史耕先
- 作品数：30 被引量：40H指数：4
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院基础医学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划北京市科委项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 6A8α-甘露糖苷酶表达对人鼻咽癌细胞CNE-2L2端粒酶活性和端粒长度的影响
- 2003年
- 探讨端粒长度与端粒酶活性在人鼻咽癌细胞CNE 2L2恶性行为改变前后的变化 ,建立研究恶性行为改变与端粒长度与端粒酶活性间关系的细胞模型。与 6A8α 甘露糖苷酶表达正常的CNE 2L2细胞 (野生型细胞W ,转导空载体的细胞M及转导无关DNA片段的细胞S)相比 ,6A8α 甘露糖苷酶表达低下的细胞 (AS)接种裸鼠皮下后的肿瘤性生长受抑。用TeloTAGGGTelomereLengthAssayKit及TelomerasePCRELISAKit分别测定端粒长度及端粒酶活性 ,用RT PCR方法分析端粒重复序列结合因子 (TRF)的转录水平。见AS细胞的端粒明显缩短 (6 78Kb ,W细胞为8 4 0Kb ,M细胞为 8 34kb ,S细胞为 9 5 6kb) ,但端粒酶活性及端粒重复序列结合因子 1和 2 (TRF 1和 2 )的转录水平未见改变。实验表明 ,恶性行为降低的CNE 2L2细胞的端粒变短 ,但与端粒酶活性及TRF 1 2无关 ,提示在CNE 2L2细胞中可能存在着端粒酶及TRF 1 2以外的调节端粒长度的机制。
- 靳玉兰赵方萄岳玮史耕先刘音朱立平
- 关键词：鼻咽癌端粒酶端粒长度端粒重复序列结合因子
- ER α-甘露糖苷酶表达降低引起大鼠肝脏上皮细胞微绒毛减少变短
- 2003年
- 目的观察蛋白质糖基化改变对大鼠肝脏上皮细胞WB-F344表面微绒毛及在培养中生长的影响。方法构建含正义或反义6A8DNA的重组pAGX(+)质粒,用脂质体法将重组质粒或空载质粒转染WB-F344细胞,作G418筛选,以有限稀释法作细胞克隆,进行PCR检测新霉素抗性(neoR)基因以确定转染DNA在细胞基因组中的整合;用P-nitrophenyl-α-D-mannopyranoside作底物检测细胞匀浆上清中ERα-甘露糖苷酶的活性;采用扫描电镜观察细胞表面的微绒毛,并做生长曲线检测。结果转染反义6A8的各WB-F344克隆细胞株的匀浆上清中,ERα-甘露糖苷酶活性有不同程度降低,其中以克隆AS1与AS2的降低最明显。克隆AS1与ConA结合增强,表面微绒毛减少、变短,细胞增殖减慢。结论大鼠肝脏ERα-甘露糖苷酶表达抑制所致的蛋白质糖基化改变,可导致大鼠肝脏上皮细胞WB-F344微绒毛减少、变短,细胞生长速度减慢。
- 赵方萄李瞡史耕先刘音朱立平
- 关键词：糖基化
- 胞膜(Ecto)-6A8α-甘露糖苷酶
- 2003年
- 68Aα-甘露糖苷酶是本实验室克隆的cDNA(GenBank的登记号为AF044414)编码的一个新的人α-甘露糖苷酶[1].该cDNA长3300bp,其开放阅读框架编码1062个氨基酸的蛋白质.蛋白质的1028～1048aa为穿膜区.6A8α-甘露糖苷酶属工型穿膜蛋白.6A8基因定位于第15号染色体q11～13区.
