郑晓静
- 作品数：31 被引量：59H指数：5
- 供职机构：首都医科大学附属北京胸科医院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项北京市卫生系统高层次卫生技术人才培养项目艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学环境科学与工程更多>>
- 结核分枝杆菌Rpf-DNA疫苗对Mtb感染小鼠免疫保护作用的研究
- 2012年
- 目的评价Mtb复苏因子DNA疫苗(resuscitation-promoting factor DNA,Rpf-DNA)对Mtb感染宿主的免疫保护作用。方法构建复苏因子D(Rpf D-DNA)和复苏因子E(Rpf E-DNA)质粒疫苗,180只BALB/c小鼠(4周龄)分为6组,每组30只,分别用空质粒、Rpf D-DNA质粒、Rpf E-DNA质粒、BCG、生理盐水免疫,H37Rv标准株气溶胶感染。检测血清复苏因子(Rpf)抗体、IFN-γ;RpfD、E刺激淋巴细胞后进行淋巴细胞增殖、细胞杀伤实验;检测细胞上清IFN-γ、IL-12、IL-2;对肺组织进行病理学检测和细菌负荷(CFU)计数。结果 (1)疫苗免疫组血清Rpf D、Rpf E抗体水平:Rpf D组0.32±0.1,Rpf E组0.39±0.1,BCG组0.02±0.01,空质粒组0.01±0.0,生理盐水组0.09±0.04,空白对照组0.03±0.01,RpfD组与RpfE组抗体水平与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有显著统计学意义,F值分别为Rpf D:45.6,43.2,45.1,45.7;Rpf E:51.6,53.6,51.0,52.2;P值均<0.01。血清IFN-γ:Rpf D组(43.9±24.8)pg/ml,Rpf E组(45.9±21.0)pg/ml,BCG组(21.0±11.0)pg/ml,空质粒组(7.9±4.9)pg/ml,生理盐水组(4.7±2.1)pg/ml,空白对照组(5.8±4.7)pg/ml,Rpf D、Rpf E质粒组与BCG组比较差异有统计学意义(F值分别为Rpf D:10.2;Rpf E:12.4;P值均<0.05),与空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有显著统计学意义,F值分别为Rpf D:15.6,17.8,17.3;Rpf E:17.5,21.1,20.7;P值均<0.01。(2)淋巴细胞增殖实验CCK-8:Rpf D组176.0±4.2,Rpf E组183.0±4.3,BCG组101.0±1.1,空质粒组100.0±6.8,生理盐水组104.0±8.4,空白对照组116.0±2.2,RpfD、RpfE质粒组与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有统计学意义,F值分别为Rpf D:9.5,10.1,10.0,9.0;Rpf E:11.2,12.9,11.7,10.3;P值均<0.05。细胞杀伤实验:Rpf D组32.0±3.2,Rpf E组30.0±4.2,BCG组16.0±5.9,空质粒组3.3±1.5,生理盐水组6.7±0.5,空白对照组7.3±3.5,Rpf D、Rpf E质粒组与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有统计学意义,F值分别为Rpf D:8.
- 邢爱英刘忠泉刘洋贾红彦李自慧郑晓静曹廷明杜凤娇杜博平古淑香张宗德
- 关键词：分枝杆菌细菌蛋白质类细胞因子类
- 结核分枝杆菌复苏因子E的真核表达及鉴定被引量：2
- 2010年
- 目的 构建结核分枝杆菌复苏因子E基因的真核表达质粒.方法 PCR扩增结核分枝杆菌复苏因子E基因片段.将片段克隆至PcDNA 3.1（一）载体,重组质粒测序正确后,转染至CHO细胞中,表达复苏因子E蛋白质.RT-PCR检测克隆基因mRNA在真核细胞中的表达,收集并纯化表达的蛋白质,SDS-PAGE分析和Western blot分析检测目的 蛋白的表达,淋巴细胞增殖实验（CCK-8）鉴定表达蛋白的免疫原性.结果 成功构建了结核分枝杆菌复苏因子E基因的真核表达质粒.RT-PCR证实克隆基因mRNA在真核细胞中表达,SDS-PAGE分析和Western blot分析均证实目的 蛋白在真核细胞中成功表达,淋巴细胞增殖实验（CCK-8）进一步证实了表达蛋白具有免疫原性.结论 我们成功构建了复苏因子E真核表达系统.
