叶建青
- 作品数：4 被引量：28H指数：3
- 供职机构：南昌大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江西省科技支撑计划项目江西省教育厅青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 长链非编码RNA在脂多糖诱导人巨噬细胞炎症反应中的表达变化被引量：8
- 2017年
- 目的 分析长链非编码RNA（lncRNA）在脂多糖（LPS）诱导人巨噬细胞炎症反应中的表达差异.方法 分离健康者外周血单个核细胞,采用贴壁法培养纯化为巨噬细胞并分为空白对照组和LPS刺激组.用1 mg/L LPS刺激巨噬细胞12 h后收集细胞及其培养上清液,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养上清液中白细胞介素（IL-1β、IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量;利用lncRNA基因芯片检测两组细胞中lncRNA表达谱的变化,筛选出差异表达lncRNA分子并进行分析.采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（qRT-PCR）对部分差异表达lncRNA分子进行验证;并以NR_028034为研究对象,检测LPS诱导巨噬细胞炎症反应中NR_028034的动态表达变化.结果 ① 与空白对照组相比,LPS诱导巨噬细胞12 h后上清液中炎性细胞因子含量均明显升高〔IL-1β（ng/L）：562.93±61.17比59.74±15.68,IL-6（ng/L）：702.46±92.31比71.66±18.25,TNF-α（ng/L）：794.50±63.89比85.12±22.07,均P〈0.01〕,证实巨噬细胞炎症反应模型构建成功.② 以LPS刺激组与空白对照组表达比值≥2倍且P〈0.05作为差异表达lncRNA.LPS刺激巨噬细胞后差异表达lncRNA有1479条,上调2倍以上的lncRNA共953条,其中上调5倍以上的lncRNA有49条;下调2倍以上的lncRNA共526条,其中下调5倍以上的lncRNA有35条.③ 用qRT-PCR对部分lncRNA进行验证的结果与lncRNA芯片检测结果一致.④LPS刺激巨噬细胞后3、6、12 h,NR_028034表达水平较空白对照组分别上调了（4.41±0.65）、（11.56±2.04）、（18.58±1.36）倍（均P〈0.01）.结论 LPS诱导人巨噬细胞炎症反应后,lncRNA表达谱发生显著变化,lncRNA可能参与调控了巨噬细胞炎症反应.
- 邓桢姚芳苡叶建青徐建青卿城罗清黄自坤
- 关键词：长链非编码RNA脂多糖巨噬细胞炎症反应
- 系统性红斑狼疮患者外周血中性粒细胞PD-L1表达和临床意义被引量：15
- 2017年
- 目的探讨程序性死亡配体1(PD-L1)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中性粒细胞上的表达及临床意义。方法应用流式细胞仪检测77例SLE患者和43例健康对照者外周血中性粒细胞表面PD-L1表达百分率,比较SLE组和对照组之间以及SLE活动组和稳定组中性粒细胞表面PD-L1表达百分率,分析其与SLE临床表现及实验室检查指标的相关性,并检测10例SLE患者治疗前后中性粒细胞PD-L1的表达。结果① SLE组外周血PD-L1+中性粒细胞百分率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.000 1);活动组PD-L1+中性粒细胞百分率高于稳定组,差异有统计学意义(P=0.002 7)。② SLE患者PD-L1+中性粒细胞百分率与SLE疾病活动性评分(SLEDAI)、抗核抗体(ANA)、免疫球蛋白G(IgG)、红细胞沉降率(ESR)呈正相关性,与红细胞计数(RBC)、血红蛋白(HGB)浓度、红细胞压积(HCT)呈负相关性,对这些呈线性相关的变量进行线性回归分析显示SLE患者PD-L1+中性粒细胞百分率与ANA和ESR的线性回归差异有统计学意义(P=0.020、0.005)。以外,在低补体3(C3)组和低白细胞计数(WBC)组中,SLE患者PD-L1+中性粒细胞百分率与C3、WBC呈负相关性。SLE患者中低WBC、低血小板计数(PLT)、高中性粒细胞数、高中性粒细胞百分比阳性组PD-L1+中性粒细胞百分率均高于对应的阴性组,差异均有统计学意义(P<0.05)。③ SLE患者发热、皮肤表现、低白细胞血症、低红细胞血症、低血小板血症、贫血和血尿阳性组PD-L1+中性粒细胞百分率均高于对应的阴性组,且差异均有统计学意义(P<0.05)。④ SLE患者有效治疗后PD-L1+中性粒细胞百分率降低(P<0.01)。结论SLE患者外周血中性粒细胞表面PD-L1表达异常,与疾病的活动性和严重程度以及抗体产生有关。
