丁雨
- 作品数：10 被引量：31H指数：3
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- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- Sirt3在原发性肝细胞癌中的表达及其抑瘤作用被引量：1
- 2016年
- 目的观察Sirt3在原发性肝细胞癌(HCC)中的表达,并探讨过表达h Sirt3对人肝癌Hep G2细胞的存活及增殖影响。方法采用免疫组化法检测HCC组织和癌旁正常肝组织中Sirt3的表达;构建h Sirt3腺病毒载体,转染Hep G2细胞并过表达Sirt3蛋白,采用WST-1和Edu实验评价Sirt3对Hep G2细胞的存活及增殖作用。结果与正常肝组织比较,肝癌组织的Sirt3表达量明显降低;Ad-h Sirt3腺病毒感染Hep G2细胞后明显降低了细胞的存活率,抑制细胞生长。结论肝癌组织中Sirt3呈低表达或表达缺失,提示Sirt3的下调可能与HCC的发生密切相关;过表达Sirt3明显抑制Hep G2细胞株的存活及增殖,提示Sirt3可能是治疗肝癌的潜在靶点。
- 吴思思丁雨陈雪梅蒋维
- 关键词：腺病毒载体过表达HEPG2细胞抑瘤作用治疗靶点
- 改良Trizol法提取血浆游离RNA被引量：4
- 2020年
- [目的]建立一种成本低、得率高的血浆游离RNA的提取方法。[方法]分别采用传统Trizol法、改良Trizol法、试剂盒法提取200μL健康成年人血浆中游离RNA,并比较三种方法所得RNA的浓度、纯度及大小片段RNA得率的差异。[结果]改良Trizol法所得RNA浓度是常规Trizol法的21.7倍(P<0.01),是试剂盒法的6.4倍(P<0.01);三种方法所得RNA纯度(A260/A280)无显著差异;采用RT-q PCR方法检测血浆游离RNA大小片段的回收率,外参秀丽线虫miR-39-3p(cel-miR-39-3p)代表小片段RNA,GAPDH代表大片段RNA,改良Trizol法检测Cq平均值分别为15.64和33.34,平均低于常规Trizol法2.05~3.62个Cq,低于试剂盒法0.32~3.34个Cq。[结论]改良Trizol法提取血浆游离RNA相较于常规Trizol法提高了10~20倍,增加了得率。
- 陈雪梅李聪丁雨吴思思
- 关键词：TRIZOL法RNA提取
- 垂体中叶素抑制内质网应激拮抗阿霉素诱导的H9c2心肌细胞损伤机制研究
- 2017年
- 目的利用阿霉素(doxorubicin,DOX)诱导的H9c2心肌细胞损伤模型研究垂体中叶素(intermedin,IMD)拮抗DOX心脏损伤的药理学作用和机制。方法建立H9c2细胞的DOX心脏损伤模型,设空白对照组、DOX(2μmol/L)模型组、IMD受体拮抗剂IMD17-47(1μmol/L)组和IMD8-47(10^(-8)、10^(-6)和10^(-5)mol/L)3个剂量处理组,采用CCK-8法检测心肌细胞活性,丙二醛(MDA)含量测定评价H9c2细胞的氧化应激水平,Western法检测caspase-3活化片段和内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GPR78)的表达水平,并采用Real-time PCR法检测内源性IMD及其受体系统的mRNA表达水平。结果与对照细胞相比较,DOX处理显著降低细胞存活率、增加细胞内MDA含量、caspase-3活性片段和内质网应激水平。与单纯DOX组相比较,IMD17-47抑制DOX诱导的内源性IMD的作用后明显降低细胞的存活率(P<0.05)、增加细胞内MDA含量(P<0.01)、caspase-3活化片段和内质网应激水平(P<0.01);外源性给予IMD干预呈剂量依赖性地促进DOX处理细胞的存活率、降低细胞的MDA含量、凋亡和内质网应激水平(P<0.05)。此外,DOX处理明显增加心脏组织内源性IMD及其受体的mRNA表达。结论 DOX诱导心肌细胞内源性IMD及其受体的表达,内源性IMD和外源性给予的IMD均通过DOX刺激增强的IMD受体系统,有效降低DOX诱导的氧化应激和内质网应激水平,实现其促进心肌细胞存活、抑制细胞凋亡的保护作用。