- 刘忠泉邢爱英贾红彦李自慧郑晓静曹庭明杜风娇杜博平古淑香张宗德
- 关键词：真核表达中国仓鼠卵巢细胞
- 结核病实验室诊断技术研发进展被引量：5
- 2010年
- 郑晓静张宗德
- 关键词：实验室诊断技术结核病控制发病人数痰结核菌培养痰涂片镜检
- 结核分枝杆菌Rv2352c基因的克隆表达及其抗原活性鉴定
- 2011年
- 目的构建含结核分枝杆菌（M．tb）rv2352c基因原核表达载体，经转化E．coli以表达Rv2352c融合蛋白，并研究其抗原性。方法用PCR扩增M．tbrv2352c基因，克隆入pET30a（＋）质粒，构建pET30a（＋）：rv2352c重组质粒，阳性克隆测序验证正确后转化入表达宿主大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导Rv2352c蛋白表达。经Ni＋-NTA层析柱纯化融合蛋白，通过SDS—PAGE和结核患者血清Westernblot进行鉴定。将纯化的重组蛋白分别免疫家兔，制备抗Rv2352c抗血清，抗血清的效价测定采用酶联免疫吸附试验法（ELISA），取兔抗血清与纯化蛋白Rv2352c通过Westernblot方法，检测抗体特异性。结果经酶切鉴定和测序分析证实rv2352c原核表达质粒构建正确，SDS．PAGE和Westernblot结果显示，在45kD处呈现单一蛋白条带。用重组蛋白Rv2352c免疫接种后可诱导出高滴度的特异性抗体。纯化蛋白通过Westernblot鉴定证实为目的蛋白，有较强的免疫原性。结论成功构建原核表达重组质粒pET30a（＋）：rv2352c，制备和纯化的Rv2352c融合蛋白具有较好的纯度和生物学功能，为进一步研究结核病的潜在分子标志物奠定基础。
- 曹廷明贾红彦古淑香郑晓静李自慧杜凤娇刘洋刘忠泉邢爱英杜博平马玛张宗德
- 关键词：分枝杆菌结核细菌蛋白质类抗原细菌重组融合蛋白质类
- 结核分枝杆菌对氨基水杨酸耐药相关基因的筛选及鉴定
- 2012年
- 目的筛选二线抗结核药物对氨基水杨酸（para-aminosalicylic acid，PAS）耐药相关基因。方法构建H37Rv转座子文库，筛选对氨基水杨酸耐药克隆，随机引物PCR扩增转座子插入突变基因。在PAS耐药菌株中鉴定耐药相关基因的突变情况。结果构建了较完整的H37Rv转座子文库，并筛选出201个PAS耐药克隆，经测序找到4个可能的PAS耐药相关基因。papA1基因检测到一个无义突变。结论酰基转移酶基因papA1可能为PAS耐药相关基因。
- 郑晓静杜博平贾红彦侯继增杨超高汉青杜凤娇邢爱英李自慧曹廷明张宗德李琦
- 关键词：耐药对氨基水杨酸基因
- 结核分枝杆菌Rpf-DNA疫苗对Mtb感染小鼠免疫保护作用的研究
- 2012年
- 目的评价Mtb复苏因子DNA疫苗（resuscitation-promoting factor DNA, Rpf-DNA）对Mtb感染宿主的免疫保护作用。方法构建复苏因子D（Rpf D—DNA）和复苏因子E（Rpf E-DNA）质粒疫苗，180只BALB／c小鼠（4周龄）分为6组，每组30只，分别用空质粒、Rpf D-DNA质粒、Rpf E-DNA质粒、BCG、生理盐水免疫，H37Rv标准株气溶胶感染。检测血清复苏因子（Rpf）抗体、IFN—γ；Rpf D、E刺激淋巴细胞后进行淋巴细胞增殖、细胞杀伤实验；检测细胞上清IFN-γ、IL-12、IL-2；对肺组织进行病理学检测和细菌负荷（CFU）计数。结果（1）疫苗免疫组血清RpfD、RpfE抗体水平：RpfD组0．32±0．1，RpfE组0．39±0．1，BCG组0．02±0．01，空质粒组0．01±0．0，生理盐水组0．09±0．04，空白对照组0．03±0．01，RpfD组与RpfE组抗体水平与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有显著统计学意义，F值分别为RpfD：45．6，43．2，45．1，45．7；RpfE：51．6，53．6，51．0，52．2：P值均〈0．01。血清IFN-γ：RpfD组（43．9±24．8）pg／ml，RpfE组（45．9±21．0）pg／ml，BCG组（21．0±11．0）pg／ml，空质粒组（7．9±4．9）pg／ml，生理盐水组（4．7±2．1）pg／ml，空白对照组（5．8±4．7）pg/ml，RpfD、RpfE质粒组与BCG组比较差异有统计学意义（F值分别为RDfD：10．2；RpfE：12.4；P值均〈0．05），与空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有显著统计学意义，F值分别为RpfD：15．6，17．8，17．3；RpfE：17．5，21．1，20．7P值均（0．01。（2）淋巴细胞增殖实验CCK-8：RpfD组176．0±4．2，RpfE组183．0±4．3，BCG组101．0±1．1，空质粒组100．0±6．8，生理盐水组104．0±8．4，空白对照组116．0±2．2，RDfD、RpfE质粒组与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有统计学意义，F值分别为RpfD：9．5，10．1，10．0，9．0；RpfE：11．2，12
- 邢爱英刘忠泉刘洋贾红彦李自慧郑晓静曹廷明杜凤娇杜博平古淑香张宗德
- 关键词：细菌蛋白质类细胞因子类
- 结核分枝杆菌RV3121基因的的原核表达及其抗原性分析
- 目的 前期相关研究表明结核分枝杆菌(M.tb) RV3121基因具有较好的特异性,本研究将构建其原核表达载体并获得其重组蛋白,并研究其抗原性,探讨其作为新型结核病特异性标志物的可行性.方法 用PCR方法扩增M.tb RV...
