曹堃
- 作品数：13 被引量：10H指数：2
- 供职机构：安徽农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：安徽省自然科学基金国家级星火计划安徽省长三角科技联合攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 鼠伤寒沙门氏菌hilD基因缺失突变株的构建及其表型分析
- 2021年
- 为研究鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium,S.T)hilD基因的功能,通过同源重组方法构建S.T hilD基因缺失菌株S.T(ΔhilD),电转化法构建hilD基因回补株S.T(ΔhilD+pcDNA3.1-hilD)、hilD基因缺失株空质粒菌S.T(ΔhilD+pcDNA3.1)和亲本株空质粒菌S.T(pcDNA3.1),进而对S.T(ΔhilD+pcDNA3.1)与S.T(pcDNA3.1)、S.T(ΔhilD+pcDNA3.1-hilD)的表型进行比较。结果显示,S.T(ΔhilD+pcDNA3.1)和S.T(ΔhilD+pcDNA3.1-hilD)遗传性状稳定;三株菌的生长速率无显著差异(P>0.05);S.T(ΔhilD+pcDNA3.1)的生物膜形成能力显著高于S.T(pcDNA3.1)和S.T(ΔhilD+pcDNA3.1-hilD)的(P<0.05);而对于小鼠的致病力及对Hela细胞的黏附力和侵袭力,S.T(ΔhilD+pcDNA3.1)均显著低于S.T(pcDNA3.1)和S.T(ΔhilD+pcDNA3.1-hilD)(P<0.05)。表明S.T hilD基因的缺失不影响其正常生长代谢过程,但毒力减弱。
- 唐正露罗聪玉曹堃李郁
- 关键词：鼠伤寒沙门氏菌生物学特性
- 肠炎沙门氏菌ssrAB、hilA、hilD基因缺失菌株的构建及其生物学特性被引量：3
- 2021年
- 【背景】沙门氏菌(Salmonella)是重要的人畜共患病原菌,由于耐药菌株的不断出现,新型防治方法的研究迫在眉睫。【目的】探究ssrAB、hilA、hilD基因对肠炎沙门氏菌致病作用的影响,筛选安全可靠的沙门氏菌减毒活疫苗或载体用菌株。【方法】采用自杀性质粒介导的同源重组技术,分别构建ssrAB、hilA、hilD单基因缺失株(ΔssrAB、ΔhilA、ΔhilD)、双基因缺失株(ΔssrABhilA、ΔssrABhilD、ΔhilAhilD)和三基因缺失株(ΔssrABhilAhilD),并比较上述缺失菌株与亲本菌株间生物学特性的差异。【结果】基因缺失后菌株的生长速率无显著变化(P>0.05);除ΔhilD生物膜形成能力最强外,其他基因缺失菌株生物膜形成能力变化不显著(P>0.05);ΔssrABhilAhilD和ΔssrABhilA的LD50值最高,ΔssrAB、ΔhilA、ΔhilD次之;亲本菌株引起的小鼠十二指肠的病变程度较所有缺失菌株明显严重;在所有缺失菌株中,ΔssrABhilAhilD对HeLa细胞的黏附力最低,ΔhilD在小鼠体内的定殖率最高;而机体分泌IL-1、IL-18、IFN-γ的能力与沙门氏菌ssrAB、hilA、hilD基因无显著相关性(P>0.05)。【结论】构建的7株基因缺失株中,ΔssrAB、ΔhilA、ΔhilD、ΔssrABhilA和ΔssrABhilAhilD有致病力低、生长速率良好、能有效刺激细胞因子产生等特性,具备作为沙门氏菌减毒活疫苗或载体的潜质。
- 唐正露曹堃张丽韩敏敏罗聪玉李郁
- 关键词：肠炎沙门氏菌生物学特性
- 鼠伤寒沙门氏菌hilD基因缺失株的免疫效果评价
- 2021年
- 为探究鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)hilD基因缺失株的免疫效果,本研究利用鼠伤寒沙门氏菌亲本株S.T(pcDNA3.1)、hilD基因缺失株S.T(ΔhilD+pcDNA3.1)和回补株S.T(ΔhilD+pcDNA3.1-hilD)免疫小鼠,通过比较小鼠的血清Ig G抗体效价、血清抑菌能力、白细胞吞噬细菌能力、CD4^(+)/CD3^(+)与CD8^(+)/CD3^(+)比率、相关细胞因子(IL-4,IL-10,IFN-γ,TNF-β,MCP-1)水平、脾淋巴细胞增殖指数SI和肠粘膜s Ig A抗体水平等指标,以评价S.T(ΔhilD+pcDNA3.1)的免疫效果。结果显示,与S.T(pcDNA3.1)和S.T(ΔhilD+pcDNA3.1-hilD)相比,S.T(ΔhilD+pcDNA3.1)免疫小鼠后,除白细胞吞噬细菌能力、CD4^(+)/CD3^(+)与CD8^(+)/CD3^(+)比率优于S.T(pcDNA3.1)与S.T(ΔhilD+pcDNA3.1-hilD)外,血清IgG抗体效价、血清抑菌能力、相关细胞因子水平(IL-4,IL-10,IFN-γ,TNF-β,MCP-1)、脾淋巴细胞增殖指数SI及肠粘膜s Ig A抗体水平均显著优于S.T(pcDNA3.1)与S.T(ΔhilD+pcDNA3.1-hilD);小鼠经二次免疫后攻毒,S.T(ΔhilD+pcDNA3.1)对鼠伤寒沙门氏菌提供的免疫保护率可达100%,且小鼠各脏器损伤程度最低;对肠炎沙门氏菌提供的交叉免疫保护率也达到60%。结果表明S.T(ΔhilD+pcDNA3.1)免疫小鼠后能诱导产生良好的体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫,在攻毒后能提供良好的免疫保护力及交叉免疫保护力。
- 张丽唐正露韩敏敏罗聪玉曹堃魏建忠李郁
- 关键词：鼠伤寒沙门氏菌免疫效果昆明小鼠
- 实时荧光定量PCR检测沙门氏菌flor基因和sul2基因方法的建立
- 根据GenBank中登录号分别为JN983048.1和JF313468.1的DNA序列,各设计一对用于flor基因和sul2基因荧光定量PCR检测的特异性引物;通过常规PCR,扩增沙门氏菌flor基因和sul2基因,并将...