- 吴思思陈华黎丁雨蒋维
- 关键词：阿霉素
- 人G蛋白偶联受体91(hGPR91)在HEK293细胞的表达
- 2016年
- G蛋白偶联受体（G protein-coupled receptors,GPCR）是一大类通过G蛋白介导其生物效应的膜受体总称,它可与多种细胞外信号分子结合,导致其胞内第二信使改变,引起相应的生物效应。GPCR也是最大的膜受体家族,大概有800种,且约80%的跨膜信号转导需要借助GPCR来完成,其成员均参与广泛的病理生理过程。
- 丁雨陈雪梅吴思思
- 关键词：G蛋白偶联受体真核表达载体蛋白表达
- 柴胡皂苷D对H2O2诱导大鼠心肌细胞H9c2损伤保护机制研究被引量：16
- 2019年
- 目的探讨柴胡皂苷D对H2O2诱导大鼠心肌细胞H9c2损伤保护作用及机制。方法培养H9c2细胞,利用H2O2(400μM,4h)建立心肌细胞损伤模型。设立空白对照组、心肌损伤模型组(H2O2组)、柴胡皂苷D组(4μM),加入柴胡皂苷D预作用3h后,换成含浓度为400μM H2O2的完全培养基,继续培养4h后,应用多功能酶标仪检测细胞内活性氧水平,Hoechst 33258染色、流式细胞仪检测细胞凋亡变化,利用检测试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)含量,同时利用荧光定量PCR(real-time PCR)技术检测过氧化物酶体增殖子活化受体(PPARγ)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)基因水平的表达变化。结果 Hoechst 33258染色和流式细胞检测结果显示:与对照组比较,H2O2组凋亡细胞升高,而柴胡皂苷D组的凋亡细胞量明显少于H2O2组(均P<0.05);细胞内活性氧(ROS)含量检测结果显示:H2O2组的细胞内ROS含量明显高于对照组,而柴胡皂苷D组明显低于H2O2组(均P<0.05);与对照组比较,H2O2组细胞LDH、MDA含量明显升高,柴胡皂苷D组细胞LDH、MDA含量明显降低(均P<0.05);柴胡皂苷D组的PPARγ、Nrf2、HO-1在m RNA水平的表达较H2O2组升高(均P<0.05)。结论柴胡皂苷D能够降低H2O2诱导H9c2心肌细胞产生的氧化应激反应,对心肌细胞具有保护作用。
- 丁雨陈雪梅吴思思
- 关键词：心肌细胞柴胡皂苷乳酸脱氢酶
- 四种转染试剂对H9C2细胞转染效率的比较被引量：4
- 2017年
- 目的比较4种不同转染试剂对大鼠心肌细胞H9C2细胞的转染效率,以选择最优转染方法。方法以带有增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的质粒作为外源基因,分别用4种不同转染试剂Fu GENE HD、DNA-In CRISPR、Lipofectamine 3000和Lipofectamine 2000转染H9C2细胞,通过荧光显微镜观察和荧光酶标仪检测荧光强度来评价转染效率,并通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒检测4种转染试剂对细胞活性的影响。结果 Lipofectamine 3000转染效率最高(>50%);而DNA-In CRISPR转染效率最低(<1%)。4种转染试剂中Lipofectamine 3000对细胞毒性也最低,转染48 h后细胞活性为94.55%。结论转染试剂Lipofectamine 3000在保证相对较高的转染效率的同时也具有最低的细胞毒性,更适合用于H9C2细胞的转染。
- 倪银芸丁雨吴思思
- 关键词：CRISPRLIPOFECTAMINELIPOFECTAMINE
- 前列腺基质细胞的原代培养方法被引量：1
- 2019年