- 曹廷明贾红彦邢爱英杜凤娇刘忠泉李自慧郑晓静潘丽萍吕玲娜马玙张宗德
- 关键词：结核分枝杆菌抗原免疫原性
- 结核分枝杆菌对氨基水杨酸耐药相关基因的筛选及鉴定被引量：6
- 2012年
- 目的筛选二线抗结核药物对氨基水杨酸(para-aminosalicylic acid,PAS)的耐药相关基因。方法构建H37Rv转座子文库,筛选PAS耐药克隆,随机引物PCR扩增转座子插入突变基因。在PAS耐药菌株中鉴定耐药相关基因的突变情况。结果构建了较完整的H37Rv转座子文库,并筛选出201个PAS耐药克隆,经测序找到4个可能的PAS耐药相关基因,分别是Rv1534、pknF、ndh、papA1。papA1基因检测到一个无义突变,为papA1基因339位C→T点突变。结论酰基转移酶基因papA1可能为PAS耐药相关基因。
- 郑晓静杜博平贾红彦侯继增杨超高汉青杜凤娇邢爱英李自慧曹廷明张宗德李琦
- 关键词：结核分枝杆菌耐药对氨基水杨酸基因
- 结核分枝杆菌Rv0808基因的克隆、表达、纯化及抗原性研究
- 2012年
- 目的克隆、表达和纯化结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)体内诱导基因Rv0808,并制备多克隆抗体,研究其编码蛋白的抗原性,了解诊断应用价值。方法高保真PCR扩增Rv0808基因,克隆入表达载体pET-30a(+)后转化大肠杆菌BL21(DE3),测序正确的克隆用IPTG诱导表达。用镍柱纯化重组蛋白,然后用纯化蛋白免疫新西兰白兔,制备和纯化多克隆抗体。将重组蛋白分别与多克隆抗体和结核病患者血清进行Western blot鉴定,并尝试用多克隆抗体进行免疫组化染色检测巨噬细胞中M.tb。结果成功构建了pET-30a(+):Rv0808重组表达载体。经过重组蛋白的可溶性表达及纯化后,SDS-PAGE结果显示在66kD处有一单一蛋白条带。将此蛋白免疫新西兰白兔后获得了效价为6400的多克隆抗体。重组蛋白与多克隆抗体可以发生免疫反应,但却不能检测出结核患者血清中的相应抗体。用此多克隆抗体也无法检测出巨噬细胞中的M.tb。结论结核分枝杆菌Rv0808编码蛋白具有良好的免疫反应性和免疫原性,但可能对于结核病的诊断价值较小。
- 李自慧杜博平贾红彦古淑香邢爱英周立娟曹廷明郑晓静刘忠泉杜凤娇张宗德
- 关键词：结核分枝杆菌抗原
- 结核分枝杆菌复苏因子E的真核表达及鉴定
- 2010年
- 目的构建结核分枝杆菌复苏因子ENN的真核表达质粒。方法PCR扩增结核分枝杆菌复苏因子E基因片段。将片段克隆至PcDNA3．1（-）载体，重组质粒测序正确后，转染至CHO细胞中，表达复苏因子E蛋白质。RT—PCR检测克隆基因mRNA在真核细胞中的表达，收集并纯化表达的蛋白质，SDS—PAGE分析和Westenblot分析检测目的蛋白的表达，淋巴细胞增殖实验（CCK-8）鉴定表达蛋的免疫原性。结果成功构建了结核分枝杆菌复苏因子E基因的真核表达质粒。RT—PCR证实克隆基因mRNA在真核细胞中表达，SDS-PAGE分析和Westenblot分析均证实目的蛋白在真核细胞中成功表达，淋巴细胞增殖实验（CCK-8）进一步证实了表达蛋白具有免疫原性。结论我们成功地构建了复苏因子E真核表达系统。
- 刘忠泉邢爱英贾红彦李自慧郑晓静曾庭明杜风娇杜博平古淑香张宗德
- 关键词：真核表达
