ＶＰ７ 共表达可装配出ＢＴＶ 核心样颗粒。结论 在昆虫细胞中表达ＢＴＶＶＰ３ 蛋白具有生物学活性。
- 王健伟姜慧英温乐英屈建国赵同兴洪涛
- 关键词：蓝舌病毒克隆杆状病毒
- 人甲胎蛋白启动子控制HIV-1Vpr表达的重组腺病毒体内抑瘤效果研究被引量：1
- 2006年
- 目的:研究人甲胎蛋白启动子控制表达HIVVpr基因的重组腺病毒对裸鼠肝癌模型的肿瘤组织生长抑制作用,探讨其应用于肝癌基因治疗的可行性。方法:将人甲胎蛋白启动子控制表达HIVVpr基因的重组腺病毒(rvAdAFP-Vpr)直接注射到利用BEL-7402细胞建立的肝癌裸鼠模型瘤体内,同时往裸鼠腹腔内注射环磷酰胺(CTX),经过1个月的治疗,利用肿瘤生长曲线、增殖指数、凋亡指数等指标,观察rvAdAFP-Vpr对肝癌组织生长抑制的效果。结果:人甲胎蛋白启动子控制表达HIVVpr基因的重组腺病毒在肝癌组织中表达了Vpr蛋白,rvAdAFP-Vpr注射明显诱导肿瘤细胞凋亡,抑制了体内肝癌组织的生长,rvAdAFP-Vpr治疗组和rvAdAFP-Vpr+CTX治疗组抑瘤率分别达到41%和66.7%,与空白对照组和rvAd-null组相比,具有统计学意义,差异显著(P<0.05,P<0.01),两组的Ki-67指数和凋亡指数相比,对照组和空腺病毒载体(rvAd-null)组同样具有统计学意义,差异显著(P<0.05,P<0.01)。结论:人甲胎蛋白启动子控制表达HIVVpr基因的重组腺病毒rvAdAFP-Vpr通过引起肝癌细胞凋亡,有效抑制了体内肝癌组织的生长。本研究结果为HIV-1Vpr应用于肝癌治疗提供了依据。
- 魏强王健伟屈建国赵玉琪洪涛
- 关键词：重组腺病毒甲胎蛋白启动子基因治疗
- 7型腺病毒疫苗株87mu-97.4mu片段核苷酸序列分析被引量：3
- 1998年
- 目的获得７型腺病毒（Ａｄ７）疫苗株８７ｍｕ－９７．４ｍｕ核苷酸序列，分析该区段的基因结构和功能。方法应用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧法进行核苷酸序列分析。结果Ａｄ７疫苗株８７ｍｕ－９７．４ｍｕ全长３６９８个核苷酸，推测编码纤维蛋白（３２５个氨基酸）和Ｅ３区１５．４ｋＤ蛋白，Ｅ４区５个蛋白（ＯＲＦ１４．２，ＯＲＦ１５．７，ＯＲＦ８．１，ＯＲＦ４２．８和ＯＲＦ１０．３）。
- 周杰昊屈建国石长信彭瑚洪涛
- 关键词：腺病毒7型腺病毒克隆核苷酸
- 密码子优化增强轮状病毒VP6基因重组腺病毒的体液免疫和攻毒保护效果的研究被引量：1
- 2012年
- 目的以表达野生型RVVP6基因的重组病毒rvAdVP6为对照，在小鼠模型上观察基因优化重组腺病毒rvAdVP6（o）的体液免疫效果和攻毒保护效果。方法6到8周雌性BALB／c小鼠随机分组，通过等量病毒（每次108TCID50／只）3次滴鼻免疫，检测3次免疫后的血清抗体；并用鼠轮状病毒进行攻毒实验，检测不同组的免疫保护效果。结果三次免疫rvAdVP6（o）产生的抗VP6血清IgG抗体水平均明显高于rvAdVP6；鼠轮状病毒攻击后检测小鼠的排毒量，发现rvAdVP6（o）免疫组的RV排毒量明显少于rvAdVP6。结论在等量重组腺病毒免疫的情况下，优化后的VP6重组腺病毒在体液免疫和攻毒保护方面，均优于优化前。
- 王敏吴风宋敬东屈建国王健伟洪涛
- 关键词：密码子腺病毒科轮状病毒
- 马尔堡病毒形态特征研究
- 2014年
- 马尔堡病毒(Marburg virus)和埃博拉病毒(Ebola virus)属于丝状病毒科(Filoviridae)成员。该科病毒可导致严重的丝状病毒出血热(Filovirus hemorrhagic fever,FHF),具有成为生物恐怖武器和生物战剂的潜能。为对马尔堡病毒的形态特征进行总结,以期为我国丝状病毒的电镜鉴定提供信息。本研究通过透射电子显微镜技术对马尔堡病毒形态进行观察,以明确其病毒形态特征。研究结果表明,负染后的马尔堡病毒呈现多形性(Pleomorphism),病毒颗粒呈直径均一、长度不等的棒状或丝状及眼镜蛇样、球形、分支状。我国至今尚无分离到丝状病毒的报道,对该病毒的监测、预警具有重要意义。透射电子显微镜技术是鉴定丝状病毒的重要方法之一,明确丝状病毒的形态特征有助于该类病毒的电镜鉴定。
