骆晨
- 作品数：3 被引量：8H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金重庆市医学科研计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 氢化可的松联合rmIL-2、rmIL-15体外扩增小鼠NK细胞
- 2015年
- 目的建立氢化可的松联合rmIL-2、rmIL-15体外扩增小鼠NK细胞的方法 ,观察该培养方法对扩增后NK细胞的纯度、扩增效率及功能的影响。方法应用免疫磁珠分选法(MACS)分离得到高纯度的小鼠脾脏CD3-CD49b+NK细胞,依据添加刺激因子的不同将纯化后的NK细胞分成A组(rmIL-2)、B组(rmIL-2+rmIL-15)和C组(氢化可的松+rmIL-2+rmIL-15)进行体外培养,每3日添加新鲜培养基及细胞刺激因子。采用台盼蓝拒染法进行活细胞计数;流式细胞术检测CD3-CD49b+NK细胞纯度;CFSE稀释法检测NK细胞的增殖效率;MTT比色法检测NK细胞杀伤活性;流式细胞术检测NK细胞膜表面CD107a的表达。结果磁珠分选后NK细胞纯度由分选前的(8.59±1.41)%提高为分选后的(91.60±1.33)%。体外扩增培养15 d后A组扩增的NK细胞纯度降低[(75.02±3.48)%,P<0.01],B组(85.87±4.79)%和C组(88.04±3.35)%与扩增前相比较无明显差异(P>0.05)。扩增15 d后C组NK细胞扩增倍数为(45.06±1.64)倍,显著高于A组(5.28±0.34,P<0.01)和B组(25.39±3.29,P<0.05)。细胞增殖实验结果表明培养第7天和第14天各组NK细胞增殖指数(PI)分别为A组(2.26±0.81)和(3.27±1.21),B组(4.62±1.45)和(15.82±3.92),C组(6.91±1.34)和(23.66±5.42)。培养第7天和第14天NK细胞增殖指数C组>B组>A组(P<0.05)。当效靶比为10∶1时,C组扩增后NK细胞肿瘤杀伤率为(81.27±2.32)%,显著高于A组[(37.20±7.32)%,P<0.01]和B组[(69.51±6.32)%,P<0.05]扩增后NK细胞。C组(49.32±4.36)%扩增后NK细胞CD107a表达水平显著高于A组[(9.37±1.82)%,P<0.001]和B组[(28.46±4.21)%,P<0.01)]NK细胞。结论氢化可的松联合rmIL-2+rmIL-15培养方案能够有效地体外扩增并活化小鼠NK细胞,为NK细胞的肿瘤过继免疫治疗应用于临床奠定了实验基础。
- 高祥黄婧刘钊骆晨罗诗樵
- 关键词：NK细胞
- 短期使用雷帕霉素联合调节性T细胞可延长小鼠移植心脏时间但不能抑制受体肿瘤发生
- 2017年
- 目的研究短期使用雷帕霉素(Rap)联合调节性T细胞(Treg)在诱导同种异体小鼠心脏移植物长期存活,同时探讨此方案对移植受体肿瘤免疫的影响。方法免疫磁珠法分离得到受体小鼠脾脏Treg,经CD3/CD28单克隆抗体磁珠及2000 U/m L重组小鼠白细胞介素2(rm IL-2)体外扩增后,流式细胞术检测纯度;建立小鼠腹腔同种异体心脏移植模型(H-2~b到H-2~d),分为对照组(单纯移植)、Rap组、Rap联合Treg组。Rap组连续14 d经腹腔注射Rap 1 mg/(kg·d),Rap联合Treg组注射相同剂量的Rap,并移植当天经尾静脉过继输注扩增后的1×107个Treg,同时设同基因移植组(H-2~d到H-2~d),每日观察移植心脏搏动并在相应时点进行组织学评价。