周园
- 作品数：9 被引量：37H指数：4
- 供职机构：中国预防医学科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人HBV前S1蛋白在大肠杆菌中的融合型表达被引量：1
- 1993年
- 乙型肝炎病毒(HBV)的包膜蛋白依次由108—115氨基酸的前S1蛋白、55氨基酸的前S2蛋白和226氨基酸的S蛋白组成。前S1蛋白的N端既含有直接介导毒粒与肝细胞膜结合的位点,又含有许多免疫原性较强的T细胞与B细胞表位,抗前S1抗体水平还是HBV血清学检查的一项重要指标。
- 金冬雁曾庆周园侯云德
- 关键词：乙型肝炎病毒前S1蛋白大肠杆菌
- 重组人肿瘤坏死因子(TNF)和干扰素αA(IFNαA)融合蛋白的构建及表达被引量：10
- 1991年
- 本文采用定位诱导缺失突变技术,经137个单核苷酸缺失,将串联的重组人肿瘤坏死因子(rhTNF)和重组干扰素αA(rhIFNaA)基因融合成编码单一蛋白的基因。融合基因在大肠杆菌表达后,活性检测证实,存在一旣具有TNF抗肿瘤、又具有IFN抗病毒双重活性的蛋白质。融合蛋白的活性较TNF和IFNαA分别低24倍和15倍。分子筛分析证实,融合蛋白分子量大于25kD。
- 智刚侯云德张德震金奇周园李玉英张智清胡玉文苏成芝王克为
- 关键词：肿瘤坏死因子定位突变
- 人ω1型干扰素基因在大肠杆菌中的表达被引量：6
- 1992年
- 人ω型干扰素(huIFN-ω)是继α、β、γ后被发现的第4种干扰素型别。IFN-ω除具有与IFN-α相似的抗病毒功能外,在结构上还与动物滋养层干扰素高度相似,因此它既是人体滋养层蛋白启蒙研究的工具,又可能为人类生殖生物学研究提供直接信息。本文作者曾采用聚合酶链反应(PCR)技术首先在国内分离和克隆了IFN-ω1结构基因,这一初始克隆包括完整的成熟多肽及部分信号肽编码区。在此基础上。
- 黎孟枫曾庆周园郭辉玉侯云德
- 关键词：干扰素聚合酶链反应
- 人α1/158Ⅴ型(α1c型)干扰素基因在大肠杆菌中的表达及其产物的初步纯化被引量：4
- 1992年
- 采用DNA聚合酶链反应(PCR)技术,将本实验室从中国人胎肝细胞染色体DNA中发现和分离的IFN-α1/158V基因的原始克隆,改造成适于进行非融合蛋白原核表达的结构形式,并在大肠杆菌中获得高效表达。测得重组IFN-α1/158V的抗病毒活性为1.9×10~7单位/升菌液。随后又采用以单克隆抗体亲和层析为主的纯化流程对表达产物进行初步纯化,获得了在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳上呈现单一条带的纯化产物。
- 陈晓燕黎孟枫周园迟捷郭辉玉李藻发侯云德
- 关键词：干扰素基因表达聚合酶链反应
- 丙型肝炎病毒核心区优势抗原表位基因的化学合成及其表达产物的抗原性分析
- 1996年
- 依据丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）多蛋白核心区Ｎ端氨基酸序列和密码子简并性，人为设计并采用半化学半酶促的方法合成了一个ＤＮＡ片段。经核酸杂交检测以及ＤＮＡ序列分析证实，该片段的核苷酸序列与设计完全一致。将合成的ＤＮＡ片段插入融合表达载体ｐＧＥＸ－２Ｔ中，表达产物经亲和层析纯化后进行Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹实验和间接ＥＬＩＳＡ分析，结果表明，融合蛋白具有ＨＣＶ核心区抗原的免疫反应性，可望用于ＨＣＶ抗体的检测．此外，编码ＨＣＶ优势抗原表位的化学合成基因有可能为ＨＣＶ嵌合抗原的研究提供一条捷径。
