夏冬
- 作品数：9 被引量：16H指数：2
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 鼻病毒非结构蛋白2B引起细胞自噬产生的研究被引量：1
- 2019年
- 目的利用miniSOG标签观察鼻病毒非结构蛋白2B蛋白在细胞中定位及自噬体产生。方法将非结构蛋白2B和miniSOG进行融合表达构建pcDNA3.1-2B-miniSOG-flag质粒,将质粒转染HEK293细胞,在荧光显微镜下,2B-miniSOG阳性细胞进行固定、光氧化及超薄切片制备,电镜下观察2B-miniSOG蛋白在细胞中的定位及细胞超微结构变化,Westernblot(WB)检测LC3的表达。结果2B-miniSOG蛋白在荧光显微镜下发出绿色荧光,WB检出自噬标志性蛋白LC3-II表达增加。电镜下观察到蛋白定位于线粒体,细胞中出现大量囊泡样结构,可观察到自噬体和自噬溶酶体。结论鼻病毒非结构蛋白2B可引起细胞自噬发生。
- 宋娟邹小辉罗小暖宋芹芹史冰田夏冬刘宓夏志强鲁茁壮韩俊
- 关键词：自噬
- 2018年冬季安徽蚌埠急诊科住院患者鼻病毒感染分析被引量：1
- 2019年
- 目的探讨急诊科住院患者人鼻病毒(human rhinovirus,HRV)感染发生情况,为临床急诊科预防HRV感染提供依据。方法以急诊科2018年11月~12月收治的94例急诊患者为研究对象,采集患者咽拭子,开展HRV检测和进化分析。结果94例急诊患者中17例HRV检测阳性,阳性率为18.09%;2018年11~12月出现多种HRV流行,分别为A9、A10、A16、A31、A73、B42和C3型;老年住院患者的HRV感染风险大;HRV感染可致病程增加。结论2018年11月至2018年12月,安徽蚌埠急诊科出现多种HRV血清型感染病例,HRV易于感染老年住院患者。
- 陆国玉佘剑雄宋娟王文军陶言言夏志强肖恒史冰田刘宓夏冬韩俊
- 关键词：鼻病毒急诊科住院患者
- 毒胡萝卜素通过ATF6途径促进柯萨奇病毒B3复制的初步研究
- 2019年
- 目的 探讨内质网应激诱导剂毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)对柯萨奇病毒B3(coxsachievirus B3,CV-B3)病毒复制的影响.方法 将10个MOI的病毒感染HeLa细胞后,在病毒的吸附和补液过程中加入0.25μmol/L的TG,分别在药物刺激的3 h、6 h和9 h收集病毒感染的样品.通过荧光定量PCR(qRT-PCR)检测CV-B3病毒复制效率;分别使用0.25μmol/L、0.08μmol/L和0.025μmol/L的TG刺激CV-B3病毒感染细胞,通过噬斑形成试验进一步验证TG对病毒复制的影响;通过内质网应激3条通路的抑制剂分别作用于TG刺激的病毒感染细胞,通过qRT-PCR检测病毒量的变化.结果 qRT-PCR结果显示,TG刺激后,相对于对照,病毒量在3 h没有发生明显的变化;在病毒感染的6 h和9 h,病毒量分别增加了2.5倍和158.6倍.噬斑形成试验显示,TG作用后,病毒的噬斑明显增大.通过加入内质网应激的3条通路PERK、ATF6和IRE1的抑制剂GSK2656157、AEBSF和STF-083010发现,加入ATF6的抑制剂AEBSF 6 h后,病毒增加量下降了90%;AEBSF作用9 h后,病毒增加量下降了55%.结论 TG能够通过ATF6途径诱导内质网应激并有效的促进CV-B3病毒的复制.