在受体肿瘤免疫实验中设三组同种异体心脏移植(H-2~b到H-2~d)小鼠,同时经尾静脉过继输注B16-F10细胞(H-2~b)(受体来源),另三组同种异体心脏移植(H-2~d到H-2~b)小鼠经尾静脉过继输注B16-F10细胞(H-2~b)(供体来源),两周后比较肺部肿瘤结节数量。结果对照组移植心脏中位生存时间(MST)为7 d,Rap组为15 d,Rap联合Treg过继输注能够显著延长移植心脏MST至93 d,组织学显示长期存活心脏淋巴细胞浸润及慢性血管病变;对于供体来源肿瘤,对照组未见肿瘤结节,Rap组为(15±8)个,Rap联合Treg组小鼠肺部肿瘤结节为(14±7)个,后2组类似无显著性差异;对于受体来源肿瘤,对照组肿瘤结节为(70±12)个、Rap组为(28±9)个、Rap联合Treg组小鼠肺部肿瘤结节为(146±12)个,与对照组、Rap组相比均显著增加。结论短期使用低剂量Rap联合Treg能够显著延长小鼠移植心脏的存活时间,但仍不能抑制受体肿瘤的发生。
- 闫挺骆晨杨先模季磊罗诗樵
- 关键词：心脏移植肿瘤免疫
- 体外扩增的Treg细胞抑制NK细胞介导的抗肿瘤免疫被引量：8
- 2015年
- 目的研究CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)对NK细胞肿瘤杀伤力的影响及Treg细胞介导的抗肿瘤免疫抑制的机制;初步探讨过继输注NK细胞逆转Treg细胞介导的抗肿瘤免疫抑制的作用。方法免疫磁珠分离法(MACS)分离得小鼠脾脏Treg细胞及NK细胞,用流式细胞术检测其纯度。以CD3/CD28单克隆抗体磁珠和重组小鼠白介素2(rm IL-2)联合刺激体外扩增Treg细胞,重组小鼠白介素15(rm IL-15)、rm IL-2以及氢化可的松联合刺激体外扩增NK细胞。将扩增后Treg细胞及NK细胞按不同比例混合淋巴细胞培养,MTT比色法检测NK细胞的杀伤活性。将B16-F10小鼠黑色瘤细胞输注至Balb/c小鼠体内建立肺移植瘤模型[1],将荷瘤小鼠分为4组:A组单独接种B16-F10小鼠黑色瘤细胞;B组接种Treg细胞+B16-F10黑色素瘤细胞;C组接种B16-F10黑色素瘤细胞+NK细胞;D组接种Treg细胞+B16-F10黑色素瘤细胞+NK细胞。MTT比色法测定各实验组小鼠脾脏NK细胞的杀伤活性,并比较不同处理组小鼠肺部肿瘤结节数目。结果体外扩增后的Treg细胞对新鲜分选及扩增后的NK细胞活性均具有明显抑制作用(P<0.05),且抑制作用呈剂量依赖关系;A组荷瘤小鼠NK细胞活性低于正常小鼠,且B组荷瘤小鼠NK细胞活性较A组进一步降低(P<0.05);D组荷瘤小鼠NK细胞活性高于A组和B组荷瘤小鼠,但仍低于正常小鼠组(P<0.05)。B组荷瘤小鼠肺部移植瘤数目(105.33±10.97)较A组明显增多(17±4.58)(P<0.01);C组荷瘤小鼠肺部移植瘤数目(2.00±1.00)较A组(17±4.58)明显减少(P=0.037);D组荷瘤小鼠肺移植瘤数目(79.00±8.54)较B组明显降低(105.33±10.97)(P=0.030),但仍高于A组荷瘤小鼠(17±4.58)(P<0.001)。结论体内种植肿瘤会抑制机体NK细胞活性;输注体外扩增Treg细胞能够通过抑制NK细胞发挥抗肿瘤免疫抑制;过继输注体外扩增NK细胞能够部分逆转Treg细胞介导的抗肿瘤免疫抑制。
- 高祥郭涛黄婧刘钊骆晨罗诗樵
- 关键词：肿瘤免疫
