赵荣荣
- 作品数：17 被引量：21H指数：3
- 供职机构：中国食品药品检定研究院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家高技术研究发展计划“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 非洲绿猴肾细胞中猪圆环病毒1型的检测被引量：1
- 2017年
- 目的建立轮状病毒疫苗污染事件中的外源因子猪圆环病毒1型（porcine circovirus type1，PCV1）感染非洲绿猴肾细胞（Vero细胞）的检测方法。方法培养感染PCV1的Vero细胞6d后，通过定性PCR、定量PCR、电子显微镜（电镜）检查和原位杂交检测PCV1的复制与增殖。结果从感染PCV1的Vero细胞培养物提取的DNA，其PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳可见特异性条带；定量PCR检测显示，感染6d后病毒总拷贝数是感染前的794．3倍；定性和定量PCR的最低检出浓度均为10^2.0拷贝／ml；电镜观察到PCV1特征性形态病毒颗粒；原位杂交检测到出现深色阳性信号的PCV1阳性细胞。结论PCV1感染Vero细胞后的复制增殖可以通过上述方法进行检测。
- 刘艳于晴川杜加亮刘悦越李东高加梅范行良张韵祺赵荣荣国秦
- 关键词：VERO细胞显微镜检查原位杂交
- 猪圆环病毒1型病毒核酸参考品及其制备方法与应用
- 本发明涉及一种猪圆环病毒1型病毒核酸参考品及其制备方法与应用，所述猪圆环病毒1型病毒核酸参考品从含有猪圆环病毒1型病毒的Rotarix疫苗中，利用Vero细胞传代分离培养，大量扩增，纯化后灭活、分装得到。本发明的有益效果...
- 于晴川国泰刘艳杜加亮刘悦越赵荣荣韩娟韩菲张永
- 文献传递
- 2016—2020年口服脊髓灰质炎减毒活疫苗批签发汇总及质量分析
- 2022年
- 脊髓灰质炎(简称脊灰)是由脊灰病毒感染引起的急性传染病,严重者可瘫痪甚至死亡,全球免疫接种疫苗是消灭脊灰的唯一解决方案[1]。几十年来,口服脊灰减毒活疫苗(oral polio vaccine,OPV)一直是免疫接种的支柱,是根除野生型脊灰病毒工作的重要组成部分。OPV能够在胃肠道中复制,诱导肠道黏膜免疫,并在个体随后接触活病毒时减少病毒脱落,有效建立免疫屏障。
- 刘悦越英志芳赵荣荣范行良王剑锋李长贵
- 关键词：脊髓灰质炎减毒活疫苗批签发
- 测定脊髓灰质炎病毒滴度的结晶紫染色法的建立及验证
- 2020年
- 目的 建立测定脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)滴度的结晶紫染色法,并对该法进行验证。方法 基于PV的半数细胞培养感染量(50% cell culture infective dose,CCID50),用结晶紫染色和酶标仪确定PV的致细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),并验证该法的准确度、精密度、线性范围和耐用性。分别采用建立的结晶紫染色法和传统的显微镜观察法测定66批口服Ⅰ型Ⅲ型脊髓灰质炎减毒活疫苗的病毒滴度,通过Pearson相关分析评价2种检测方法的相关性。将细胞板浸泡液盲传3代,观察培养物的CPE,并通过逆转录PCR确定病毒灭活情况。结果 用建立的方法测定理论滴度8.00、6.00和4.00 lgCCID50/ml的PV样品,回收率为98%~104%。细胞板内和板间测定结果的变异系数(coefficient of variation,CV)为0%~7.85%,同一工作日和不同工作日测定结果的CV分别不超过6.44%和5.27%,不同实验人员测定结果的CV不超过5.10%。该法测定PV滴度的线性范围为2.00~8.00 lgCCID50/ml。该法具有较好的耐用性,以不同细胞浓度(F=1.624,P=0.215)或不同培养时间(F=2.731,P=0.055)培养对PV滴度的测定结果没有影响。该法与显微镜观察法的检测结果具有相关性,Pearson相关系数0.918。实验用细胞板的浸泡液在Hep-2细胞上盲传3代后,培养物未观察到CPE,逆转录PCR测定结果为阴性。结论 建立的结晶紫染色法具有较好的安全性、准确度、精密度和耐用性,适用于口服脊髓灰质炎减毒活疫苗的病毒滴度测定。
- 刘悦越赵岩张韵祺赵荣荣
- 关键词：脊髓灰质炎病毒龙胆紫
- 蚀斑法测定呼吸道合胞病毒滴度的建立和验证
- 2023年