- 王海林金冬雁颜子颖周园白植生侯云德
- 关键词：丙型肝炎病毒抗原合成基因抗原性
- 乙型肝炎病毒PreS2蛋白在大肠杆菌中的表达被引量：3
- 1993年
- 通过融合乙型肝炎病毒(HBV)PreS2基因及大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因,使HBVPreS2蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,推算所表达的融合蛋白占菌体可溶性蛋白的15％左右。经检测表明,表达产物可与抗PreS2单克隆和多克隆抗体反应,并能与多聚人血清白蛋白相结合,同时还具有较强的β-半乳糖苷酶活性,可用于抗PreS2抗体的血清学诊断。利用β-半乳糖苷酶底物类似物亲和层析的方法对融合蛋白进行一步纯化,通过Western印迹及N端氨基酸测序对纯化产物进行鉴定,表明虽然在裂解细菌的同时已加入蛋白酶抑制剂,但仍有相当一部分(>50％)的融合蛋白已在PreS2与β-半乳糖苷酶之间发生断裂,对此现象进行了讨论。
- 曾庆金冬雁周园侯云德
- 关键词：乙型肝炎病毒蛋白大肠杆菌
- 丙型肝炎病毒C蛋白和NS3蛋白双表位嵌合型重组抗原的表达被引量：4
- 1994年
- 应用基因工程技术构建了两种可表达丙型肝炎病毒Ｃ蛋白和ＮＳ３蛋白双表位嵌合抗原Ａ（Ｃ７５－ＮＳ３ａ）和Ｂ（ＮＳ３ａ－Ｃ７５）的质粒，并在大肠杆菌中进行了表达。采用经过盐析和离子交换层析纯化的表达产物进行Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹、抗Ｃ和抗ＮＳ３双抗体夹心ＥＬＩＳＡ试验，并用以检测Ｃ或ＮＳ３表位单特异性血清及系列血清，结果表明Ａ或Ｂ抗原均同时具备Ｃ和ＮＳ３抗原的免疫反应性，而且两种抗原的性能基本相似。在ＨＣＶ抗体检测中这类抗原可望替代配伍的Ｃ＋Ｃ３３ｃ混合抗原。
- 王海林金冬雁周园颜子颖侯云德
- 关键词：丙型肝炎病毒C蛋白NS3蛋白
- 重组人α2a干扰素的高效表达与纯化被引量：14
- 1991年
- 构建了人α2a型干扰素的表达载体,并在大肠杆菌中获得了高效表达,表达量平均为10~ IU/L菌液。还对其表达产物进行了纯化。经盐酸胍裂解菌体、硫酸铵沉淀、酸化处理,再经阴、阳离子交换层析和单克隆抗体亲和层析,使表达产物纯化了1072倍,比活性达1.2×IO~ IU/mg蛋白,达到序列纯,回收率达54％。表达产物N端21个氨基酸序列分析结果与IFN-α2a cDNA推导的序列相符合。
- 智刚周园李玉英张智清苏成芝侯云德
- 关键词：干扰素基因表达
- 多抗原肽在抗HCV血清学诊断中的应用
- 1994年
- 应用八分支的多抗原肽（Ｍｕｌｔｉｐｌｃａｎｔｉｇｅｎｉｃｐｅｐｔｉｄｅ，ＭＡＰ）树脂，通过固相肽合成技术，合成一系列源于ＨＣＶ核心蛋白和ＮＳ４蛋白的八分支多抗原肽。经ＥＬＩＳＡ检测表明，八分支多抗原肽具有较强的免疫反应性。与相应的单拷贝寡肽相比较，多抗原肽对弱阳性血清的检出率有所提高。中和ＥＬＩＳＡ试验也表明，多抗原肽与抗体的亲合力及包被效率均优于单拷贝寡肽。多抗原肽不仅可以提高检测的灵敏度和可靠性，而且可以降低抗原的包被浓度，故在抗ＨＣＶ血清学诊断中具有一定的应用优势。
- 王海林金冬雁颜子颖周园白植生侯云德
- 关键词：丙型肝炎丙型肝炎病毒多抗原肽血清诊断
