孙莹
- 作品数：11 被引量：11H指数：2
- 供职机构：中国兽医药品监察所更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组鸭肠炎病毒的生物特性研究
- 鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus,DEV),又名鸭瘟病毒,可感染鸭、鹅及其它雁形目禽类,引起血管损伤、组织出血、消化道粘膜损伤、淋巴器官受损和实质性器官退行性病变的一种急性、接触性、败血性传染病——鸭...
- 杨承槐孙莹李俊平李岭曹明慧李启红李慧姣
- 关键词：H9亚型禽流感病毒鸭肠炎病毒HA基因生物特性
- 文献传递
- 表达绿色荧光蛋白重组鸭肠炎病毒构建被引量：3
- 2016年
- 【目的】鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)不同毒株间存在明显差异,DEV疫苗株的UL2基因在195bp后连续缺失528bp,导致第65位氨基酸后连续缺失176aa^([1])。将绿色荧光蛋白(GFP)基因插入DEV UL2基因中,获得表达绿色荧光蛋白的重组病毒,以研究UL2基因对DEV生物特性的影响和探讨DEV作为载体表达外源基因的可行性。【方法】以实验室保存的DEV细胞适应株DNA为模板,利用PCR技术扩增出病毒UL2基因上下游序列并克隆入pMD-18T载体;以UL2基因作为外源基因插入靶点及同源重组臂,将CMV启动子控制的含有GFP-gpt基因表达盒克隆入DEV UL2基因中,构建含GFP基因的转移质粒载体pT-UL2-GFP-gpt;用脂质体将其与DEV细胞适应株共转染CEF细胞,待80%细胞出现病变后,冻融3次,接种到新鲜CEF细胞单层的6孔培养板中,用含5%血清、1%双抗、1%琼脂的M199培养液覆盖,在荧光显微镜下挑取单个有绿色荧光的蚀斑,再接到新的细胞上,重复蚀斑筛选、纯化表达绿色荧光蛋白的重组病毒;利用PCR、基因测序技术鉴定重组病毒;重组病毒接种CEF(moi=0.01),每12h取出1瓶接毒细胞,分别收集上清和细胞,测量其病毒含量,绘制一步生长曲线;重组病毒在CEF中连续传代20次,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况,并用PCR检测GFP的传代稳定性;重组病毒免疫4周龄SPF鸭后14d,肌肉注射接种DEV强毒(CVCC AV1221),观察免疫保护情况。【结果】经双酶切鉴定,成功构建了含绿色荧光蛋白报告基因的转移质粒载体p T-UL2-GFP-gpt,将其与DEV共转染CEF细胞后8h,即可见转染细胞中有带有绿色荧光的梭形细胞,经过8轮蚀斑筛选,获得纯化的重组病毒rDEV-△UL2-GFP-gpt;PCR鉴定及基因测序结果显示,GFP标记基因成功地插入到DEV基因组中,替换了DEV UL2基因的196—723位核苷酸;一步生长曲线结果显示,重组病毒在细胞和上清中的病毒含量分别在36h和72h达到峰值,为10^(6.
- 孙莹李俊平黄小洁李岭曹明慧李启红李慧姣杨承槐
- 关键词：鸭肠炎病毒绿色荧光蛋白重组病毒
- 鸭肠炎病毒gE、gI双基因缺失病毒株的构建及其应用
- 本发明涉及鸭肠炎病毒gE、gI双基因缺失病毒株的构建及其应用。其中涉及一种gE、gI双基因缺失、绿色荧光蛋白标记的重组鸭肠炎病毒，及其构建方法；本发明构建了缺失gI基因3’端的1068bp、gE基因5’端的510bp以及...
- 杨承槐李俊平李启红李岭曹明慧孙莹李慧姣
- 文献传递
- 伪狂犬病病毒双荧光标记5基因缺失株的构建
- 本发明涉及一种伪狂犬病病毒双荧光标记5基因缺失株的构建。该病毒株是以自行分离的一株伪狂犬病病毒(SX株)为母本，通过分子生物学手段，缺失伪狂犬病病毒的gE基因、gI基因、US9基因、UL49.5部分基因和TK基因，并以绿...
