张静远
- 作品数：9 被引量：20H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 狂犬病病毒不同毒株糖蛋白免疫原性的比较研究被引量：3
- 2016年
- 我们之前研究发现,狂犬病病毒(RABV)BD06株与SRV9株糖蛋白的免疫原性存在明显差异。为进一步探究其他不同毒株RABV糖蛋白的免疫原性,利用来源于5种狂犬病病毒株的糖蛋白基因分别构建了以杆状病毒为载体的重组病毒Ac-BD06-G、Ac-CVS-11-G、Ac-Flury-LEP-G、Ac-ERA-G、Ac-SRV9-G,并用其表达的等量糖蛋白分别免疫小鼠,之后进行中和抗体水平测定和脑内攻毒保护试验。结果发现,一定量的不同毒株RABV糖蛋白诱导小鼠产生的VNA水平存在差异,由高到低依次为Ac-Flury-LEP-G、Ac-CVS-11-G、Ac-BD06-G、Ac-ERA-G、Ac-SRV9-G。此外,针对标准毒CVS-24脑内攻毒,不同毒株糖蛋白提供的保护率也存在差异,在Ac-Flury-LEP-G、Ac-CVS-11-G、Ac-BD06-G均为100%,而在Ac-ERA-G仅为6.7%,在Ac-SRV9-G则为0。结果显示,重组糖蛋白的免疫原性和保护性与其来源毒株本身的毒力强弱不存在线性关系,与攻击毒株之间核苷酸同源性的高低也没有直接关系。但总的来说,强毒株糖蛋白重组杆状病毒的免疫原性均明显好于弱毒株,并能提供更好的攻毒保护效果。据此推测,强毒糖蛋白基因更适合作为重组疫苗候选基因。本研究结果为RABV亚单位疫苗或者重组活载体疫苗研究过程中目的基因的选择提供了一定的参考和理论依据。
- 陈腾张锦霞张静远陈奇张菲米丽娟张守峰扈荣良
- 关键词：狂犬病病毒糖蛋白杆状病毒免疫原性
- 我国狂犬病防控面临的几个主要现实问题
- <正>1.养犬人不受法律约束,又没有受法律约束的人去管,造成犬的狂犬病免也可,不免也可的局面,因为无论如何都不可能因此受到法律追究,这是我国免疫覆盖率低以及形成大量流浪犬的主要原因之一。尽管一些城市出台了养犬管理条例,但...
- 扈荣良刘晔张静远张守峰张菲陈腾
- 文献传递
- 表达猪圆环病毒2型Cap蛋白的重组杆状病毒的构建及鉴定被引量：6
- 2016年
- 利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功表达了猪圆环病毒2型Cap蛋白,并对该蛋白的生物活性进行鉴定。PCR获得Cap基因并克隆入pFastBacTMⅠ载体质粒,重组质粒pFastBacⅠ-Cap转化DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选获得重组杆粒rBacmid-Cap。以脂质体法将重组杆粒转染对数生长期的Sf9细胞,获得重组杆状病毒。电镜下可见典型的杆状病毒,SDS-PAGE显示,重组病毒表达的Cap蛋白约28ku,间接免疫荧光试验证明,Cap蛋白良好表达并具有免疫反应性,为猪圆环病毒亚单位疫苗的研究奠定了基础。
- 张永武连海张锦霞张静远刘晔张守峰扈荣良
- 关键词：猪圆环病毒2型CAP蛋白杆状病毒表达系统
- 狂犬病病毒M蛋白在杆状病毒中的表达、纯化及多克隆抗体的制备被引量：4
- 2016年
- 为表达狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)基质蛋白(M)蛋白,进而制备多克隆抗体。本研究以狂犬病病毒BD06株RNA为模版,通过RT-PCR扩增M蛋白基因全序列,将其插入质粒pFastbac I中,获取的重组质粒pFastbac I-M,经酶切鉴定后,转化到DH10Bac E.coli感受态中,以获取重组穿梭质粒Bacmid-M。用lipofectamine2000介导Bacmid-M转染Sf9细胞获取重组杆状病毒AcMNPV-M。用抗His标签的单体、犬抗RV阳性血清及兔抗RV阳性血清通过Western-Blot鉴定重组蛋白的表达及其反应原性。用镍离子亲和层析柱纯化重组蛋白,并免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体,用Western-Blot和FAVN试验鉴定多克隆抗体的反应原性及其病毒中和效价。结果表明:(1)利用杆状病毒表达系统成功的表达了大小约为25kD的重组M蛋白;(2)重组M蛋白具有良好的免疫原性和反应原性;(3)制备的多克隆抗体与狂犬病病毒BD06、SRV 9、CVS-24、ERA、PV 2061及aG株的M蛋白均能发生特异性反应,但其无病毒中和能力。本研究完成了重组M蛋白的表达、纯化并制备了其多克隆抗体,为进一步研究M蛋白的生物学功能奠定了物质基础。
- 郑光来卢晓冉张静远陈腾王东方严妍张守峰扈荣良
- 关键词：狂犬病病毒基质蛋白杆状病毒纯化多克隆抗体
- 猪圆环病毒2型Cap蛋白在毕赤酵母中的分泌表达
- 2016年
