郭林
- 作品数：21 被引量：9H指数：3
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- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 一种目的蛋白的纯化方法
- 本发明涉及蛋白质纯化，具体公开了一种目的蛋白的纯化方法，即一种从包含目的蛋白和至少一种污染物的混合物中纯化目的蛋白的方法。在对所述混合物进行匀浆破碎后，无需使用切向流过滤和滤器死端过滤，仅先后进行阴离子交换层析步骤和阳离...
- 孟夏萌张静飞郭林刘建东刘建凯郑海发
- 文献传递
- 重组肠道病毒71型疫苗的免疫原性和保护效果研究被引量：3
- 2018年
- 目的评价重组肠道病毒71型(EV-A71)疫苗的免疫原性和保护效果.方法将重组EV-A71疫苗按0、14d程序免疫BALB/c小鼠,采用微量细胞病变法测定一针免疫、二针免疫14d后的EV-A71中和抗体效价,应用酶联免疫吸附法测定二针免疫14d后小鼠脾单个核细胞分泌的细胞因子水平.乳鼠颅内攻击EV-A71病毒,同时将疫苗免疫后小鼠血清通过腹腔注射乳鼠,计算乳鼠生存率及半数动物保护性抗体水平.结果重组EV-A71疫苗一针免疫小鼠后诱导产生的EV-A71中和抗体阳转率即达100%,二针免疫小鼠后诱导产生的EV-A71中和抗体效价显著高于一针免疫(P=0.000),疫苗可诱导小鼠产生Th1和Th2类细胞因子应答.乳鼠颅内攻击20μl原倍EV-A71/M6病毒,同时将疫苗免疫小鼠血清160、40、10、2.5、0.625和0.15625U分别经腹腔注射乳鼠,连续观察22d,乳鼠生存率分别为100%、100%、70%、20%、0和0,对照组乳鼠于第8天全部死亡,采用Reed-Muench法计算平均半数动物保护中和抗体效价(ED50)为5.59U.结论重组EV-A71疫苗可诱导小鼠产生良好的体液免疫和细胞免疫应答,并可保护乳鼠免受EV-A71病毒感染.
- 顾美荣高帆张改梅肖霞李国顺陈磊郭林肖海峰刘建凯毛群颖郑海发
- 关键词：手足口病肠道病毒71型疫苗免疫原性体液免疫细胞免疫
- 细胞培养系统
- 本实用新型涉及细胞培养技术领域，尤其涉及一种细胞培养系统，该系统通过在主管道的一端设有排空装置，另一端设有抽真空装置；所述主管道由所述排空装置向所述抽真空装置的方向依次连接有储液装置、细胞工厂、收获装置和废液收集装置。本...
- 简伟刘永连于冰肖海峰郭林
- 肠道病毒71型类病毒颗粒在汉逊酵母中的表达及其免疫原性被引量：3
- 2015年
- 目的于汉逊酵母中表达肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)类病毒颗粒(virus-like particle,VLP),并分析其免疫原性。方法将鉴定正确的重组质粒p MV-P1-3CD转化汉逊酵母AU0501,经筛选获得稳定整合P1和3CD基因的重组菌株p MV-P1-3CD/AU。30 L发酵罐培养重组菌株,发酵产物纯化后进行SDS-PAGE、Western blot、HPLC检测、电镜分析及动态光散射分析检测。采用不同方法制备EV71疫苗,分别免疫小鼠和家兔,检测动物血清中和抗体几何平均滴度(GMT),评价其免疫原性及不同佐剂对疫苗免疫原性的影响。结果重组菌株p MV-P1-3CD/AU表达产物及疫苗原液的SDS-PAGE分析显示,于相对分子质量26 000、33 000和35 000处均可见VP3、VP1和VP0蛋白条带,且相对分子质量33 000的蛋白可与EV71-VP1单克隆抗体发生特异性结合;疫苗原液的纯度达99%以上;电镜观察可见30 nm的VLP,颗粒均一度较好;小鼠血清GMT最高可达1 536,家兔血清GMT最高可达586,磷酸铝佐剂及氢氧化铝佐剂均可明显提高小鼠血清GMT。结论于汉逊酵母中成功实现EV71的P1和3CD基因的共表达,可形成EV71 VLP,且具有良好的免疫原性,为今后EV71 VLP疫苗的研制提供了实验依据。
- 李国顺郭林方玉松陈磊张盼徐颖之王凤伟顾美荣魏文进郑海发
- 关键词：肠道病毒71型汉逊酵母免疫原性
- 柯萨奇病毒A6型毒株及其免疫原性组合物和应用
- 本发明涉及生物技术领域，具体涉及柯萨奇病毒A6型毒株及其免疫原性组合物和应用。本发明的柯萨奇病毒A6型毒株的VP4、VP2、VP3、VP1蛋白的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1、2、3、4所示，2A、2B、2C、3...
