李琳
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院基础医学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一个人类α-甘露糖苷酶全长cDNA的分子克隆被引量：2
- 1999年
- 用我们以往克隆到的1358bp6A8cDNA片段作探针，籍southernblot从一个人扁桃体细胞λgtllCDNA文库筛选，再用RACE方法，克隆到了一个长3300bp的6A8全长CDNA。此CDNA内有一长3188hp（57～3245hp）的开放阅读框架，编码1064个氨基酸的蛋白质。此蛋白质的氨基酸序列与大鼠一个ER－α－甘露糖苦酶（1040个氨基酸）的相同性和相似性高达78％和82％，与一个酵母－α－甘露糖着酶（1083个氨基酸）的相同性和相似性亦达33％和47％。另外，值得注意的是其260～432位氨基酸序列与人类、猪、大鼠和小鼠的多种α－甘露糖甘醇的相应氨基酸序列的相同性均高于20％，提示这段保守序列与α－甘露糖着酶的功能可能有关。
- 李波马凤蓉史耕先赵方萄李景李琳汪燚蔡有余朱立平
- 关键词：CDNA克隆
- 重组腺相关病毒转导外源基因入EB病毒转化的B淋巴细胞获长期表达被引量：2
- 2001年
- 目的 采用重组腺相关病毒 (AAV)载体pAGX(+) ,把 6A8α 甘露糖苷酶基因的正义或反义DNA片段转导入EB病毒转化的B淋巴细胞 ,以获得正义或反义 6A8DNA长期表达的B淋巴细胞株。方法 构建含正义或反义 6A8DNA片段的重组pAGX(+)质粒。经包装后转导淋巴细胞 ,经G418筛选 ,用有限稀释法克隆转导成功的淋巴细胞。Northern杂交和RT PCR检测转导基因的mRNA表达水平。ConA结合试验检测细胞在转导基因后 6A8α 甘露糖苷酶活性的改变。结果 pAGX 反义6A8DNA及pAGX 正义 6A8DNA经包装获得了高复制滴度的重组AAV(rAAV)颗粒 ,藉助rAAV成功地把 6A8基因转导入EB病毒转化的B细胞株SKW6和B淋巴样白血病细胞株BJAB。Northern杂交结果显示 ,转导的正义或反义 6A8DNA获得表达。经 1年余传代培养 ,RT PCR检测见BJAB和SKW6细胞中转导的正义或反义 6A8DNA的mRNA表达增加 ,新霉素抗性基因 (neoR)也获得表达 ,表明转导基因获得了长期表达。ConA结合强度在转导反义 6A8DNA的细胞升高 ,提示转导反义 6A8DNA可影响 6A8α 甘露糖苷酶的表达。结论 用AAV载体成功地把 6A8α 甘露糖苷酶基因的正义或反义DNA片段转导入EB病毒转化的B淋巴细胞SKW6和B淋巴样白血病细胞株BJAB ,转导的基因获得长期表达 ,并干扰 6A8α 甘露糖苷酶的表达。
- 史耕先刘音李琳朱立平
- 关键词：EB病毒转化B淋巴细胞外源基因转导
- 6A8 α-甘露糖苷酶也表达于细胞膜被引量：2
- 2001年
- 目的 制备 6A8α 甘露糖苷酶羧基端单抗并进行鉴定 ,以确定 6A8α 甘露糖苷酶在细胞的表达部位。方法 用基因重组技术构建 6A8cDNA 3′端DNA片段的重组表达载体 ,在原核细胞表达其编码蛋白 ,杂交瘤技术制备单抗 ,以 3D5细胞为靶细胞 ,间接免疫荧光染色后 ,用激光共聚焦显微镜及流式细胞仪鉴定单抗。结果 6A8cDNA 3′端DNA在原核细胞获得表达 ,制备了抗 6A8α 甘露糖苷酶羧基端的单抗 ,观察到 6A8α 甘露糖苷酶不仅表达于 3D5细胞胞浆 ,也表达于胞膜。结论 成功地制备了抗 6A8α 甘露糖苷酶羧基端单抗 ,6A8α 甘露糖苷酶不仅表达于 3D5细胞胞浆中 。
- 李琳王壮志马凤蓉史耕先赵方萄朱立平
- 关键词：细胞膜