- 目的:建立一种操作简单、成功率高、重复性好的前列腺增生组织原代基质细胞(PSC)培养方法。方法:采用胶原酶消化法、组织块贴壁法和胰酶消化组织块贴壁法,从70岁及以上男性的良性前列腺增生组织中分离培养PSC,通过显微镜观察比较PSC的数量、形态、培养周期,用免疫荧光染色法鉴定PSC的纯度。结果:胶原酶消化法得到的贴壁细胞少,细胞体积较小且形态无法铺展,增殖能力较弱;组织块贴壁法培养72h后细胞会从组织边缘缓慢爬出,生长周期长;胰酶消化组织块贴壁法,细胞培养7d后基本融合,折光性强,细胞多呈长梭形,通过免疫荧光染色鉴定,基质细胞纯度在95%以上。结论:利用胰酶消化组织块贴壁法建立了一种易行、高效且重复性好的前列腺增生组织基质细胞培养方法。
- 霍雨薇丁雨朱国念吴思思
- 关键词：良性前列腺增生
- 两种实时定量聚合酶链反应方法检测血浆微量微RNA的比较被引量：2
- 2017年
- 目的比较用茎环和多腺苷酸聚合酶(poly A polymerase,PAP)加尾实时定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)法检测血浆中微量微RNA(micro RNA,mi RNA)的区别,并评价2种常用内参基因的表达稳定性。方法分离成年Sprague Dawley大鼠血浆提取mi RNA,使用茎环和PAP加尾实时定量PCR法检测血浆中rno-mi R-200b-3p和rno-mi R-126-3p的表达水平,采用rno-mi R-103a-3p和U6作为内参,采用2△Ct法计算比较两种实时定量方法和内参的选择。结果茎环法相较于PAP加尾法检测Ct值可以降低2~4个循环数,检测灵敏度增加了10倍;PAP加尾法溶解曲线在明显单峰之前可见小峰,茎环法显示独立单峰,茎环法特异性更优;U6作为内参相对于rno-mi R-103a更稳定。结论对于mi RNA浓度偏低的少量样本检测,茎环法有准确、灵敏、特异的优点;对于mi RNA含量丰富、大规模组织样本的检测,PAP加尾法则更适用。对于内参基因的选择,使用U6进行mi RNA半定量相对于rno-mi R-103a-3p更稳定,重复性更强。
- 陈雪梅丁雨吴思思
- 关键词：微RNA实时定量聚合酶链反应血浆
- 综合医院科研公共平台入室人员管理规范
- 2021年
- 随着国家对教育和科技的重视,越来越多的高校建立了公共实验平台,国内现有公共实验平台主要集中了大型仪器设备,为师生提供贵重仪器设备的开放服务。通过分析大型综合医院科研公共平台入室人员的特征及现状,以四川大学华西医院公共实验技术中心为例,从入室人员入室流程规范、信息化管理、积分制度、多形式培训、资源共享等角度阐述对入室人员的管理,旨在提高管理效率、营造实验室安全氛围、提高入室人员科研技术能力、促进资源最大化利用。
- 陈雪梅黄强丁雨李聪吴思思
- 大鼠心肌细胞H9C2活性氧水平检测方法探究被引量：3
- 2017年
- 目的比较3种细胞内活性氧(ROS)的检测方法,分析优缺点,筛选1种合适、准确的检测大鼠心肌细胞H9C2缺氧/复氧(H/R)模型中细胞内活性氧的方法。方法培养H9C2细胞,选择密度合适(80%~90%)的H9C2细胞进行铺板,加入2,7-双乙酸二氯荧光素(DCFH-DA)荧光探针孵育,应用荧光显微镜、流式细胞仪及荧光酶标仪3种方法检测对照组(正常含氧量培养条件,CON)和实验组(缺氧复氧处理,H/R6h)心肌细胞的荧光强度,从而反映大鼠心肌细胞内活性氧水平,并利用数据分析软件进行统计分析。结果流式细胞仪检测分析结果:对照组(152 690±34 104)FU/μg,实验组(325 669±12 755)FU/μg;荧光酶标仪检测分析结果:对照组(282.3±12.57)FU/μg,实验组(1 274±37.05)FU/μg。实验组的ROS水平与对照组的ROS水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),实验组高于对照组,而荧光显微镜观察法无法定量地分析出实验结果。结论 3种ROS检测方法中,荧光酶标仪检测方法能更好地判断大鼠心肌细胞H9C2活性氧水平。
- 丁雨陈雪梅吴思思
- 关键词：H9C2细胞活性氧
