国泰 作品数:51 被引量:84 H指数:5 供职机构: 中国食品药品检定研究院 更多>> 发文基金: 国家科技重大专项 国家高技术研究发展计划 “重大新药创制”科技重大专项 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 更多>>
柯萨奇病毒A组16型感染性滴度检测用国家参考品的制备及标定 被引量:2 2016年 目的 制备柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CA16)感染性滴度检测用国家参考品,为CA16疫苗生产过程中的病毒滴度控制和CA16疫苗的免疫效果评价提供国家参考品.方法 将验证合格的CA16(C1亚型)培养液分装(0.5 ml/支)制成候选参考品.3个独立实验室分别对候选参考品进行协作标定,用细胞培养法检测CA16感染性滴度,用Behrens-K(a)rber法计算半数细胞感染量(50% cell culture infective does,CCID50).同时,将CA16参考品分别置于-20、4、22~25(室温)和37℃条件下或反复冻融,进行热稳定性、长期稳定性和冻存稳定性研究.结果 制备的CA16参考品的病毒滴度为(6.80±0.95) lgCCID50/ml.CA16参考品于-60℃保存12个月、-20℃保存6个月和4℃保存28 d后的病毒滴度无显著下降,表明稳定性较好;在22~25℃(室温)和37℃条件下,CA16参考品每天的病毒滴度损失率分别为3.4%和4.4%,而且分别保存27和21 d后病毒滴度无明显下降;对CA16参考品反复冻融的病毒滴度损失率为4.8%/次.结论 成功制备了CA16感染性滴度检测用候选国家参考品,将CA16参考品赋值确定为(6.80±0.95) lgCCID50/ml. 杜加亮 刘悦越 于晓方 张文艳 贾双双 刘艳 赵岩 国泰关键词:肠道病毒属 国家参考品 丙型肝炎病毒核酸检测试剂国家参考品的制备 2014年 目的 制备丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)核酸检测试剂国家参考品。方法 收集我国不同地区的献血员血浆,用核酸筛查试剂筛查HCV RNA情况,并通过PCR法对人细小病毒B19进行定性测定,筛选阳性参考品、阴性参考品和最低检出限参考品。对HCV RNA阳性样本进行基因分型;3家实验室以WHO HCV RNA国际标准品为对照品,对参考品进行协同标定;并检测参考品的稳定性和适用性。结果 筛选出10份HCV阳性,而HBV、HIV、B19均为阴性的样本作为阳性参考品,其中有6份为1b型,1份为2a型,1份为3a型,1份为3b型,1份为6a型;10份HCV、HBV、HIV、B19均为阴性的样本作为阴性参考品;1份冻干的HCV RNA阳性,HBV、HIV、B19为阴性的样本作为最低检出限参考品,基因型为1b型。3个实验室经协作标定,阴性参考品的结果均为阴性,阳性参考品的HCV RNA浓度在104~105IU/ml之间,最低检出限参考品的HCV RNA浓度为6.18×106IU/ml。-20℃放置4周、4℃放置12 d、室温放置7 d以及反复冻融5次对参考品的HCV RNA含量无明显影响。参考品适用于目前国内市场上主要国产血液筛查和定量试剂的检测。结论 制备了HCV核酸检测试剂国家参考品,可用于HCV核酸诊断试剂的质量评价和控制。 