- 宋敬东屈建国洪涛
- 关键词：马尔堡病毒病毒形态
- 白喉毒素DT_(386)片段的表达纯化及细胞毒性研究被引量：3
- 2004年
- 基于白喉毒素 (diphtheriatoxin ,DT)的免疫毒素在临床试验中普遍发现毒性反应 ,但机制尚不清楚。据推测 ,免疫毒素的细胞毒性源自DT的酶活性区和跨膜转运区 (N端 386～ 388个氨基酸 ,DT3 86)。为考察DT3 86毒素片段与毒性反应的关系 ,将DT3 86在E .coli中进行了表达、纯化 ,并初步观察了其细胞毒性。经Q SepharoseFF离子交换层析 ,获得纯度达 95 %的DT3 86蛋白。DT3 86杀伤HL60细胞的IC50 为 2× 1 0 -6mol L ,比免疫毒素的特异杀伤毒性低 1 0 0倍以上 ;但在高浓度下 ,DT3 86可非特异性杀伤多种细胞。小鼠体内实验初步结果表明 ,给药剂量高则体内毒性反应强烈。结果提示免疫毒素的剂量限制毒性与DT3 86的非特异细胞毒性有一定相关性 。
- 欧阳晶王健伟屈建国洪涛
- 关键词：白喉毒素细胞毒性免疫毒素
- 轮状病毒不同基因型NSP4的免疫原性研究
- 2006年
- NSP4作为轮状病毒的致泻相关蛋白,其在疫苗研究中的作用近年来深受瞩目。为比较不同基因型非结构蛋白NSP4的免疫原性,构建了四种基因型的重组表达质粒pCI-9786、pCI- 97S36、pCI-97S34和pCI-97SZ8,在细胞水平进行瞬时表达检测后,进一步免疫小鼠,检测血清IgG 抗体滴度和亚型。结果表明利用真核表达质粒表达的NSP4蛋白既可以诱导体液免疫反应,又可以诱导细胞免疫反应,但以体液免疫为主,不同基因型NSP4具有不同的免疫原性。
- 王大燕王健伟魏强王彦斌屈建国洪涛
- 关键词：轮状病毒NSP4免疫原性疫苗
- 以Ad41为载体的轮状病毒VP6基因重组腺病毒的遗传稳定性研究
- 2012年
- 目的对前期制备的以Ad41为载体的可表达A组轮状病毒VP6基因的非复制型重组腺病毒进行连续传代，观察其遗传稳定性，为进一步研发疫苗做准备。方法在293TE7细胞上，对本室前期构建的重组腺病毒rvAd41-VP6（O）连续传代14代，每隔2代通过PCR鉴定VP6（O）基因的插入，通过WesternBlot技术鉴定目的蛋白的表达。结果PCR分析表明，rvAd41-VP6（O）在连续传代的过程中，其基因组中都有特异性的VP6基因稳定整合；WesternBlot证实了rvAd41-VP6（O）可稳定表达VP6，这说明rvAd41-VP6（O）有较好的遗传稳定性。结论重组腺病毒rvAd41-VP6（O）在体外具有良好的生物学性质，可用于下一步动物免疫研究。
- 王敏陈多灵宋敬东屈建国鲁茁壮赵蔚明洪涛
- 关键词：腺病毒轮状病毒属基因
- 非复制型重组腺病毒在293细胞上连续传代的遗传稳定性被引量：2
- 2008年
- 目的观察基于AdEasy系统的重组腺病毒在体外连续传代过程中的遗传稳定性。方法以基于AdEasy系统的4种表达轮状病毒基因的复制缺陷型重组腺病毒为模型，在293细胞上对其进行连续传代20代。每隔5代用PCR方法检测目的基因的存在和回复突变的复制型腺病毒（RCA）的产生，用Western Blot方法检测重组腺病毒携带的目的基因的表达。结果在20代的连续传代过程中，插入的轮状病毒基因一直稳定存在和表达。重组腺病毒rvAdG2VP7（o）在连续传代15代后，重组腺病毒rvAdG1VP7（o）和rvAdG2VP7（o）在连续传代20代后检测到复制型腺病毒的存在。结论重组腺病毒在293细胞中连续传代具有良好的遗传稳定性，传代10代以内一般检测不到RCA，可望满足基因治疗药物和腺病毒载体疫苗的研发需要。
- 王敏采弋田蓉屈建国王健伟洪涛
- 关键词：腺病毒科细胞系遗传学微生物