- 目的建立蚀斑法用于呼吸道合胞病毒的病毒滴度测定,并进行验证。方法通过测定样品的病毒滴度,比较滴度结果,筛选最佳覆盖物、覆盖物浓度和病毒孵育时间,从而建立蚀斑法用于测定呼吸道合胞病毒滴度。根据国际人用药品注册技术协调会指导原则和《中华人民共和国药典》要求,验证该方法的准确性、精密性、线性和耐用性。结果采用0.8%微晶纤维素作为覆盖物,病毒孵育2~3 h为建立蚀斑法的最优条件。该蚀斑法测定不同浓度样品病毒滴度的结果相对偏倚均小于10%;试验内和试验间精密性几何变异系数分别为11%和18%;本方法的线性斜率为1.004,相关系数为0.9991;本方法中固定细胞的时间0.5~24 h均适用,差异无统计学意义(F=1.767,P=0.2225)。结论建立的蚀斑法具有较好的准确性、精密性、线性和耐用性,适用于呼吸道合胞病毒的滴度测定。
- 刘悦越赵荣荣赵慧李淑艳英志芳邵铭王剑锋李长贵
- 关键词：呼吸道合胞病毒病毒滴度蚀斑法微晶纤维素
- 筛选诱导肠道病毒71型特异性免疫应答的最短氨基酸基序
- 2021年
- 目的筛选肠道病毒71型(EV71)中和表位,确定诱导机体免疫应答的特定最短氨基酸基序,为合成肽疫苗研发提供理论依据。方法利用噬菌体随机十二肽库淘选EV71中和抗体特异性结合克隆并测序,推导出中和表位的关键序列。合成含有关键序列且N端乙酰化(AC)和C端连接血蓝蛋白(KLH)的系列肽段,免疫小鼠后收集血清,经Western blot、ELISA和中和试验验证肽段的免疫原性以及免疫后血清的中和活性。结果经过3轮淘选和克隆测序后,分析确定关键基序为KQEKDL。Western blot结果表明修饰后的含关键基序的系列肽段免疫小鼠获得的血清与EV71和VP1蛋白均有不同程度结合。ELISA结果表明仅含有最短关键基序的合成肽段(AC-KQEKDL-KLH)免疫后血清对其余3条肽段及EV71的反应最强。中和试验结果表明该肽段免疫后血清的中和效价也最高。结论利用噬菌体随机肽库技术成功筛选出EV71中和表位,确定KQEKDL关键基序可能是诱导机体免疫应答的特定最短氨基酸序列,为了解免疫应答机制、免疫原性评价及多肽疫苗的研发提供理论依据。
- 刘艳高文超杜加亮杜加亮刘悦越于晴川赵岩赵荣荣范行良范行良国泰
- 关键词：肠道病毒71型中和表位基序疫苗
- 诺如病毒病毒样颗粒疫苗免疫小鼠诱导的体液和黏膜免疫应答被引量：2
- 2021年
- 目的观察GⅠ.1/GⅡ.4诺如病毒(Norovirus,NoV)病毒样颗粒疫苗免疫小鼠诱导的体液和黏膜免疫应答。方法7周龄BALB/c小鼠20只被随机分为对照组和疫苗组,每组10只。疫苗组每只小鼠腹腔注射0.1 ml疫苗,含GⅠ.1和GⅡ.4型衣壳蛋白VP1各10μg及0.08 mg氢氧化铝佐剂,对照组腹腔注射0.08 mg/0.1 ml氢氧化铝佐剂,第0,21天免疫。首次免疫后第7,14,21,28,35天,采集血清和粪便,测定血清GⅠ.1和GⅡ.4型IgG、IgG1、IgG2a、IgM、IgA、组织血型抗原(histoblood group antigen,HBGA)阻断抗体及粪便IgA。采用SPSS 23.0软件统计两组间和不同时间点各型抗体水平的差异。结果疫苗组小鼠第1剂免疫后第7天产生较高水平的NoV型特异性IgG、IgG1、IgG2a和IgM,IgA在第2剂免疫后第7天明显升高。疫苗组的各型抗体均高于对照组,两组间差异均有统计学意义(P<0.01)。疫苗组不同时间点的抗体,除GⅠ.1型IgG和IgG1外,其他差异均有统计学意义(P<0.01)。疫苗组首剂免疫后第28天和第35天的各型血清IgA抗体水平差异无统计学意义(P>0.05)。首剂免疫后第28天,粪便GⅠ.1型和GⅡ.4型IgA分别为160和80,血清GⅠ.1型和GⅡ.4型抗体阻断效价50分别为400和800。结论GⅠ.1/GⅡ.4诺如病毒疫苗可诱导小鼠产生体液和黏膜免疫应答,可能对NoV引起的疾病具有保护作用。
- 刘悦越赵荣荣赵一荣张韵祺杜加亮
- 关键词：诺如病毒病毒样颗粒黏膜免疫抗体应答
- 诺如病毒VP1蛋白病毒样颗粒在毕赤酵母中的分泌表达被引量：4
- 2020年