- 宋芹芹罗小暖宋娟夏冬史冰田刘宓夏志强王文军曹天宇程恒顺韩俊
- 关键词：毒胡萝卜素内质网应激
- 16型鼻病毒感染引起Hl-HeLa细胞的内源性siRNA变化被引量：1
- 2019年
- 目的观察鼻病毒16型感染Hl-HeLa细胞后的细胞内源性siRNA变化。方法将鼻病毒16型感染Hl?HeLa敏感细胞12 h、24 h、36 h后,利用高通量测序(二代测序)筛选出差异siRNA,再通过qRT-PCR方法进行验证。结果高通量测序分析鼻病毒感染的不同时间点均有差异性siRNA产生,其中novel_sir907和novel_sirl950在三个时间点均降低;进一步通过qRT-PCR验证发现,与细胞对照相比novel_sir907在病毒感染12h、24h、36h下降,novel_sirl950在12 h升高后在24h 、36h降低。结论 HRV16感染细胞诱导了内源性siRNA的含量发生变化。
- 宋娟刘宓程恒顺史冰田王文军夏志强宋芹芹曹天宇夏冬韩俊
- 关键词：SIRNA高通量测序
- 指环病毒7型、8型与10型实时荧光定量PCR检测体系的建立
- 2021年
- 目的建立指环病毒7型(TTV7)、8型(TTV8)、10型(TTV10)实时荧光定量PCR检测体系并进行临床验证。方法本研究根据GenBank已发布的TTV7、TTV8、TTV10基因序列设计特异性引物,构建重组质粒pMD19-T-TTV7、pMD19-T-TTV8、pMD19-T-TTV10,以其作为阳性标准品建立了基于FAM-Eclipse探针法的实时荧光定量PCR检测,并进行特异性、敏感性试验与临床样本检测。结果TTV7、TTV8、TTV10的实时荧光定量PCR检测体系标准曲线方程分别为y=-0.3402x+114.7800、y=-0.3511x+114.9400、y=-0.3489x+115.0200,相关系数都在0.99以上,与其他病毒无交叉反应,检测敏感性分别为108拷贝/μl、84拷贝/μl、98拷贝/μl。在临床小儿血清样本中的检测阳性率分别为10.9%、2.1%和4.3%。结论本研究建立的TTV7、TTV8、TTV10实时荧光定量PCR检测体系具有特异性强、灵敏性高等特点,可为临床血清样本TTV检测提供一个快速手段。
- 夏志强宋娟夏冬宋芹芹王文军王瑞芳史冰田刘宓胡耕王衍海韩俊
- 关键词：实时荧光定量PCR敏感性血清样本
- 安徽阜阳冬季手足口病患者合并病毒感染的调查研究被引量：2
- 2016年
- 目的 研究安徽阜阳2013年冬季手足几病患儿合并其他病毒感染情况.方法 根据手足口病病例诊断标准诊断收集2013年11月-2013年12月安徽阜阳手足口病住院病例及资料,采集患儿血清.使用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测血清标本中的细小病毒B19、I型单纯疱疹病毒、巨细胞病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的IgM抗体.整理分析患儿合并病毒感染情况.结果 2013年11月-2013年12月45份手足口病患儿血清腺病毒IgM阳性30例（67.7％）,呼吸道合胞病毒IgM阳性8例（17.8％）,细小病毒B19 IgM阳性8例（17.8％）,巨细胞病毒IgM阳性3例（6.7％）,单纯疱疹病毒IgM阳性l例（2.2％）,血清中未检测出现副流感病毒IgM抗体.同时发现多例合并两种以上病毒IgM阳性现象.结论 2013年阜阳地区冬季手足口病合并腺病毒、呼吸道合胞病毒和细小病毒B19等为主的感染.
