李国顺
- 作品数：30 被引量：10H指数：2
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- 重组肠道病毒71型疫苗的免疫原性和保护效果研究被引量：2
- 2018年
- 目的评价重组肠道病毒71型(EV-A71)疫苗的免疫原性和保护效果.方法将重组EV-A71疫苗按0、14d程序免疫BALB/c小鼠,采用微量细胞病变法测定一针免疫、二针免疫14d后的EV-A71中和抗体效价,应用酶联免疫吸附法测定二针免疫14d后小鼠脾单个核细胞分泌的细胞因子水平.乳鼠颅内攻击EV-A71病毒,同时将疫苗免疫后小鼠血清通过腹腔注射乳鼠,计算乳鼠生存率及半数动物保护性抗体水平.结果重组EV-A71疫苗一针免疫小鼠后诱导产生的EV-A71中和抗体阳转率即达100%,二针免疫小鼠后诱导产生的EV-A71中和抗体效价显著高于一针免疫(P=0.000),疫苗可诱导小鼠产生Th1和Th2类细胞因子应答.乳鼠颅内攻击20μl原倍EV-A71/M6病毒,同时将疫苗免疫小鼠血清160、40、10、2.5、0.625和0.15625U分别经腹腔注射乳鼠,连续观察22d,乳鼠生存率分别为100%、100%、70%、20%、0和0,对照组乳鼠于第8天全部死亡,采用Reed-Muench法计算平均半数动物保护中和抗体效价(ED50)为5.59U.结论重组EV-A71疫苗可诱导小鼠产生良好的体液免疫和细胞免疫应答,并可保护乳鼠免受EV-A71病毒感染.
- 顾美荣高帆张改梅肖霞李国顺陈磊郭林肖海峰刘建凯毛群颖郑海发
- 关键词：手足口病肠道病毒71型疫苗免疫原性体液免疫细胞免疫
- 重组肠道病毒71型疫苗(汉逊酵母)抗原含量测定方法的建立被引量：3
- 2018年
- 目的建立重组肠道病毒71型疫苗(EV-A71)(汉逊酵母)抗原含量测定方法,用于重组EV-A71(汉逊酵母)疫苗的质量控制.方法以抗EV-A71(汉逊酵母)多克隆抗体为包被抗体,经辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的抗EV-A71单克隆抗体为检测抗体,建立双抗体夹心酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),确定定量限度及最佳定量范围,并对该方法的准确度、精密度和特异性进行方法学验证.结果线性范围为5~80U/ml,线性和平行性良好.定量下限为5U/ml,检测不同浓度的EV-A71国家抗原标准品,回收率在88%~115%,准确度良好;重复性和中间精密度测定,其变异系数均小于15%;与重组柯萨奇病毒A16、甲型肝炎灭活疫苗(HAV)、冻干水痘减毒活疫苗(VZV)、Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)、五价口服轮状病毒减毒活疫苗(RV)等疫苗、Tris缓冲液、PBS缓冲液、破碎液、汉逊酵母宿主蛋白(HCP)均无交叉反应,其专属性良好.结论建立了重组EV-A71疫苗(汉逊酵母)抗原含量测定方法并进行了初步验证,为疫苗研制中抗原含量的质控提供了可靠的检测手段.
- 张改梅陈磊高帆姚昕李国顺顾美荣毛群颖刘建凯郑海发
- 关键词：疫苗汉逊酵母抗原含量
- 一种氢氧化铝佐剂及其制备方法与应用
- 本发明提供了一种氢氧化铝佐剂及其制备方法与应用。本发明通过混合铝盐溶液和氢氧化钠溶液，再经过0.75％‑0.95％的氯化钠溶液洗换制备获得。本发明对现有氢氧化铝佐剂制备工艺进行改进，采用本发明方法可以实现氢氧化铝佐剂表面...