- 目的探讨诺如病毒(Norovirus,NoV)VP1蛋白的病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)在毕赤酵母表达系统中分泌表达的可行性。方法用pPICZa-A表达载体和X-33毕赤酵母株进行NoV GⅡ.4和GⅡ.17型VP1蛋白的分泌表达,并对阳性菌株进行Mut表型筛选。同时优化起始pH(5.0、6.0、7.0、8.0)、甲醇终浓度(0.5%、1.0%、1.5%、2.0%)及发酵时间(24、48、72、96、120 h)3个表达条件。取原始及传代10代菌株,采用优化条件进行发酵,于诱导0~60 h间,通过双标准曲线实时荧光定量PCR法测定外源基因拷贝数。发酵产物经蔗糖密度梯度离心纯化后,检测其浓度及纯度,并观察VLP的形态。结果表达目的蛋白的重组酵母菌株均为Mut+型。最佳发酵pH为7.0,甲醇终浓度为1%,发酵时间为72 h。菌株传代后未发生基因缺失,整合基因在10代内稳定性良好。GⅡ.4及GⅡ.17型VP1纯度均约85%,浓度分别为133和165μg/mL,VP1蛋白均可自发组装成直径约40 nm的VLP颗粒,形态与天然病毒相似。结论用毕赤酵母表达系统进行NoV VP1蛋白VLP分泌表达是可行的。
- 杜加亮古琼刘悦越于晴川赵荣荣高加梅李启明刘艳国泰
- 关键词：诺如病毒VP1蛋白病毒样颗粒毕赤酵母分泌表达
- 脊髓灰质炎减毒活疫苗对轮状病毒减毒活疫苗的免疫原性的影响研究被引量：3
- 2019年
- 目的评价同时接种脊髓灰质炎减毒活疫苗是否会影响轮状病毒减毒活疫苗的免疫原性。方法以葛兰素史克公司生产的Rotarix作为研究对象,将接种人群随机分为两组。均在第0天、第1个月口服接种两剂Rotarix,并根据国家规划接种计划在第0天、第1个月和第2个月口服接种脊髓灰质炎减毒活疫苗(OPV)。Rotarix和OPV在不同天接种为间隔接种组,Rotarix和OPV在同一天接种为同时接种组。分别在第0天、第2个月、第12个月采集血清,用酶联免疫吸附法测定血清RV-IgA。通过统计分析两组的RV-IgA血清阳转率和水平分布是否有统计学差异。结果间隔接种和同时接种组的第2个月血清RV-IgA阳转率分别为73.84%和63.95%,差异有统计学意义(P<0.05);两组的免疫后RV-lgA抗体几何平均浓度(GMC)分别为97 EU/ml和90 EU/ml,差异无统计学意义(P>0.05)。与同时接种组相比,间隔接种组第12个月的血清RV-IgA阳转率和GMC均较高,差异有统计学意义(P<0.05).结论同时接种脊髓灰质炎减毒活疫苗会影响轮状病毒减毒活疫苗的免疫应答,尤其是RV-IgA抗体水平的维持。
- 刘悦越刘艳杜加亮于晴川高加梅赵荣荣国泰
- 关键词：脊髓灰质炎病毒轮状病毒疫苗免疫原性
- 不同剂量双价诺如病毒疫苗接种小鼠后的体液免疫应答
- 2021年
- 目的评价不同剂量的GⅠ.1/GⅡ.4诺如病毒(norovirus,NoV)病毒样颗粒(virus-like particles,VLP)疫苗在小鼠体内的体液免疫应答。方法将GⅠ.1/GⅡ.4诺如病毒疫苗稀释成50、25、8.3和2.8μg/0.5 ml,形成4个剂量组,同时设氢氧化铝佐剂为对照组。每组免疫10只7周龄BALB/c小鼠,每只小鼠腹腔注射0.5 ml疫苗或对照,免疫程序为0、21 d免疫。第35天采血,测定血清中GⅠ.1和GⅡ.4型抗体的组织血型抗原(histoblood group antigen,HBGA)阻断效价,采用SPSS23.0软件统计各组间抗体水平的差异。结果首次免疫后第35天,50、25、8.3μg/0.5 ml剂量组的GⅠ.1型和GⅡ.4型HBGA阻断抗体均为阳性。50μg/0.5 ml剂量组的GⅠ.1和GⅡ.4型抗体几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)分别为488(95%CI:249~955)、489(95%CI:302~790);25μg/0.5 ml剂量组的GMT分别为278(95%CI:106~728)、738(95%CI:299~1820);8.3μg/0.5 ml剂量组的GMT分别为300(95%CI:158~570)、486(95%CI:222~1068)。2.8μg/0.5 ml剂量组的GⅠ.1和GⅡ.4型阻断抗体阳性率分别为40%和70%,GMT分别为23(95%CI:10~51)、85(95%CI:24~304),对照组抗体均为阴性。50、25、8.3μg/0.5 ml剂量组的抗体水平与对照组组间差异均有统计学意义(校正P<0.05),3个组的GⅠ.1型抗体与2.8μg/0.5 ml剂量组的组间差异也有统计学意义(校正P<0.05),25μg/0.5 ml剂量组的GⅡ.4型抗体与2.8μg/0.5 ml剂量组的差异有统计学意义(校正P<0.05)。结论(50~8.3)μg/0.5 ml剂量组的GⅠ.1/GⅡ.4诺如病毒VLP疫苗均可诱导小鼠产生相应的体液免疫应答。
- 刘悦越赵荣荣张韵祺杜加亮
- 关键词：诺如病毒疫苗病毒样颗粒体液免疫