- 姚芳苡黄自坤李雪叶建青罗清
- 关键词：系统性红斑狼疮中性粒细胞PD-L1
- 慢病毒介导的 TACO-shRNA 通过促进吞噬体与溶酶体融合提高巨噬细胞清除结核分枝杆菌的能力被引量：2
- 2015年
- 目的 构建以富含色氨酸天冬氨酸膜蛋白（ TACO）基因为靶点的短发夹状RNA（ shRNA）表达慢病毒载体,鉴定其下调TACO表达的效果,以及对巨噬细胞吞噬和杀伤胞内结核分枝杆菌（ M.tb）的影响及相关机制. 方法 设计3条靶向小鼠TACO基因的shRNA表达片段及1条随机序列对照片段,插入慢病毒表达载体pSicoR 后利用293 T细胞进行病毒包装. 采用包装成功的慢病毒颗粒感染RAW264 .7细胞,分别采用real-time RT-PCR和Western blot方法鉴定干扰效果. 选择沉默效果最佳的重组慢病毒感染RAW264.7细胞,48 h后再采用M.tb对这些巨噬细胞进行感染,倍比稀释培养法进行细胞内荷菌量的检测,免疫荧光结合激光共聚焦显微镜检测巨噬细胞内M.tb与溶酶体的共定位情况,cyto-ID细胞自噬检测试剂盒检测各组细胞的自噬水平,Western blot法检测自噬相关蛋白LC3的表达水平.结果 测序结果证实重组慢病毒表达载体均构建成功. 靶向TACO基因的3种重组慢病毒均可下调RAW264 .7细胞中TACO的表达,其中LV-pSRT1的效果最佳. LV-pSRT1感染组RAW264 .7细胞内的荷菌量在感染后0 h时即显著低于对照慢病毒（LV-pSRTc）感染组（5.50×104 vs 8.1×104, P〈0.05）. 以M.tb感染后0 h时间点的细胞内荷菌量为基准,M.tb感染后48 h和72 h时LV-pSRT1感染组RAW264.7细胞内M.tb 的存活率显著低于对照慢病毒感染组（48 h： 134.54% vs 213.58%, P〈0.05; 72 h：148.18%vs 262.96%, P〈0.05）. 与对照慢病毒感染组比较,LV-pSRT1感染组RAW264.7细胞内M.tb与溶酶体的共定位率显著上调（75.67%vs 10.66%, P〈0.05）,同时细胞的自噬水平显著上调（16.20%vs 8.50%, P〈0.05）,LC3Ⅱ的相对表达水平也显著提高（0.51 vs 0.34, P〈0.05）. 结论 TACO基因特异性RNAi慢病毒表达载体可有效抑制RAW264.7细胞中TACO的表达,抑制巨噬细胞对M.tb的吞噬能力,增强巨噬细胞对胞内M.tb的清除能力. 下调TACO表达对巨噬细胞杀�
- 陈洁呙阳邓亚婷江红黄自坤罗清叶建青李俊明
- 关键词：慢病毒巨噬细胞结核分枝杆菌
- lincRNA—cox2对小鼠RAW264．7巨噬细胞极化的影响被引量：3
- 2016年
- 目的观察小鼠RAW264.7巨噬细胞不同极化状态下lincRNA-cox2表达变化，初步探讨lincRNA-cox2对巨噬细胞极化的影响。方法以IFN-γ/LPS刺激小鼠RAW264.7细胞诱导M1型极化，IL-4刺激RAW264.7细胞诱导M2型极化，采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测各组细胞lincRNA-cox2的表达。设计并合成针对lincRNA-cox2基因的siRNA及无关序列，脂质体转染RAW264.7细胞，48 h后分别加入IFN-γ/LPS或IL-4继续诱导M1/M2型巨噬细胞，采用酶联免疫试验（ELISA）检测细胞因子IL-12及IL-10的分泌量；RT-PCR检测与巨噬细胞极化相关的iNOS、TNF-α、Arg-1、Fizz1的表达。将lincRNA-cox2-siRNA转染M1型巨噬细胞，检测其对M1极化表型的影响。结果RT-PCR结果显示，M1型巨噬细胞的lincRNA-cox2表达水平显著高于未极化细胞和M2型巨噬细胞。与对照组相比，lincRNA-cox2-siRNA转染RAW264.7细胞后，经IFN-γ/LPS诱导的M1型巨噬细胞中IL-12分泌降低，iNOS和TNF-α表达下降；而经IL-4诱导的巨噬细胞中IL-10产生增加，Arg-1和Fizz1表达升高。lincRNA-cox2-siRNA转染M1型巨噬细胞后，IL-12分泌降低，IL-10产生增加，其特点向M2样巨噬细胞转换。结论lincRNA-cox2参与调控小鼠巨噬细胞的极化，促进M1型巨噬细胞极化，抑制M2型巨噬细胞极化。
- 黄自坤姚芳苡罗清叶建青邓桢呙阳江红李俊明