- 朱立平王壮志史耕先刘音王汛赵方萄
- 关键词：单克隆抗体糖基化
- 一个人类α-甘露糖苷酶全长cDNA的分子克隆被引量：2
- 1999年
- 用我们以往克隆到的1358bp6A8cDNA片段作探针，籍southernblot从一个人扁桃体细胞λgtllCDNA文库筛选，再用RACE方法，克隆到了一个长3300bp的6A8全长CDNA。此CDNA内有一长3188hp（57～3245hp）的开放阅读框架，编码1064个氨基酸的蛋白质。此蛋白质的氨基酸序列与大鼠一个ER－α－甘露糖苦酶（1040个氨基酸）的相同性和相似性高达78％和82％，与一个酵母－α－甘露糖着酶（1083个氨基酸）的相同性和相似性亦达33％和47％。另外，值得注意的是其260～432位氨基酸序列与人类、猪、大鼠和小鼠的多种α－甘露糖甘醇的相应氨基酸序列的相同性均高于20％，提示这段保守序列与α－甘露糖着酶的功能可能有关。
- 李波马凤蓉史耕先赵方萄李景李琳汪燚蔡有余朱立平
- 关键词：CDNA克隆
- 转导反向6A8α-甘露糖苷酶cDNA对抗Fas抗体诱导Jurkat细胞凋亡的影响被引量：4
- 2001年
- 用梯形DNA电泳与Gimsa染色研究人T细胞瘤细胞株Jurkat在转导编码人 6A8α 甘露糖苷酶基因的反向cDNA后 ,对抗Fas抗体诱导凋亡敏感性的变化 ,并用间接免疫荧光染色 (流式细胞仪 )检测细胞表面Fas分子的表达。结果表明 ,抗Fas抗体诱导细胞 2 4h后 ,野生型及转导空载载体的Jurkat细胞出现明显的梯形DNA ,两者之间无明显差异 ,但转导反向 6A8cDNA的细胞未见明显的梯形DNA。Gimsa染色结果显示转导反向 6A8cDNA的Ju rkat细胞中凋亡细胞数明显减少 ,而转导空载载体则无影响。Jurkat细胞为Fas(CD95 ,Apo 1)全阳性细胞 ,转导反向 6A8cDNA或空载载体对Fas表达阳性率与Fas表达强度无明显影响。以上结果提示 ,转导编码 6A8α 甘露糖苷酶基因的反向cDNA使人T细胞株Jurkat对抗人Fas抗体诱导的凋亡作用产生耐受。
- 岳玮史耕先王壮志刘音朱立平
- 关键词：细胞凋亡JURKAT细胞
- 分化抗原gp42表达对B细胞株增殖和血清撤除致死的影响被引量：1
- 2003年
- 目的 研究分化抗原gp4 2表达对 3D5B细胞株功能的影响。方法 以生长曲线检测细胞的增殖 ,碘化丙啶 (PI)染色 ,DNA流式细胞仪分析细胞周期 ,Annexin Ⅴ PI染色检测细胞死亡 ,间接免疫荧光染色流式细胞仪分析CD分子的表达 ,用Fluo 3AM作探针激光共聚焦显微镜观察胞内Ca2 + 浓度的变化。结果 分化抗原gp4 2表达抑制的 3D5细胞生长明显加速 (P <0 .0 0 1) ,从S期进入G2 M期的比率明显增加。对血清撤除所致的死亡发生抵抗。分化抗原gp4 2表达抑制的 3D5细胞间的粘附消失 ,CD11c的表达明显减弱。在McAb 5D4的刺激下 ,3D5细胞胞内的Ca2 + 浓度随时间逐步增高。结论 分化抗原gp4 2表达抑制致使 3D5细胞生长加速 ,细胞间粘附消失。分化抗原gp4 2是一个信号传导分子。
- 汪燚刘音马凤蓉崔薇史耕先赵方萄朱立平
- 关键词：信号传导分子钙离子细胞增殖细胞死亡
- 6A8 α-甘露糖苷酶基因的mRNA表达与染色体定位被引量：4
- 2001年
- 目的 对 6A8α 甘露糖苷酶基因作染色体定位 ,比较 6A8α 甘露糖苷酶mRNA在人多种免疫细胞株的表达。方法 用Fish原位杂交作染色体定位 ,用RT PCR检测mRNA表达。结果 6A8α 甘露糖苷酶基因定位于人第 13号染色体长臂的 31～ 32区。 6A8α 甘露糖苷酶mRNA在B细胞株SKW 6高表达 ,在B细胞株 3D5、BJAB、CESS、Daudi、Nalm 6中度表达 ,在B细胞株Navalm ,T细胞株GM、Jurkat,组织细胞瘤细胞株U937弱表达 ,在T细胞株Peer,慢性髓性白血病细胞株K5 6 2极弱表达。结论 6A8α 甘露糖苷酶基因定位于人第 13号染色体长臂的 31～ 32区 ,其mRNA表达水平在各种人免疫细胞株不同。
- 刘音史耕先王壮志曾瑄马凤蓉李波赵方萄朱立平