- 目的在毕赤酵母中分泌表达猪圆环病毒Ⅱ型(porcine circovirus 2,PCV2)Cap蛋白。方法将PCV2-Cap蛋白基因(Gen Bank登录号:KC620508.1)按毕赤酵母偏好密码子优化后,插入毕赤酵母分泌型表达载体p PICZαA中,重组质粒p PICZαA-Cap经SacⅠ线性化,通过电击转化整合至毕赤酵母GS115菌株的基因组中,构建p PICZαA-CapGS115重组酵母菌。经甲醇诱导表达重组Cap蛋白,通过SDS-PAGE、Western blot和间接ELISA法进行鉴定。结果重组表达质粒p PICZαA-Cap经双酶切和测序证明构建正确;重组酵母菌p PICZαA-Cap-GS115经菌落PCR鉴定,可扩增出1 001 bp的目的基因片段;表达的重组Cap蛋白相对分子质量约49 000,可与猪圆环2型阳性血清和小鼠抗His单克隆抗体发生特异性反应。结论成功利用毕赤酵母表达系统分泌表达了PCV2 Cap蛋白,表达的重组蛋白具有良好的抗原性,为PCV2亚单位疫苗和ELISA诊断试剂盒的研制奠定了基础。
- 郑光来卢晓冉张静远陈腾王东方严妍张守峰扈荣良
- 关键词：猪圆环病毒2型CAP蛋白毕赤酵母分泌表达
- 重组杆状病毒高效表达猪圆环病毒2型Cap蛋白及其免疫特性分析被引量：5
- 2019年
- 目的利用重组杆状病毒高效表达猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)Cap蛋白,并分析该蛋白的免疫特性。方法将PCV2 Cap基因克隆至转移载体pFastBacⅠ,转化感受态E.coli DH10Bac细胞,获得重组杆粒r Bacmid-Cap,转染Sf9细胞,SDS-PAGE和Western blot法检测重组杆状病毒,并于High Five(H5)细胞中进行高效表达。将小鼠随机分为PBS对照组、杆状病毒组、重组杆状病毒组及疫苗对照组,均经小鼠肌内注射,100μL/只,分别于第0和14天进行免疫,于首免后第21、28、35及42天经小鼠眼眶静脉丛采血,分离血清,ELISA法进行检测。结果 PCR和测序分析结果表明,重组转移质粒和重组杆粒构建正确。重组PCV2 Cap蛋白的相对分子质量约28 000,可与抗His标签单克隆抗体及抗PCV2 Cap多克隆抗体发生特异性结合。重组杆状病毒按MOI=5及1感染H5细胞约72 h,PCV2 Cap蛋白表达量最高,表达产量约150μg/mL。首免后第21、28、35及42天,重组杆状病毒组小鼠血清抗体水平明显高于PBS对照组及杆状病毒组(P <0. 001);首免后第21、28、35天,重组杆状病毒组小鼠血清抗体水平明显高于疫苗对照组(P <0. 05),首免后第42天,两组差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论成功利用杆状病毒表达系统高效表达了PCV2 Cap,重组蛋白可诱导小鼠产生较高水平抗体,本研究为PCV疫苗的研制奠定了基础。
- 张艳艳张静远缪发明陈腾杨金金阮晓凤张守峰扈荣良
- 关键词：重组杆状病毒猪圆环病毒2型CAP蛋白免疫特性
- 狂犬病病毒磷蛋白在杆状病毒中的表达及鉴定被引量：1
- 2016年
- 采用RT-PCR方法扩增出狂犬病病毒BD06株的磷蛋白(P)基因片段,将其插入杆状病毒穿梭载体pFastBac 1获得的pFastBac 1-P重组质粒,转化E.coli DH10Bac成功构建出杆状病毒表达质粒Bacmid-P,用脂质体介导Bacmid-P转染Sf9细胞获得重组杆状病毒(AcMNPV-P)。经SDS-PAGE、Western blot和直接免疫荧光分析鉴定,BD06-P蛋白在杆状病毒中成功表达,且具有良好的反应原性,为进一步研究狂犬病病毒磷蛋白的结构和功能奠定了基础。
- 郑光来卢晓冉张永武张静远陈腾王东方严妍张守锋扈荣良
- 关键词：狂犬病病毒杆状病毒表达系统磷蛋白
- 狂犬病阻断ELISA抗体检测技术及应用
- 血清中和抗体水平是评价狂犬病免疫保护效果重要指标,在针对中和抗体测定的方法中,FAVN和RFFIT是被国际上推荐的两种中和试验方法。这两种方法通常需要2-3个工作日完成,涉及活毒操作,需要专业培训的技术人员。目前我国基层...
- 张静远扈荣良
- 文献传递
- 狂犬病抗血清在小鼠体内抗感染保护效果评价被引量：1
- 2016年
- 目的探讨被动免疫的狂犬病抗血清和免疫球蛋白(Ig G)对小鼠的攻毒保护作用及其可能的作用机制。方法单独使用Ig G,按照125、250、1 000 IU/kg体重的剂量,分别在攻击致死剂量的强毒前后注射平均体重(20±1)g的昆明小鼠,观察14 d(脑内攻毒)或28 d(外周攻毒)后,记录小鼠发病及死亡情况,计算存活率。同时以类似的方法使用不同效价的抗血清进行试验。结果在攻毒前先注射Ig G或抗血清的条件下,小鼠的存活率与被动免疫的Ig G剂量呈正比,当Ig G剂量达1 000 IU/kg时,小鼠可得到完全保护;在脑内攻毒后注射Ig G或抗血清的条件下,无论被动免疫的Ig G剂量高低,均不能提供任何保护;但在外周攻毒3 d后注射Ig G,高剂量的Ig G可提供部分保护。结论血脑屏障可能允许部分Ig G进入脑内,并在脑内病毒感染早期阻断病毒复制,但病毒在脑内开始复制后,给予任何剂量的Ig G均不能对病毒感染提供保护。
- 张静远陈腾刘晔米立娟张菲张守峰扈荣良
- 关键词：病毒攻击小鼠
