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陈俊杰
作品数:
2
被引量:1
H指数:1
供职机构:
苏州大学附属第二医院
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发文基金:
江苏省自然科学基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
陈金生
苏州大学附属第二医院
王海洋
苏州大学附属第二医院
黄强
苏州大学附属第二医院
董军
苏州大学附属第二医院
代兴亮
苏州大学附属第二医院
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2016
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胶质瘤干细胞诱导间充质干细胞恶性转化的实验研究
被引量:1
2016年
目的探讨移植瘤中作为肿瘤间质细胞的骨髓间充质干细胞(BMSCs)和胶质瘤干细胞SU3.红色荧光蛋白(PEP)的相互作用。方法应用6GyX线辐射Balb/c裸小鼠损毁骨髓,尾静脉移植源于绿色荧光蛋白(GFP)裸小鼠的骨髓细胞,建立骨髓损毁重建模型:将SU3.RFP细胞接种骨髓损毁重建模型小鼠皮下并获取移植瘤,HE染色并用激光共聚焦显微镜观察。原代培养移植瘤,克隆出高增殖力的GFP+细胞,免疫细胞化学染色检测该细胞和BMSCs中CD44、Scal、CD90和CD45的表达。CCK-8法、细胞克隆形成实验、Transwell侵袭实验分别检测高增殖力GFP+细胞、BMSCs、SU3.RFP的增殖能力、克隆形成率和侵袭能力;染色体核型分析该细胞、正常BMSCs有丝分裂相的染色体形态;将高增殖力GFP+细胞接种于Balb/c裸小鼠皮下,收获肿瘤组织并行HE染色。结果SU3-RFP细胞对骨髓损毁重建模型小鼠的致瘤率为100%(7/7)。HE染色移植瘤显示血管丰富,管腔内可见红细胞。激光共聚焦显微镜下显示绿色的外源性移植骨髓细胞与红色的肿瘤干细胞相互作用活跃。免疫荧光染色显示高增殖力GFP+细胞与BMSCs均高表达CD44、弱表达Sca1和CD90、不表达CD45,将其命名为已转化的BMSCs(tBMSCs)。CCK-8法、细胞克隆形成实验、Transwell侵袭实验检测显示SU3-RFP、tBMSCs的吸光度似)值f培养后5、6、7d1、克隆形成率、穿膜细胞数均高于BMSCs,差异有统计学意义(P〈0.05)。染色体核型分析显示tBMSCs分裂相染色体较BMSCs明显增多;tBMSCs对Balb/c裸小鼠致瘤率为100%(5/5)。HE染色可见肿瘤细胞呈浸润性生长,血供丰富。结论胶质瘤干细胞可诱导移植瘤中BMSCs的恶性转化,后者参与肿瘤重构。
陈金生
陈俊杰
代兴亮
王海洋
马加威
蔡洪华
黄强
董军
关键词:
胶质瘤干细胞
骨髓间充质干细胞
恶性转化
胶质瘤干细胞与微环境中骨髓间充质干细胞或巨噬细胞融合的鉴定及生物学特性分析
2016年
目的观察胶质瘤干细胞与其微环境中骨髓间充质干细胞(BMSCs)或巨噬细胞(Mφ)能否发生融合,并鉴定融合细胞的相关表型。方法将红色荧光蛋白(RFP)基因稳定转染的人胶质瘤干细胞株SU4-RFP和源于表达绿色荧光蛋白(EGFP)的Balb/c裸小鼠BMSCs和Mφ共培养,激光共聚焦显微镜下观察SU4-RFP与BMSCs、Mφ间的融合,分别命名为F-BMSCs、F-Mφ,单克隆高增殖力的RFP/EGFP双阳性细胞,用荧光标记的原位杂交技术(FISH)、Western blotting分别检测SU4-RFP、F-BMSCs、F-Mφ和BMSCs中RFP、EGFP基因和蛋白的表达;免疫细胞化学染色检测SU4-RFP、BMSCs、Mφ和F-BMSCs、F-Mφ分子标记物的表达;染色体核型分析检测SU4-RFP、BMSCs、F-BMSCs有丝分裂相的染色体形态;克隆形成实验、CCK-8法和Transwell实验分别检测F-BMSCs、F-Mφ、SU4-RFP的增殖能力和侵袭能力。结果激光扫描共聚焦显微镜下观察显示融合细胞表达红、绿2种荧光。FISH、Western blotting检测显示F-BMSCs、F-Mφ共表达RFP、EGFP 2种基因和蛋白。免疫细胞化学染色显示SU4-RFP细胞仅巢蛋白(Nestin)表达阳性。BMSCs仅CD105和CD44表达强阳性,Mφ细胞仅CD68表达阳性;F-BMSCs共表达Nestin和CD105、CD44,F-Mφ共表达Nestin和CD68。染色体核型分析显示F-BMSCs的染色体核型中小鼠的端着丝粒染色体占大多数,同时可见少量人的中着丝粒染色体。F-BMSCs、F-Mφ的克隆形成率高于SU4-RFP,差异有统计学意义(P〈0.05)。CCK-8实验显示F-BMSCs、F-Mφ的生长速度高于SU4-RFP;Transwell侵袭实验显示F-BMSCs、F-Mφ的穿膜细胞数(429.4±17.9、421.6±14.6)高于SU4-RFP(216.2±22.6),差异有统计学意义(P〈0.05)。 结论肿瘤干细胞可与宿主BMSCs或Mφ自发融合,且融合后细胞恶性程度更高,提示其可能为肿瘤恶性进展的机制之一。
王海洋
陈俊杰
王麒龙
王德林
陈金生
代兴亮
王爱东
黄强
董军
关键词:
胶质瘤干细胞
骨髓间充质干细胞
巨噬细胞
细胞融合
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