- 于洁牛军伟谢涵坤宋娟宋芹芹夏冬王欣玲罗小暖朱红梅韩俊
- 关键词：手足口病疾病传播腺病毒B19呼吸道合胞病毒
- 青岛2020年冬季上呼吸道感染患者中人鼻病毒的分子流行病学特征被引量：10
- 2022年
- 目的:了解2020年冬季青岛地区上呼吸道感染患者的人鼻病毒(human rhinovirus,HRV)流行状况和基因分型特征。方法:采集青岛地区101例上呼吸道感染患者的咽拭子样本,提取核酸,应用荧光定量PCR方法进行15种常见呼吸道病毒的检测。对检测出HRV阳性的样本,应用RT-PCR方法扩增HRV VP4/VP2区并测序,对测序所获得的序列进行系统进化树和同源性分析。结果:101例上呼吸道感染患者样本中,涉及6种常见病毒。检出1种病毒感染的样本34例(34/101,33.66%),检出混合病毒感染的样本2例(2/101,1.98%)。其中HRV的检出率最高,为21.78%(22/101)。扩增出20条HRV VP4/VP2区序列,分别为HRV-A组16株和HRV-C组4株,共涉及14种血清型。结论:鼻病毒是2020年冬季青岛地区上呼吸道感染患者主要的病毒性病原之一,且以A组HRV感染为主。
- 万以秋蔡茹姜法春宗可鑫王瑞芳史冰田宋娟贾静夏冬王衍海梅国勇韩俊
- 关键词：上呼吸道感染系统进化树
- 蛋白酶体抑制剂PS-341抑制人肠道病毒D68复制研究
- 2019年
- 目的探究蛋白酶体抑制剂PS-341对肠道病毒属病毒复制的抑制作用。方法利用MTT实验分析药物毒性。利用实时荧光定量PCR技术,从核酸水平检测PS-341处理对宿主细胞内肠道病毒 D68 型(enterovirus D68 ,EV-D68)、柯萨奇 B3 型(coxsackieviros B3 , CV-B3 )复制的影响。通过Western blot检测细胞内病毒蛋白表达水平。结果 PS-341处理EV-D68或CV-B3感染后的细胞,细胞内病毒RNA含量分别被抑制50%?70%和60%~90%。EV-D68感染细胞后,加入PS-341, RD细胞内病毒滴度下调90.23%,上清中病毒滴度下调83.4%,HeLa细胞内病毒滴度下调93.08%,上清中病毒滴度下调90%。但PS-341对病毒吸附、进入及释放无影响。当PS-341与凋亡抑制剂Ac-YVADCHO共处理EV-D68感染的细胞,与PS-341处理组相比,PS-341对病毒RNA复制抑制率为10%~30%,同时病毒蛋白表达水平提高,PS-341对病毒复制抑制作用减弱。结论 PS-341能够抑制肠道病毒属病毒在细胞内复制及组装,但对病毒吸附、进入及释放无影响。PS-341可能通过调节蛋白酶体通路,诱导细胞凋亡,抑制EV-D68在宿主体内的基因复制抑制病毒增殖。此外,PS-341对小RNA病毒科肠道病毒属病毒可能具有广谱抗病毒作用。
- 张可可夏冬刘思华周振威韩俊王涛
- 关键词：柯萨奇病毒B3PS-341细胞凋亡
- 一种验证内部核糖体进入位点的双荧光素酶报告载体构建被引量：1
- 2021年
- 目的构建一种能够验证内部核糖体进入位点的双荧光素酶报告载体,为验证内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)活性提供了方法。方法以双荧光素酶报告基因载体psiCHECK-2为基础,将发卡结构插入到海肾荧光素酶(R-Luc)基因与萤火虫荧光素酶(F-Luc)基因之间,构建载体psiCHECK-IRES。为了验证载体是否有效,通过同源重组技术将Encephalomyocarditis virus(EMCV)的IRES序列插入到psiCHECK-IRES载体的发卡结构与F-Luc之间,形成载体psiCHECK-IRES-EMCV。以psiCHECK-2质粒做模板建立F-Luc与R-Luc的扩增标准曲线。将psiCHECK-IRES与psiCHECK-IRES-EMCV质粒转染BHK-21细胞,利用RT-qPCR检测F-Luc与R-Luc的拷贝数;将psiCHECK-IRES与psiCHECK-IRES-EMCV质粒分别转染BHK-21细胞,24 h后利用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶活性。结果经过测序证实带有发卡样结构的双荧光素酶表达载体psiCHECK-IRES的载体序列。RT-qPCR结果显示F-Luc与R-Luc mRNA的拷贝数大致相同,证明未出现异常的单顺反子转录本,避免F-Luc读数出现假阳性;插入EMCV IRES的psiCHECK-IRES-EMCV载体表达的F-Luc/R-Luc比值是空载体的53.35倍,证明EMCV的IRES序列能够在构建的载体上起始F-Luc基因的表达。结论本研究构建了可用于验证病毒或者细胞依赖IRES表达的双荧光素酶报告载体psiCHECK-IRES。
- 史冰田宋芹芹宋娟夏志强夏冬刘宓王文军王瑞芳韩俊
- 关键词：内部核糖体进入位点萤火虫荧光素酶