刘悦越 刘艳 杜加亮 范行良 高加梅 国泰关键词:丙型肝炎病毒 核酸 参考品 RNA病毒疫苗株遗传稳定性 被引量:3 2016年 病毒性疫苗种子批及成品的遗传稳定性与疫苗有效性、安全性密切相关.RNA病毒的高突变率和高重组率更易造成其遗传不稳定,因此,在RNA病毒疫苗的研发和生产中,毒株遗传稳定性的检测十分重要.随着分子生物学技术的发展,遗传稳定性的检测方法日渐丰富,同时也出现了很多能控制或提高疫苗遗传稳定性的方法.此文对RNA病毒疫苗株遗传稳定性及其影响机制、检测和提高疫苗株遗传稳定性方法的研究进展做一综述. 宣博 刘悦越 段凯 国泰 杨晓明关键词:疫苗 RNA病毒 我国人类手足口病流行病学概述 手足口病是引起我国5岁以下儿童发病和死亡病例数最多的国家法定丙类报告传染病,每年都会导致严重的经济和社会负担,其主要病原体为EV71和CA16。我国自2008年将手足口病列入法定报告丙类传染病以来,发病/死亡人数和流行趋... 杜加亮 高加梅 国泰关键词:手足口病 疫苗 流行病学 文献传递 轮状病毒感染的免疫反应 轮状病毒是引起儿童严重腹泻的主要病原体,是一个三层结构、无包膜的R NA大病毒颗粒。自发现以来,轮状病毒感染的免疫反应一直备受关注,在病原体入侵时固有免疫是第一道屏障,最终启动适应性免疫产生高滴度的中和抗体。高滴度的中和... 兰志岭 国泰 李向明关键词:轮状病毒 固有免疫 适应性免疫 筛选诱导肠道病毒71型特异性免疫应答的最短氨基酸基序 2021年 目的筛选肠道病毒71型(EV71)中和表位,确定诱导机体免疫应答的特定最短氨基酸基序,为合成肽疫苗研发提供理论依据。方法利用噬菌体随机十二肽库淘选EV71中和抗体特异性结合克隆并测序,推导出中和表位的关键序列。合成含有关键序列且N端乙酰化(AC)和C端连接血蓝蛋白(KLH)的系列肽段,免疫小鼠后收集血清,经Western blot、ELISA和中和试验验证肽段的免疫原性以及免疫后血清的中和活性。结果经过3轮淘选和克隆测序后,分析确定关键基序为KQEKDL。Western blot结果表明修饰后的含关键基序的系列肽段免疫小鼠获得的血清与EV71和VP1蛋白均有不同程度结合。ELISA结果表明仅含有最短关键基序的合成肽段(AC-KQEKDL-KLH)免疫后血清对其余3条肽段及EV71的反应最强。中和试验结果表明该肽段免疫后血清的中和效价也最高。结论利用噬菌体随机肽库技术成功筛选出EV71中和表位,确定KQEKDL关键基序可能是诱导机体免疫应答的特定最短氨基酸序列,为了解免疫应答机制、免疫原性评价及多肽疫苗的研发提供理论依据。 刘艳 高文超 杜加亮 杜加亮 刘悦越 于晴川 赵岩 赵荣荣 范行良 范行良 国泰关键词:肠道病毒71型 中和表位 基序 疫苗 口服轮状病毒活疫苗接种无菌兔的免疫原性研究 目的:探讨单价羊株轮状病毒活疫苗(LLR)在无菌兔体内的的免疫原性效果,建立研究人RV疫苗保护性免疫机制的新型动物模型。
方法:采用无菌兔傲为实验模型,随机将无菌兔分为实验组和空白对照组,实验组接种LLR疫苗。... 李东 国泰 刘悦越 刘艳 张向颖 谷金莲 祁自柏 王军志 杨晓明关键词:轮状病毒 免疫原性 流式细胞仪 文献传递 口服Ⅰ型Ⅲ型脊髓灰质炎减毒活疫苗的稳定性 被引量:2 2019年 目的考察口服Ⅰ型Ⅲ型脊髓灰质炎减毒活疫苗在不同温度和pH环境下的稳定性。方法将6批疫苗分别于2~8℃放置6个月、22~25℃放置7 d、37℃放置7 d、-20℃放置27、30、33个月,或反复冻融5次;将疫苗pH调至3.0~10.0。采用细胞培养半数感染量(cell culture infective dose 50%,CCID50)法检测病毒总滴度及分型滴度。