陈雪梅
- 作品数：11 被引量：28H指数：3
- 供职机构：四川大学华西医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 改良Trizol法提取血浆游离RNA被引量：4
- 2020年
- [目的]建立一种成本低、得率高的血浆游离RNA的提取方法。[方法]分别采用传统Trizol法、改良Trizol法、试剂盒法提取200μL健康成年人血浆中游离RNA,并比较三种方法所得RNA的浓度、纯度及大小片段RNA得率的差异。[结果]改良Trizol法所得RNA浓度是常规Trizol法的21.7倍(P<0.01),是试剂盒法的6.4倍(P<0.01);三种方法所得RNA纯度(A260/A280)无显著差异;采用RT-q PCR方法检测血浆游离RNA大小片段的回收率,外参秀丽线虫miR-39-3p(cel-miR-39-3p)代表小片段RNA,GAPDH代表大片段RNA,改良Trizol法检测Cq平均值分别为15.64和33.34,平均低于常规Trizol法2.05~3.62个Cq,低于试剂盒法0.32~3.34个Cq。[结论]改良Trizol法提取血浆游离RNA相较于常规Trizol法提高了10~20倍,增加了得率。
- 陈雪梅李聪丁雨吴思思
- 关键词：TRIZOL法RNA提取
- 鼻咽癌调强放疗中解剖结构变化对剂量的影响
- 目的：在鼻咽癌调强放疗过程中，每周定时重复CT扫描，利用变形融合技术，测量患者解剖结构变化，并计算相应的剂量数据改变，探讨鼻咽癌IMRT治疗过程中修改治疗计划的策略。背景：鼻咽癌调强放疗具有明显剂量学优势。鼻咽癌调强放疗...
- 陈雪梅李光俊柏森
- 关键词：调强放射治疗
- 微小RNA-484参与肥厚型心肌病心肌纤维化的机制研究
- 2023年
- 目的寻找参与肥厚型心肌病心肌纤维化的关键微小RNAs(miRNAs),并进一步探讨其调控心肌纤维化的机制。方法选择2014年1月—2018年6月42例在四川大学华西医院诊断并行外科手术治疗的肥厚型心肌病患者,其中男29例、女13例,中位年龄46(15~69)岁。在患者纤维化程度不同的心肌组织,筛选异常表达的目标miRNA,并在细胞水平验证,通过调控该miRNA的表达,检测纤维化相关蛋白和靶基因的表达变化。最后通过双荧光素酶报告基因检测验证其靶向结合关系。结果miR-484在重度纤维化患者心肌组织中表达量明显升高。在细胞水平,心脏成纤维细胞在TGF-β1诱导活化后,miR-484表达量较活化前明显上调(P<0.05),且活化后的心脏成纤维细胞中纤维化相关蛋白(CollagenⅠ、α-SMA)表达量明显升高,靶基因HIPK1表达量下降(P<0.05);通过转染miR-484 antagomir抑制miR-484的表达后,纤维化相关蛋白表达量下降(P<0.05)。HIPK1的mRNA水平与转染NC antagomir组比较,无明显改变(P>0.05)。而在蛋白表达水平,转染miR-484antagomir组HIPK1表达量则明显增加(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测发现,转染WT-miR-484 mimics组荧光素酶活性较对照组下降(P<0.05)。结论miR-484是一种促纤维化的miRNA,可能参与了肥厚型心肌病心肌纤维化的过程,可作为调控的靶点,为心肌纤维化提供治疗策略。
- 黄德荣陈忠秀陈红英陈雪梅赁可
- 关键词：肥厚型心肌病心肌纤维化微小RNAS
- 颅内静脉窦血栓的护理
- 目的 探讨颅内静脉窦血栓(CVST)的临床护理体会.方法 选取2012年4月至2014年12月我院收治的24例静脉窦血栓患者为研究对象,回顾分析24例患者临床护理资料.结果 24例患者平均住院时间为12.4d,经临床积极...
