田学军
- 作品数：5 被引量：21H指数：3
- 供职机构：北京医科大学临床肿瘤学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- VEGF及其受体在人胃癌细胞MGC803的共表达及VEGF对MGC803细胞的促增殖效应被引量：3
- 1999年
- 血管内皮细胞生长因子 (VEGF)在许多肿瘤细胞有异常高表达 .应用RT PCR从人胃癌细胞MGC80 3中扩增获得了VEGF及其受体KDR的特异片段 ;细胞免疫化学结果显示在MGC80 3细胞上有KDR的强阳性着染 ,说明在胃癌细胞MGC80 3中存在VEGF及其受体KDR的共表达 .3H TdR掺入实验表明 :外源性VEGF16 5对胃癌细胞MGC80 3有明显的促增殖作用 ,抗VEGF16 5单抗及抗KDR单抗均可阻断VEGF的这种刺激作用 .从而提示VEGF可能作为肿瘤细胞的自分泌促生长因子发挥作用 ,为进一步认识VEGF在肿瘤发生中的作用提供了新的依据 .
- 田学军孟麟寿成超董志伟
- 关键词：肿瘤细胞VEGF胃癌细胞增殖共表达
- 人源噬菌体抗体库中血管内皮细胞生长因子抗体的筛选及活性鉴定被引量：1
- 2000年
- 目的 从人噬菌体Fab抗体库中筛选抗人血管内皮细胞生长因子 (VEGF)抗体克隆 ,并对其特异性及活性进行分析 ,为后续工作奠定基础。方法 从不同人群外周血淋巴细胞提取总RNA ,经逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)分别扩增轻、重链抗体Fab段 ,用噬菌体表面呈递技术构建抗体库 ,经过 4轮固相筛选及单克隆差异筛选 ,获得能结合VEGF的抗体克隆。在此基础上通过ELISA、Westernblot和3 H TdR参入分别对所获抗体克隆的特异性及中和活性进行分析 ,并对阳性克隆DNA进行测序分析。结果 构建了 1.5× 10 8人组合噬菌体抗体库 ,并筛选获得了结合VEGF的人噬菌体抗体Fab段。Westernblot表明所获抗体能较好结合VEGF ,3 H TdR参入实验显示其中一株抗体可中和VEGF引起的内皮细胞增殖作用。DNA序列分析表明所获抗体片段为人源VH6亚群抗体重链基因和VJC重排后的VL4亚群抗体轻链基因。结论 利用噬菌体抗体库技术可直接获得特异人源VEGF抗体 ,为进一步通过基因工程改造 ,获得有临床应用价值的VEGF抗体提供了新的可能性。
- 田学军寿成超董志伟
- 关键词：内皮生长因子VEGF抗体
- 人源噬菌体抗体库的构建及抗VEGF抗体的初步筛选分析被引量：4
- 2000年
- 应用噬菌体表面呈递技术构建人抗体组合文库 .筛选获得了结合血管内皮细胞生长因子( VEGF)的人噬菌体 Fab抗体 ,并对所获抗体的多样性进行了进一步分析 .从不同人群外周血淋巴细胞提取总 RNA,经反转录后采用家族特异性免疫球蛋白可变区基因引物与免疫球蛋白信肽序列引物 ,通过改变 PCR条件或半套式扩增分别获得全部亚型的轻、重链抗体 Fab段 ,并重组到噬粒载体 p Comb3H中 ,经电转化大肠杆菌 XL- 1 Blue,构建了 1 .5× 1 0 8完整组合抗体库 .利用 VEGF12 1对该库经过 4轮固相筛选后 ,获得 1 2个可与 VEGF特异结合的阳性克隆 .酶谱分析表明了所获抗体克隆的多样性 .为通过基因工程改造 ,进一步获得可用于临床的人源 VEGF抗体奠定了基础 .
- 田学军寿成超董志伟
- 关键词：多样性抗VEGF抗体肿瘤治疗
- VEGF的单抗制备及胃癌细胞MGC803表达VEGF的鉴定被引量：10
- 1999年
- 目的从胃癌细胞ＭＧＣ８０３克隆并在体外表达血管内皮细胞生长因子（ＶＥＧＦ），利用ＶＥＧＦ１２１单克隆抗体对其产物进行鉴定，为进一步明确肿瘤组织中ＶＥＧＦ来源，并以ＶＥＧＦ为靶点治疗肿瘤奠定基础。方法用杂交瘤技术制备ＶＥＧＦ１２１单克隆抗体（ＭｃＡｂ），通过ＥＬＩＳＡ、３ＨＴｄＲ掺入检测其活性；用ＲＴＰＣＲ从ＭＧＣ８０３细胞克隆ＶＥＧＦ基因，与原核表达载体ＰＧＥＸ２Ｔ重组，在大肠杆菌中进行表达，以Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ对表达产物进行鉴定。结果所制备的ＶＥＧＦＭｃＡｂ能特异性地同ＶＥＧＦ结合，并能中和ＶＥＧＦ对内皮细胞的促增殖作用；利用ＲＴＰＣＲ扩增出特异的ＶＥＧＦ基因片段，重组到ＰＧＥＸ２Ｔ表达载体中，在大肠杆菌ＸＬ１ｂｌｕｅ中得到了稳定高效表达的蛋白产物，并能特异性地被ＶＥＧＦ抗体所识别。结论在ＭＧＣ８０３细胞中存在ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达，提示肿瘤细胞是肿瘤组织中ＶＥＧＦ的重要来源。ＶＥＧＦＭｃＡｂ不仅可对其存在进行检测，而且可有效抑制ＶＥＧＦ对内皮细胞的促增殖作用。
- 田学军吴健孟麟寿成超董志伟
- 关键词：胃肿瘤VEGF单克隆抗体
- PCR条件及程序改变对抗体库多样性的影响被引量：3
- 1999年
- 用家族特异性免疫球蛋白可变区基因引物两两组合分别对轻、重链进行ＲＴＰＣＲ扩增．在不同退火温度下得到了全部轻链及大部分重链（１３／１６）可变区基因．当先用免疫球蛋白信号肽序列５′端引物与未扩出基因３′端引物组合进行一次ＰＣＲ，再以该产物为模板进行二次ＰＣＲ，则获得了未扩出三条重链的ＰＣＲ产物．这表明通过ＰＣＲ反应条件的改变及程序调整，可增加所获得可变区基因的种类及数量。
- 田学军寿成超寿成超孟麟
- 关键词：退火温度抗体库多样性
