曹亮 作品数:45 被引量:143 H指数:7 供职机构: 吉林农业大学动物科学技术学院 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 国家自然科学基金 广西壮族自治区自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 生物学 更多>>
欧洲型PRRSV重组腺病毒疫苗猪免疫试验效果评价 被引量:2 2016年 目的评价欧洲型PRRSV重组腺病毒疫苗pacAd-EU-ORF3-ORF5-IL18猪体免疫效果。方法用鉴定正确的重组腺病毒进行猪免疫试验,通过淋巴细胞亚群检测、细胞因子检测和免疫组化检测分析其免疫效果。结果猪淋巴细胞亚群检测显示重组腺病毒pacAd-EU-ORF3-ORF5-IL18刺激CD4+和CD8+表达量在21d、35d、49d分别为PBS组的1.53、1.84、1.90倍和1.41、1.76、1.53倍,差异有统计学意义(P<0.05);ELISA检测pacAd-EU-ORF3-ORF5-IL18免疫猪血清IL-4和IFN-γ水平在14d时的表达量分别是PBS组的1.45和1.46倍(P<0.05),而在35d时分别是PBS组的1.81和1.79倍(P<0.05)。免疫组化检测免疫猪肺、肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴组织病毒量相对于野毒组和PBS组显著减少。结论重组腺病毒pacAd-EU-ORF3-ORF5-IL18疫苗,具有良好的免疫原性,能提高猪细胞免疫和体液免疫水平。 解长占 曹亮 孙文超 张萍 韩继成 郭海宁 肖朋朋 温树波 崔卓栋 南福龙 马海彬 赵冠宇 张赫 庄忻雨 张金勇 鲁会军 金宁一关键词:重组腺病毒疫苗 流感病毒PR8F的拯救及其对BALB/c小鼠的致病力 被引量:1 2017年 为了研究H1N1流感病毒对BALB/c小鼠的致病相关分子机制、传播机制以及开发新型疫苗,将本实验室保存的A/PR/8/34株的8个质粒参照Paulina构建的流感病毒8质粒突变系统做定点突变,利用反向遗传操作技术,成功拯救出H1N1流感病毒突变株PR8F。将PR8F株以106 TCID50/100μL的剂量滴鼻感染BALB/c小鼠,观察小鼠临床表现及体质量变化。解剖攻毒后不同时间小鼠并观察体内主要脏器的病理特征,提取各脏器RNA,通过实时荧光定量PCR方法,检测PR8F株在小鼠体内不同脏器中的病毒残留量和在BALB/c小鼠肺脏中的扩增效率。结果表明,H1N1流感病毒突变株PR8F感染小鼠4~7d后全部致死;PR8F株在小鼠体内各脏器中的病毒残留量有很大差异,肺脏中最多,且病毒在肺脏内呈指数形式扩增。本试验建立了H1N1流感病毒PR8F株对BALB/c小鼠的感染模型,为H1N1流感病毒致病机制和传播机制的研究奠定基础。 崔卓栋 柴丹 溫树波 解长占 孙文超 张萍 韩继成 曹亮 田明尧 金宁一关键词:定点突变 病毒拯救 实时荧光定量PCR 多联重组痘苗病毒的构建及鉴定 2016年 构建含有埃博拉出血热病毒(Ebola hemorrhagic fever virus,EHFV)小片段分泌蛋白S基因、马尔堡出血热病毒(Marburg hemorrhagic fever virus,MHFV)GP基因、辛诺柏病毒(Sin Nombre virus,SNV)G2糖蛋白基因及非洲欧尼恩病毒(Africa O’nyong nyong virus,O’NNV)E2蛋白基因的重组痘苗病毒。设计含EGFP筛选标记和4种外源基因的穿梭质粒,并利用同源重组技术、荧光筛选技术和Cre/LoxP敲除系统,最终获得四联重组痘苗病毒。使用PCR方法鉴定重组痘苗病毒及其遗传稳定性;用透射电镜观察病毒形态。结果显示:所构建的多联重组痘苗病毒rVTT-J^-4^+具有良好的遗传稳定性,并且具备痘苗病毒的完整形态。结果表明:成功构建了含有4种外源基因的重组痘苗病毒rVTT-J^-4^+,为后续多联疫苗的研究奠定了基础。 李一权 兰添 胡宁宁 姜爽 李敏 曹亮 曹佳媛 范园园 李霄 金宁一关键词:痘苗病毒 同源重组 EGFP 乙型脑炎重组痘苗病毒候选疫苗小鼠安全性评价 被引量:1 2018年 目的对重组痘苗病毒候选疫苗rVTT-JEVE进行动物安全性评价。方法用重组痘苗病毒rVTT-JEVE对BALB/c小鼠进行免疫接种,分别在体液免疫及细胞免疫水平上评价其免疫效果;并通过检测小鼠体内rVTT-JEVE病毒残留,分析乙型脑炎重组痘苗病毒候选疫苗rVTT-JEVE的安全性。结果 BALB/c小鼠经两次免疫接种后,重组痘苗病毒rVTT-JEVE组IgG抗体水平是商品疫苗SA-14-14-2组的1.4倍(t=3.704,P<0.05),中和抗体效价是SA-14-14-2组的1.6倍(t=4.418,P<0.05),T淋巴细胞增殖水平为SA-14-14-2组的1.7倍(t=3.092,P<0.05)。rVTT-JEVE接种小鼠后第1d各脏器均有rVTT-JEVE病毒残留,第3d颌下淋巴结已无病毒残留,第7d仅脾脏和雄性小鼠心脏有少量病毒残留,之后均无病毒残留。结论重组痘苗病毒候选疫苗rVTT-JEVE免疫小鼠可产生较好的免疫效果及免疫安全性。 