- 李国顺顾美荣肖海峰刘建凯
- 肠道病毒71型类病毒颗粒在汉逊酵母中的表达及其免疫原性被引量：2
- 2015年
- 目的于汉逊酵母中表达肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)类病毒颗粒(virus-like particle,VLP),并分析其免疫原性。方法将鉴定正确的重组质粒p MV-P1-3CD转化汉逊酵母AU0501,经筛选获得稳定整合P1和3CD基因的重组菌株p MV-P1-3CD/AU。30 L发酵罐培养重组菌株,发酵产物纯化后进行SDS-PAGE、Western blot、HPLC检测、电镜分析及动态光散射分析检测。采用不同方法制备EV71疫苗,分别免疫小鼠和家兔,检测动物血清中和抗体几何平均滴度(GMT),评价其免疫原性及不同佐剂对疫苗免疫原性的影响。结果重组菌株p MV-P1-3CD/AU表达产物及疫苗原液的SDS-PAGE分析显示,于相对分子质量26 000、33 000和35 000处均可见VP3、VP1和VP0蛋白条带,且相对分子质量33 000的蛋白可与EV71-VP1单克隆抗体发生特异性结合;疫苗原液的纯度达99%以上;电镜观察可见30 nm的VLP,颗粒均一度较好;小鼠血清GMT最高可达1 536,家兔血清GMT最高可达586,磷酸铝佐剂及氢氧化铝佐剂均可明显提高小鼠血清GMT。结论于汉逊酵母中成功实现EV71的P1和3CD基因的共表达,可形成EV71 VLP,且具有良好的免疫原性,为今后EV71 VLP疫苗的研制提供了实验依据。
- 李国顺郭林方玉松陈磊张盼徐颖之王凤伟顾美荣魏文进郑海发
- 关键词：肠道病毒71型汉逊酵母免疫原性
- 柯萨奇病毒A10型毒株及其应用
- 本发明涉及生物技术领域，具体公开了柯萨奇病毒A10型毒株及其应用。本发明的柯萨奇病毒A10型毒株，其P1结构蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。该毒株交叉中和能力好、遗传稳定、毒力强，为建立稳定的感染动物模型提...
- 张改梅李国顺朱凤才樊欢嵇红赵丽丽谢学超马廷涛陈磊肖海峰顾美荣刘建凯
- Vero细胞生长过程中葡萄糖消耗量与细胞数量关系的研究
- 2023年
- 目的:建立一种应用于片状载体培养的Vero细胞计数方法。方法:Vero细胞于细胞瓶内培养,分别于24 h、48 h、72 h、96 h和120 h取样检测上清液中葡萄糖含量,同时消化细胞并计数。以葡萄糖累计消耗量为X轴,以细胞收获数量为Y轴,获得葡萄糖累计消耗量和细胞数量的关系方程,从而建立一种细胞计数的方法。通过计算反应器中细胞生长消耗的葡萄糖量来计算细胞数量,从而优化控制细胞生长。结果:得到葡萄糖消耗量与细胞数量线性方程为Y=4.107×10~8X;Vero细胞在反应器内培养6 d,累计消耗葡萄糖71.28 g,所获得细胞数量为2.93×10^(10)个。结论:建立了葡萄糖消耗量与细胞数量的线性关系,即每消耗1 g葡萄糖对应的细胞数量为4.107×10~8个,可作为片状载体细胞培养过程中细胞计数的参考。
- 简伟刘永连张瑞郭林肖海峰李国顺
- 关键词：VERO细胞葡萄糖
- Vero细胞培养基筛选
- 2021年
- 为了筛选出适合Vero细胞生长的低血清或无血清培养基。方法:使用6种不同配方的培养基和对照培养基培养Vero细胞,按照相同接种量、相同培养时间,143代传代培养至148代,比较传代过程中细胞形态、细胞活力以及细胞密度。结果:培养3d各培养基培养细胞的汇合率均可达100%,细胞形态均为典型Vero细胞形态,细胞活力均在98%以上,细胞密度在2.80*105~3.30*105个/cm2。4种低血清培养基要优于2种无血清培养基和含10%血清的MEM培养基,差异具有统计学意义(P<0.05);4种低血清培养基中MSVP培养基较优,但差异不具有统计学意义(P>0.05)结论:可选择低血清培养基用于细胞培养,具体选择何种低血清培养基需结合病毒培养工艺确定。
- 简伟刘永连郭林肖海峰李国顺
- 关键词：VERO细胞无血清培养基细胞活力
- 抗柯萨奇病毒A16型的抗体及其制备方法和应用
- 本发明涉及抗体技术领域，具体涉及抗柯萨奇病毒A16型的抗体及其制备方法和应用。本发明提供的抗体或其抗原结合片段的重链互补决定区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.1‑3所示，轻链互补决定区CDR...
- 张改梅陈磊赵丽丽谢学超曹慧佼顾美荣李国顺刘建凯
- 柯萨奇病毒A6型毒株及其免疫原性组合物和应用
- 本发明涉及生物技术领域，具体涉及柯萨奇病毒A6型毒株及其免疫原性组合物和应用。本发明的柯萨奇病毒A6型毒株的VP4、VP2、VP3、VP1蛋白的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1、2、3、4所示，2A、2B、2C、3...
- 肖霞张德宝顾美荣李国顺陈磊郭林简伟肖海峰徐颖之张改梅刘建凯
- 一种抗柯萨奇病毒A10型的单克隆抗体及其制备方法和应用
- 本发明涉及抗体技术领域，具体涉及一种抗柯萨奇病毒A10型的单克隆抗体及其制备方法和应用。本发明的抗体或其抗原结合片段的重链互补决定区CDR1、CDR2、CDR3具有如SEQ ID NO.1‑3所示的氨基酸序列，轻链互补决...
- 张改梅高帆李国顺陈磊赵丽丽谢学超马廷涛顾美荣刘建凯