- 李俊平杨承槐陈晓春李慧姣孙莹张广川李启红曹明慧李岭
- 文献传递
- H9亚型禽流感重组鸭肠炎病毒rDEVΔUL2-H9株的构建及其应用
- 本发明涉及H9亚型禽流感重组鸭肠炎病毒rDEVΔUL2‑H9株的构建及其应用。本发明设计构建了一株重组鸭肠炎病毒rDEVΔUL2‑H9，该毒株是表达H9亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因的重组鸭肠炎病毒，可用于制备制备成活...
- 杨承槐李慧姣孙莹李俊平李启红李岭曹明慧
- 文献传递
- ELISA法检测种蛋卵黄中禽网状内皮组织增生症病毒抗体的研究被引量：2
- 2016年
- 为研究种蛋卵黄中禽网状内皮组织增生症病毒(REV)抗体的检测方法,运用IDEXX公司的REV抗体ELISA检测试剂盒,比较了不同提取方法、不同稀释倍数、不同洗液对卵黄中REV抗体检测结果的影响。结果显示:当用直接提取的卵黄液做300倍稀释检测,用含0.05%吐温-20的蒸馏水洗涤时,卵黄抗体的S/P比值与相应鸡群的血清抗体的S/P比值吻合度最高。应用本方法分别对50枚SPF种蛋和50枚普通鸡蛋进行检测,SPF种蛋均为REV抗体阴性;普通鸡蛋有4枚为REV抗体阳性,阳性率为8%。实验表明,种蛋卵黄ELISA抗体检测法可以代替传统血清抗体检测,为SPF鸡群的REV感染监测奠定了基础。
- 黄小洁姚文生杨承槐孙莹安肖任小侠李慧姣李俊平
- 关键词：网状内皮组织增生症病毒ELISA卵黄抗体
- H9亚型禽流感重组鸭肠炎病毒rDEVΔUL2-H9株的构建及其应用
- 本发明涉及H9亚型禽流感重组鸭肠炎病毒rDEVΔUL2-H9株的构建及其应用。本发明设计构建了一株重组鸭肠炎病毒rDEVΔUL2-H9，该毒株是表达H9亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因的重组鸭肠炎病毒，可用于制备，制备成...
- 杨承槐李慧姣孙莹李俊平李启红李岭曹明慧
- 伪狂犬病病毒双荧光标记5基因缺失株的构建
- 本发明涉及一种伪狂犬病病毒双荧光标记5基因缺失株的构建。该病毒株是以自行分离的一株伪狂犬病病毒(SX株)为母本，通过分子生物学手段，缺失伪狂犬病病毒的gE基因、gI基因、US9基因、UL49.5部分基因和TK基因，并以绿...
- 李俊平杨承槐陈晓春李慧姣孙莹张广川李启红曹明慧李岭
- 表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组鸭肠炎病毒的生物特性研究
- 鸭肠炎病毒（Duck enteritis virus,DEV）,又名鸭瘟病毒,可感染鸭、鹅及其它雁形目禽类,引起血管损伤、组织出血、消化道粘膜损伤、淋巴器官受损和实质性器官退行性病变的一种急性、接触性、败血性传染病——鸭...
- 杨承槐孙莹李俊平李岭曹明慧李启红李慧姣
- H9亚型禽流感重组鸭肠炎病毒rDEVΔgE-H9株的构建及其应用
- 本发明涉及一种表达外源基因的重组鸭肠炎病毒，及其构建方法和应用。具体地，本发明构建了缺失gE基因、携带绿色荧光标记的重组鸭肠炎病毒载体rDEVΔgE-GFP，通过同源重组的方法，可获得表达外源基因的重组鸭肠炎病毒，为鸭肠...
- 杨承槐陈光华李俊平孙莹李岭李启红曹明慧李慧姣
- 文献传递