肖朋朋 刘昊 靖杰 刘昊 韩继成 曹亮 李成辉 张金勇 曹亮 解长占 李一权 鲁会军 金宁一关键词:BALB/C小鼠 乙型脑炎病毒 安全性评价 我国部分城乡犬狂犬病中和抗体水平调查 被引量:6 2006年 以国际兽疫局(OIE)推荐的荧光抗体病毒中和试验(FAVN)对随机采自广东、河北、北京等地区的573份犬血清进行了狂犬病病毒中和抗体效价的测定,以确定犬群中狂犬病的免疫状况。结果显示,在不同地区或不同城市的动物防疫区域中,犬体内狂犬病病毒中和抗体平均水平存在着明显的差异,城市犬的中和抗体水平较高,有的中和抗体保护水平(0.5IU/mL)阳性率高达100%,少数则达不到保护水平,不同防疫区域狂犬病中和抗体水平为(0.08±0.03)^(4.39±1.45)IU/mL,平均保护水平阳性率为46.3%;乡村看家犬病毒中和抗体水平普遍较低,大部分犬体内无中和抗体,只有个别犬体内存在水平较低的中和抗体,平均保护水平阳性率为1.8%。 张菲 刘晔 张守峰 曹亮 骆求辉 冯卫权 文武金 凌凤俊 李瑞达 石兴亚 扈荣良关键词:狂犬病 中和抗体 狂犬病快速诊断方法的建立和应用 被引量:2 2005年 根据狂犬病病毒核蛋白基因保守区序列设计1对引物,建立了用于狂犬病病毒特异性核酸检测的RT-PCR技术。该技术可从狂犬病病毒CVS株、8202株和SRV9株的含毒细胞培养物及鼠脑组织中,扩增出443bp的核酸片段,检出核酸的敏感性约为3pg。对30份不同种动物脑组织的检测结果与小鼠脑内接种试验(MIT)的测定结果完全吻合,但前者可在3h内直接对组织匀浆进行诊断,具有快速、简便和敏感的优点。 曹亮 扈荣良 张守峰关键词:狂犬病病毒 RT-PCR 猪细小病毒6型SYBR Green I real-time PCR检测方法的建立 被引量:12 2018年 采用PCR方法扩增PPV6保守区域基因252bp,将其克隆到pClon007载体,构建重组质粒作为标准阳性质粒。以质粒模板建立PPV6的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法,并进行敏感性、特异性和重复性等验证。结果表明,重组质粒特异性好;建立的real-time PCR方法Ct值与标准品模板在8.80×10^9-8.80×10^1 copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.993,斜率为-4.320。该方法检测灵敏度可达8.80×10^1 copies/μL。该方法对JEV、PRV、PRRSV、PCV2、FMDV等猪常见病原检测均无特异性扩增;对临床样品的检测结果表明,所建立的荧光定量PCR阳性检测率为40.63%。本试验成功建立了PPV6SYBR Green I real-time PCR检测方法,可实现对PPV6快速灵敏的诊断。 孙文超 刘立明 赵翠青 汪伟 赵冠宇 曹亮 曹亮 张赫 韩继成 韩继成 金宁一关键词:SYBR I 荧光定量PCR 狂犬病快速诊断方法的建立和应用 被引量:5 2006年 根据狂犬病病毒核蛋白基因保守区序列设计1对引物,建立了用于狂犬病病毒特异性核酸检测的RT-PCR技术。该技术可从狂犬病病毒CVS株、8202株和SRV9株的含毒细胞培养物及鼠脑组织中,扩增出443bp的核酸片段,检出核酸的敏感性约为3pg。对30份不同种动物脑组织的检测结果与小鼠脑内接种试验(MIT)的测定结果完全吻合,但前者可在3h内直接对组织匀浆进行诊断,具有快速、简便和敏感的优点。 曹亮 扈荣良 张守峰关键词:狂犬病病毒 RT-PCR 欧洲型PRRSV重组腺病毒疫苗构建及免疫原性研究 目的 构建欧洲型PRRSV重组腺病毒疫苗并对其免疫原性进行分析,为预防欧洲型PRRSV的感染提供依据.材料与方法 PCR扩增欧洲型蓝耳病ORF3、ORF5目的基因,将其连接到腺病毒穿梭质粒构建重组腺病毒穿梭质粒pacad... 曹亮 孙文超 解长占 鲁会军 陈兴 韩继成 郭海宁 肖朋朋 张萍 马海彬 南福龙 崔卓栋 金宁一 钱爱东2015年广西地区PRRSV流行株ORF5和Nsp2基因分子流行病学调查 被引量:3 2017年 目的对广西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2和ORF5基因进行分子流行病学调查。方法采集广西地区猪病料样品45份,PCR扩增PRRSV毒株Nsp2和ORF5基因并进行遗传进化分析。结果 RT-PCR检测PRRSV 7份猪病料阳性。7株病毒与VR-2332和LV株的同源性分别为83.5%88.7%和62.1%64.8%。遗传进化分析显示,7株病毒分属于两个亚群,3株属于亚群Ⅳ,4株属于亚群Ⅵ。Nsp2序列分析显示,6株病毒有高致病性PRRSV 1+29aa氨基酸的缺失特征,其中GXBB11-2015在此基础上出现了新的20个氨基酸缺失,缺失碱基数为150个碱基。结论高致病性PRRSV已成为广西地区优势毒株,病毒Nsp2基因新的碱基缺失是PRRSV变异的又一证据。 孙文超 张萍 解长占 张金勇 曹亮 南福龙 韩继成 温树波 肖朋朋 张赫 庄忻雨 靖杰 崔卓栋 柴丹 鲁会军 金宁一关键词:ORF5基因