- 肖霞张德宝顾美荣李国顺陈磊郭林简伟肖海峰徐颖之张改梅刘建凯
- Vero细胞生长过程中葡萄糖消耗量与细胞数量关系的研究
- 2023年
- 目的:建立一种应用于片状载体培养的Vero细胞计数方法。方法:Vero细胞于细胞瓶内培养,分别于24 h、48 h、72 h、96 h和120 h取样检测上清液中葡萄糖含量,同时消化细胞并计数。以葡萄糖累计消耗量为X轴,以细胞收获数量为Y轴,获得葡萄糖累计消耗量和细胞数量的关系方程,从而建立一种细胞计数的方法。通过计算反应器中细胞生长消耗的葡萄糖量来计算细胞数量,从而优化控制细胞生长。结果:得到葡萄糖消耗量与细胞数量线性方程为Y=4.107×10~8X;Vero细胞在反应器内培养6 d,累计消耗葡萄糖71.28 g,所获得细胞数量为2.93×10^(10)个。结论:建立了葡萄糖消耗量与细胞数量的线性关系,即每消耗1 g葡萄糖对应的细胞数量为4.107×10~8个,可作为片状载体细胞培养过程中细胞计数的参考。
- 简伟刘永连张瑞郭林肖海峰李国顺
- 关键词：VERO细胞葡萄糖
- Vero细胞培养基筛选
- 2021年
- 为了筛选出适合Vero细胞生长的低血清或无血清培养基。方法:使用6种不同配方的培养基和对照培养基培养Vero细胞,按照相同接种量、相同培养时间,143代传代培养至148代,比较传代过程中细胞形态、细胞活力以及细胞密度。结果:培养3d各培养基培养细胞的汇合率均可达100%,细胞形态均为典型Vero细胞形态,细胞活力均在98%以上,细胞密度在2.80*105~3.30*105个/cm2。4种低血清培养基要优于2种无血清培养基和含10%血清的MEM培养基,差异具有统计学意义(P<0.05);4种低血清培养基中MSVP培养基较优,但差异不具有统计学意义(P>0.05)结论:可选择低血清培养基用于细胞培养,具体选择何种低血清培养基需结合病毒培养工艺确定。
- 简伟刘永连郭林肖海峰李国顺
- 关键词：VERO细胞无血清培养基细胞活力
- 一种应用于生物反应器的排气装置及生物反应设备
- 本实用新型提供一种应用于生物反应器的排气装置及生物反应设备，包括瓶体、导管组件和空气过滤器，所述瓶体设置有瓶盖，所述瓶盖设置有与所述瓶体内部连通的第一接口和第二接口。所述导管组件分别与所述第一接口和生物反应器的出气口连通...
- 刘永连郭林简伟肖海峰
- 测定重组肠道病毒71型疫苗(汉逊酵母)原液纯度的高效分子排阻色谱法的建立及方法的验证被引量：3
- 2019年
- 目的建立检测重组肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)(汉逊酵母)病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)纯度的高效分子排阻色谱法(SEC-HPLC),并进行验证。方法建立SEC-HPLC法检测EV71 VLP纯度,并对该方法的专属性、精密度、检测限、定量限、耐用性及拖尾因子等指标进行验证。结果空白溶剂在设定的积分范围内无特异峰出现。重复性试验中原液参比品保留时间和峰面积相对标准偏差(RSD)分别为0. 14%和0. 21%,3批分析原液保留时间RSD均<0. 3%,峰面积RSD均<0. 8%;中间精密度试验原液参比品和3批分析原液保留时间RSD均<0. 2%;峰面积RSD均<2. 0%。检测限为样品浓度2. 5μg/mL,进样体积20μL;定量限为样品浓度10μg/mL,进样体积20μL。耐用性试验中原液参比品在不同浓度流动相中连续进样3次,保留时间和峰面积RSD均<2. 0%。原液参比品和3批分析原液目的峰的拖尾因子为1. 210±0. 01,RSD为0. 90%。结论建立的SEC-HPLC方法专属性、精密度、耐用性良好,适用于EV71(汉逊酵母)VLP纯度的检测。
- 张改梅陈磊李国顺肖海峰李进郭林刘思航徐颖之朱芮波刘建凯顾美荣
- 关键词：高效分子排阻色谱法病毒样颗粒纯度
- 柯萨奇病毒A10型毒株及其疫苗和应用
- 本发明涉及生物技术领域，具体涉及柯萨奇病毒A10型毒株及其疫苗和应用。本发明的柯萨奇病毒A10型毒株的VP4、VP3、VP2、VP1蛋白的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1、2、3、4所示，2A、2B、2C、3A、3...
- 肖霞张德宝顾美荣李国顺陈磊郭林简伟肖海峰徐颖之张改梅刘建凯