结果口服二价脊髓灰质炎减毒活疫苗在2~8℃保存6个月,22~25℃保存5 d,37℃保存2 d,反复冻融5次,-20℃保存27个月,pH 3.0~10.0环境下,疫苗效力均符合质量标准。结论疫苗的保存温度及时间对其稳定性均有影响。 刘悦越 赵岩 杜加亮 张韵祺 范行良 刘艳 于晴川 高加梅 国泰关键词:脊髓灰质炎 二价疫苗 稳定性 2019年国产口服轮状病毒活疫苗质量控制中病毒滴度趋势分析 被引量:1 2021年 目的对口服轮状病毒活疫苗(oral rotavirus vaccine, ORV)质量控制中的病毒滴度进行趋势分析。方法利用CCID50+ELISA检测国内企业2019年生产的ORV的关键控制指标(病毒滴度),根据检测结果计算均值,建立警戒限(均值■和行动限(均值■,绘制趋势分析图,进行连续性和周期性趋势分析;并将中国食品药品检定研究院(National Institutes for Food and Drug Control, NIFDC)病毒滴度结果与企业病毒滴度结果进行比较。结果病毒滴度趋势分析显示NIFDC检测结果未见超趋势(out of trend, OOT),企业检测结果有1次连续10批以上结果高于平均值,经偏差调查证实生产、质控和检测环节均未发现异常情况,分析原因可能是其中有多批成品来自同一批原液。2019年度和2018年度比较结果显示年度间具有较好的一致性。NIFDC与企业病毒滴度结果显示均检测结果差异没有统计学意义(P=0.082 7,P>0.05);Bland-Altman法统计显示97%批次的检测结果的差值位于2倍标准差(2s)以内。结论对2019年国产ORV病毒滴度的趋势分析反映出该制品的批间一致性以及生产工艺的稳定性良好。 刘艳 王成宝 国泰 姜宝芹 杜加亮 高加梅 于晴川 张永 石岩 梁争论关键词:轮状病毒 疫苗 病毒滴度 进口轮状病毒疫苗RotaTeq的热稳定性 被引量:3 2020年 目的分析进口轮状病毒(rotavirus,RV)疫苗RotaTeq(RV5)的热稳定性。方法采用荧光定量PCR法分别测定22~25和37℃条件下放置不同时间的RV5疫苗滴度,以参考疫苗株滴度为标准,计算RV5疫苗5个型别毒株(G1、G2、G3、G4、P1)滴度和总滴度。同时扩增RV5疫苗G3型毒株的VP7序列,并与GenBank中登录的原型病毒株r G3的VP7序列进行比较。结果22~25℃条件下,G1、G2、G3、G4、P1型毒株滴度和总滴度每天下降速度分别为3.51%、2.26%、3.19%、5.22%、3.18%和3.61%,各型别毒株间差异无统计学意义(P>0.05);37℃条件下,G3型毒株滴度的下降速度(31.20%/h)明显高于其他型别毒株(G1、G2、G4、P1下降速度分别为每小时0.75%、0.31%、1.08%和2.07%),差异有统计学意义(P<0.05)。G3型毒株滴度于37℃的半衰期仅为0.07 d,其原型株rG3的半衰期可达2.10 d。RV5疫苗G3型疫苗株与其原型株的差异包括散在的氨基酸差异(F32L、T69A、L83F、I118T、D151G、P275L)及位于5′UTR(T25C)和3′UTR(G1041A、A1045G、G1046A、G1047A、C1048T、A1053T)较聚集的核苷酸差异。结论RV5疫苗中各型别毒株在22~25℃时热稳定性良好,但在37℃时G3型疫苗株是影响RV5疫苗热稳定性的关键,位于VP7 UTR的核苷酸突变可能是导致其热稳定性降低的主要原因。 杜加亮 刘艳 焦洋 于晴川 刘悦越 赵荣荣 高加梅 范行良 国泰关键词:轮状病毒 热稳定性 非翻译区