- 陈雪梅
- 人G蛋白偶联受体91(hGPR91)在HEK293细胞的表达
- 2016年
- G蛋白偶联受体（G protein-coupled receptors,GPCR）是一大类通过G蛋白介导其生物效应的膜受体总称,它可与多种细胞外信号分子结合,导致其胞内第二信使改变,引起相应的生物效应。GPCR也是最大的膜受体家族,大概有800种,且约80%的跨膜信号转导需要借助GPCR来完成,其成员均参与广泛的病理生理过程。
- 丁雨陈雪梅吴思思
- 关键词：G蛋白偶联受体真核表达载体蛋白表达
- 柴胡皂苷D对H2O2诱导大鼠心肌细胞H9c2损伤保护机制研究被引量：16
- 2019年
- 目的探讨柴胡皂苷D对H2O2诱导大鼠心肌细胞H9c2损伤保护作用及机制。方法培养H9c2细胞,利用H2O2(400μM,4h)建立心肌细胞损伤模型。设立空白对照组、心肌损伤模型组(H2O2组)、柴胡皂苷D组(4μM),加入柴胡皂苷D预作用3h后,换成含浓度为400μM H2O2的完全培养基,继续培养4h后,应用多功能酶标仪检测细胞内活性氧水平,Hoechst 33258染色、流式细胞仪检测细胞凋亡变化,利用检测试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)含量,同时利用荧光定量PCR(real-time PCR)技术检测过氧化物酶体增殖子活化受体(PPARγ)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)基因水平的表达变化。结果 Hoechst 33258染色和流式细胞检测结果显示:与对照组比较,H2O2组凋亡细胞升高,而柴胡皂苷D组的凋亡细胞量明显少于H2O2组(均P<0.05);细胞内活性氧(ROS)含量检测结果显示:H2O2组的细胞内ROS含量明显高于对照组,而柴胡皂苷D组明显低于H2O2组(均P<0.05);与对照组比较,H2O2组细胞LDH、MDA含量明显升高,柴胡皂苷D组细胞LDH、MDA含量明显降低(均P<0.05);柴胡皂苷D组的PPARγ、Nrf2、HO-1在m RNA水平的表达较H2O2组升高(均P<0.05)。结论柴胡皂苷D能够降低H2O2诱导H9c2心肌细胞产生的氧化应激反应,对心肌细胞具有保护作用。
- 丁雨陈雪梅吴思思
- 关键词：心肌细胞柴胡皂苷乳酸脱氢酶
- Sirt3在原发性肝细胞癌中的表达及其抑瘤作用被引量：1
- 2016年
- 目的观察Sirt3在原发性肝细胞癌(HCC)中的表达,并探讨过表达h Sirt3对人肝癌Hep G2细胞的存活及增殖影响。方法采用免疫组化法检测HCC组织和癌旁正常肝组织中Sirt3的表达;构建h Sirt3腺病毒载体,转染Hep G2细胞并过表达Sirt3蛋白,采用WST-1和Edu实验评价Sirt3对Hep G2细胞的存活及增殖作用。结果与正常肝组织比较,肝癌组织的Sirt3表达量明显降低;Ad-h Sirt3腺病毒感染Hep G2细胞后明显降低了细胞的存活率,抑制细胞生长。结论肝癌组织中Sirt3呈低表达或表达缺失,提示Sirt3的下调可能与HCC的发生密切相关;过表达Sirt3明显抑制Hep G2细胞株的存活及增殖,提示Sirt3可能是治疗肝癌的潜在靶点。
- 吴思思丁雨陈雪梅蒋维
- 关键词：腺病毒载体过表达HEPG2细胞抑瘤作用治疗靶点
- 成年小鼠原代皮肤成纤维细胞的分离培养及其生物学特性被引量：2
- 2017年
- 目的:建立一种周期短、成本低的成年小鼠原代皮肤成纤维细胞分离培养方法,并探索其生物学特性。方法:取8~12周龄BALB/c小鼠背部、尾尖、耳部皮肤,配制2种血清的细胞培养液,采用组织块贴壁法、酶消化法、酶消化组织块贴壁法进行原代皮肤成纤维细胞的培养,通过显微镜观察比较原代细胞的数量、形态、培养周期及纯度;通过免疫荧光、CCK-8、UVB辐照、流式细胞术进行生物学特性鉴别。结果:背部皮肤组织块贴壁使用Gibco胎牛血清培养7 d无细胞游出,CLARK特级胎牛血清细胞游出较多。背部皮肤经酶消化法得到细胞贴壁少;经组织块贴壁法细胞生长慢,培养周期长;酶消化组织块贴壁法细胞游出速度快、数量多、呈长梭形。尾尖取材量少,得到细胞少;耳部皮肤取材方便,但细胞纯度低。CCK8增殖曲线呈S型;相较于对照组,UVB辐照后细胞凋亡率增高17%。结论:CLARK特级胎牛血清、背部皮肤取材、酶消化组织块贴壁法是培养成年小鼠原代皮肤成纤维细胞最优的方案,可增加细胞得量、缩短培养周期,降低成本。
- 陈雪梅薛斯亮吴思思
- 关键词：成年小鼠酶消化法
- 大鼠心肌细胞H9C2活性氧水平检测方法探究被引量：3
- 2017年
- 目的比较3种细胞内活性氧(ROS)的检测方法,分析优缺点,筛选1种合适、准确的检测大鼠心肌细胞H9C2缺氧/复氧(H/R)模型中细胞内活性氧的方法。方法培养H9C2细胞,选择密度合适(80%~90%)的H9C2细胞进行铺板,加入2,7-双乙酸二氯荧光素(DCFH-DA)荧光探针孵育,应用荧光显微镜、流式细胞仪及荧光酶标仪3种方法检测对照组(正常含氧量培养条件,CON)和实验组(缺氧复氧处理,H/R6h)心肌细胞的荧光强度,从而反映大鼠心肌细胞内活性氧水平,并利用数据分析软件进行统计分析。结果流式细胞仪检测分析结果:对照组(152 690±34 104)FU/μg,实验组(325 669±12 755)FU/μg;荧光酶标仪检测分析结果:对照组(282.3±12.57)FU/μg,实验组(1 274±37.05)FU/μg。实验组的ROS水平与对照组的ROS水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),实验组高于对照组,而荧光显微镜观察法无法定量地分析出实验结果。结论 3种ROS检测方法中,荧光酶标仪检测方法能更好地判断大鼠心肌细胞H9C2活性氧水平。
- 丁雨陈雪梅吴思思
- 关键词：H9C2细胞活性氧
- 综合医院科研公共平台入室人员管理规范
- 2021年
- 随着国家对教育和科技的重视,越来越多的高校建立了公共实验平台,国内现有公共实验平台主要集中了大型仪器设备,为师生提供贵重仪器设备的开放服务。通过分析大型综合医院科研公共平台入室人员的特征及现状,以四川大学华西医院公共实验技术中心为例,从入室人员入室流程规范、信息化管理、积分制度、多形式培训、资源共享等角度阐述对入室人员的管理,旨在提高管理效率、营造实验室安全氛围、提高入室人员科研技术能力、促进资源最大化利用。
- 陈雪梅黄强丁雨李聪吴思思