- 关键词：染色体定位MRNA表达
- 分化抗原gp42在人免疫细胞的表达被引量：1
- 2003年
- 目的 明确gp4 2蛋白为分化抗原 ,检测它在人免疫细胞的表达。方法 用gp4 2蛋白免疫小鼠 ,制备抗gp4 2蛋白的单抗。用反义技术制备gp4 2蛋白表达抑制的 3D5细胞。用免疫荧光染色和Western印迹确定gp4 2单抗的特异性。用胞膜蛋白免疫沉淀和流式细胞术确定gp4 2蛋白为分化抗原。用双色免疫荧光染色流式细胞术检测gp4 2分化抗原在多种人免疫细胞的表达。结果 制备了抗gp4 2蛋白的特异性单抗。用gp4 2单抗作探针 ,从 3D5细胞膜免疫沉淀到相对分子质量 (Mr)为4 2 0 0 0的一条蛋白带 ,并在活 3D5细胞见阳性免疫荧光染色。gp4 2分化抗原在人外周围血CD19+ 、CD14 + 、CD4 + 、CD8+ 和CD5 6 + 细胞的表达率分别为 5 9.71%± 11.36 %、89.0 8%± 4 .87%、2 6 .0 3%±9.75 %、2 4 .2 4 %± 15 .2 9%和 2 4 .2 0 %± 15 .72 % ,在人免疫细胞株的表达率分别为 5 8.0 % (Nalm6 )、72 .7% (3D5 )、5 3.6 % (BJAB)、6 1.0 % (Daudi)、6 .9% (SKW6 )、6 .3% (Jurkat)、5 .8% (Peer)、2 1.3% (K5 6 2 )和 39.1% (U937)。结论 gp4 2蛋白为一个分化抗原 ,在人外周围血CD14 + 细胞的表达率最高 ,其次为CD19+ 细胞 ,CD4 + 、CD8+ 和CD5 6 + 细胞的表达率较低。
- 汪燚刘音马凤蓉史耕先赵方萄朱立平
- 关键词：免疫细胞单克隆抗体免疫荧光染色法WESTERN印迹
- SKW6细胞在转导6A8α-甘露糖苷酶反义cDNA后对抗Fas抗体诱导的凋亡
- 2001年
- 鉴于蛋白质糖基化的重要生物学意义，以腺相关病毒为载体，把编码 ６Ａ８ α－ 甘露糖苷酶的ｃＤＮＡ ３’端１３５８ｂｐ的反向片段转导入ＥＢ病毒转化的Ｂ细胞株ＳＫＷ６， 探讨６Ａ８ α-甘露糖苷酶表达抑制对抗Ｆａｓ抗体诱导凋亡的影响．反义６Ａ８转导成功及 表达用 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交及ＲＴ－ＰＣＲ检测， ６Ａ８ α－甘露糖苷酶表达用 Ｃｏｎ Ａ结合试验检测． Ｇｉｅｍｓａ染色， Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ染色及梯形 ＤＮＡ电泳显示， Ｆａｓ抗体能诱导 ＳＫＷ６细胞凋亡，但 ６Ａ８ α－甘露糖苷酶表达抑制的细胞对Ｆａｓ抗体诱导的凋亡发生抵抗，而转导正义 ６Ａ８ 或空载载体则无影响． ６Ａ８ α－甘露糖苷酶表达状况对 ＳＫＷ６细胞表面 Ｆａｓ分子表达没有影响．
- 史耕先靳玉兰王壮志崔巍刘音王讯朱立平
- 6A8α-甘露糖苷酶表达对人B淋巴细胞3D5增殖反应的影响
- 2000年
- 目的观察 6A8α-甘露糖苷酶表达对人 B细胞株 3D5增殖反应的影响。方法以重组腺相关病毒颗粒为载体，将正义 6A8 DNA或反义 6A8 DNA转导入 EB病毒转化的人 B细胞株 3D5，用单抗 6A8a染色反应和 Con A结合试验确认 6A8α-甘露糖苷酶高表达和低表达。以野生型细胞及转导空载载体的细胞作对照， MTT法检测细胞对 B细胞生长因子（ BCGF）、葡萄球菌 Cowen I（ SAC）或 IL- 6刺激的增殖反应。结果转导正义 6A8 DNA的细胞高表达 6A8α-甘露糖苷酶，转导反义 6A8 DNA的细胞低表达 6A8α-甘露糖苷酶。转导正义 6A8 DNA的 3D5细胞在 SAC诱导下的增殖反应明显增强（ P< 0.05），但转导反义 6A8 DNA细胞的增殖反应无变化。对低分子量 BCGF或 IL- 6诱导的刺激，转导正义 6A8或反义 6A8对细胞的增殖反应均无影响。结论 6A8α-甘露糖苷酶活性增高使 3D5细胞对 SAC刺激的增殖反应增强。 6A8α-甘露糖苷酶活性变化对低相对分子质量 BCGF或 IL- 6诱导的增殖反应无影响。
- 赵方萄史耕先李琳朱立平
- 关键词：增殖反应