- 王元兰刘宗梁刘军军曹堃孙裴魏建忠李郁
- 关键词：动物疾病沙门氏菌耐药机制基因检测实时荧光定量PCR
- 文献传递
- 一种肠炎沙门氏菌ssrAB基因缺失菌株
- 本发明公开了肠炎沙门氏菌ssrAB基因缺失菌株，敲除了ssrA基因689位至ssrB基因63位氨基酸共计915个碱基对的缺失菌株。本发明还公开了肠炎沙门氏菌ssrAB基因缺失菌株的构建方法，步骤包括：(1)获取ssrAB...
- 李郁陈传荣曹堃孙裴魏建忠罗聪玉
- 文献传递
- 腹泻仔猪沙门氏菌、致病性大肠杆菌的分离鉴定与耐药性检测
- 引言自2010年冬季以来,我国许多省份发生了大范围的生猪腹泻疫情,各种日龄的猪均有发生,其中以哺乳仔猪最为严重,表现为发病急、发病率和死亡率高的特点,经济损失巨大。当前造成生猪腹泻流行的主要病原是猪流行性腹泻病毒,且与其...
- 姚明曹堃刘涛孙裴魏建忠李郁
- 实时荧光定量PCR检测沙门氏菌flor基因和sul2基因方法的建立
- 根据GenBank中登录号分别为JN983048.1和JF313468.1的DNA序列,各设计一对用于flor基因和sul2基因荧光定量PCR检测的特异性引物;通过常规PCR,扩增沙门氏菌flor基因和sul2基因,并将...
- 王元兰刘宗梁刘军军曹堃孙裴魏建忠李郁
- 关键词：沙门氏菌实时荧光定量PCR
- 文献传递
- 基于GFP观察鼠伤寒沙门氏菌HilD介导ssrAB表达的初探
- 2018年
- 目的以绿色荧光蛋白(GFP)标记的鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium,S.Typhi)为研究对象,秀丽隐杆线虫为模式生物,初步探究体内环境下HilD对ssrAB表达的调控作用。方法通过基因工程技术分别构建携带gfp基因的亲本株S.Typhi(ssrAB-gfp+pcDNA3.1)、hilD基因缺失株S.Typhi(ΔhilD+ssrAB-gfp+pcDNA3.1)和hilD基因回补株S.Typhi(ΔhilD+ssrAB-gfp+pcDNA3.1-hilD)标记菌。利用荧光显微技术,观察3株标记菌在饲喂感染秀丽隐杆线虫体内外的GFP表达状况及其定殖分布,并通过ImegJ软件进行荧光强度的比较。结果成功构建的3株标记菌在秀丽隐杆线虫体内外均呈现绿色荧光,荧光强度为S.Typhi(ssrAB-gfp+pcDNA3.1)高于S.Typhi(ΔhilD+ssrAB-gfp+pcDNA3.1-hilD)和S.Typhi(ΔhilD+ssr AB-gfp+pcDNA3.1),S.Typhi(ΔhilD+ssrAB-gfp+pcDNA3.1-hilD)高于S.Typhi(ΔhilD+ssrAB-gfp+pcDNA3.1);3株标记菌在线虫体内主要定殖分布于口咽部和肠道中,荧光强度为口咽部较肠道高。结论GFP在鼠伤寒沙门氏菌中得到稳定表达,感染秀丽隐杆线虫后同样获得GFP的稳定表达,且在线虫的口咽部和肠道具有良好的定殖分布,首次初步证明体内环境下HilD介导ssrAB表达,但并非为单一的调控作用。
- 韩敏敏张丽周妮妮陈传荣曹堃李郁
- 关键词：鼠伤寒沙门氏菌GFP秀丽隐杆线虫
- 肠炎沙门氏菌ssrAB、hilA、hilD基因缺失菌株的构建及其生物学特性研究
- 沙门氏菌（Salmonella）能引起人和动物多种不同临床表现的沙门氏菌病，并为人类食物中毒的主要病原之一，对医学、兽医和公共卫生均十分重要。与沙门氏菌致病性相关的基因成簇地分布在基因组上，形成一个个相对独立的单位，称为...
- 曹堃
- 关键词：肠炎沙门氏菌致病力
- 文献传递
- 肠炎沙门氏菌ssrAB基因缺失菌株及其构建方法
- 本发明公开了肠炎沙门氏菌ssrAB基因缺失菌株，敲除了ssrA基因689位至ssrB基因63位氨基酸共计915个碱基对的缺失菌株。本发明还公开了肠炎沙门氏菌ssrAB基因缺失菌株的构建方法，步骤包括：(1)获取ssrAB...
- 李郁陈传荣曹堃孙裴魏建忠罗聪玉
