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人ERGIC3基因稳定表达支气管上皮细胞株的建立与迁移能力被引量：1: 2014年; 目的构建含ERGIC3基因真核表达载体,并转染至支气管上皮细胞株BEAS-2B,筛选并建立ERGIC3稳定表达的细胞株,为进一步研究ERGIC3在肺癌中的作用奠定基础。方法采用RT-PCR方法获取人类ERGIC3基因的ORF框的DNA序列,构建逆转录病毒载体pLXSN-ERGIC3,用PT-67细胞包装后获得病毒颗粒;用病毒颗粒感染BEAS-2B细胞,通过G418筛选获取整合了外源基因ERGIC3的单克隆化细胞;采用定量RT-PCR和Western blot对ERGIC3稳定表达的细胞株进行鉴定,并用划痕实验分析稳定转染细胞株的迁移能力和形态学变化。结果获得4个ERGIC3稳定表达的BEAS-2B细胞株,ERGIC3的表达量均远高于对照组细胞,分别为对照组细胞的45.3、48.8、41.5和28.2倍,且稳定转染细胞株的迁移能力也显著增强(P<0.05),但其形态学没有明显变化。结论成功构建了含ERGIC3基因真核表达载体pLXSNERGIC3;筛选出多个ERGIC3基因稳定转染的BEAS-2B细胞株,且迁移能力明显提高。; 郑翔刘兴宇李学英吴明松; 关键词：稳定转染真核表达肺癌

吗啡依赖大鼠胃肠多巴胺递质和D2受体的改变被引量：2: 2015年; 目的:探讨吗啡依赖胃肠损伤的多巴胺(dopamine,DA)能作用机制.方法:吗啡剂量递增皮下注射训练10 d,建立大鼠吗啡条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)模型,生理盐水对照组(normal saline,NS)组和吗啡模型组(模型组)各取10只断头处死,取胃和十二指肠黏膜,荧光分光光度法检测其DA含量;另再取10只,采用Western blot检测其胃(胃贲门、胃体和幽门)和十二指肠组织多巴胺受体亚型2(dopamine D2 receptor,D2R)蛋白的表达.两组计量资料比较采用t检验.结果:模型组大鼠胃、十二指肠D A含量(18.41 n g/g±0.62 n g/g、9.01 n g/g±2.37ng/g)较NS组(32.01 ng/g±0.61 ng/g、17.31ng/g±2.58 ng/g)显著减少(胃:t=49.765,P=0.000;十二指肠:t=7.485,P=0.000);而模型组胃贲门、胃体和十二指肠的D2R平均光密度值(0.67±0.05、0.53±0.08和0.61±0.07)较NS组(0.43±0.08、0.33±0.07和0.44±0.05)明显升高(胃贲门:t=7.557,P=0.001;胃体:t=6.859,P=0.000;十二指肠:t=6.188,P=0.001);胃幽门变化差异无统计学意义(t=0.84,P=0.43).结论:吗啡依赖胃肠的损伤与胃肠DA系统的改变(递质和D2R受体)具有一定的相关性.; 徐靖宇白威峰涂平刘兴宇余守洋罗素元; 关键词：吗啡依赖十二指肠多巴胺多巴胺D2受体

内质网应激分子GRP78在不同时程吗啡依赖大鼠睾丸中的表达被引量：6: 2016年; 目的:通过观察内质网应激标志分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在不同时程吗啡依赖大鼠睾丸中的表达变化,探索内质网应激在阿片类药物成瘾中的作用。方法:SD大鼠分为生理盐水(NS)戒断组、NS消退组、NS点燃组、吗啡(Mor)戒断组、Mor消退组、Mor点燃组,前3组注射NS,后3组皮下注射Mor,建立条件性位置偏爱(CPP)大鼠模型。分别于戒断48 h、消退和用吗啡点燃时,取大鼠的睾丸组织,用免疫印迹法检测GRP78水平。结果:吗啡给药10 d并戒断48 h后,大鼠在伴药箱中的时间为(528.0±81.0)s,显著高于NS对照组(P<0.001),经过17 d自然戒断后在伴药箱中的时间为(396.8±116.9)s,显著低于其戒断时的时间(P<0.001),用吗啡点燃后在伴药箱中的时间为(530.7±91.9)s,显著高于消退时的时间(P<0.001),表明吗啡消退、点燃模型建立成功。GRP78在戒断48 h时表达下调(P<0.05)、消退时表达增加且略高于NS消退组;在点燃时,GRP78水平急剧上调(P<0.01)。结论:睾丸内质网应激参与了吗啡成瘾,内质网应激在阿片类药物成瘾者男性生殖功能紊乱中可能扮演重要角色。; 吴明松罗素元郑翔涂平白威峰刘兴宇; 关键词：药物依赖 GRP78 睾丸

新肺癌相关基因hERGIC3的克隆与生物信息学分析: 2014年; 目的构建hERGIC3基因的原核表达载体,并对其进行生物信息学分析,以期全面地了解hERGIC3蛋白的生物学功能。方法采用实时半定量聚合酶链反应（RT-PCR）方法获取人类hERGIC3基因的开放阅读框（ORF）框DNA序列插入pGEM-T Easy载体;选择多个软件对hERGIC3蛋白进行生物信息学分析。结果酶切结果显示,插入序列为目标序列,成功克隆了hERGIC3基因;生物信息学分析结果显示：hERGIC3蛋白由383个氨基酸残基组成,相对分子质量为43.2×10^3,理论等电点为5.68,蛋白比较稳定;hERGIC3为跨膜蛋白,跨膜区为20～42和345～367,膜外区域为1～19和368～383,膜内区域为43～344;二级结构含有110个α螺旋、94条延伸链、184个随机卷曲、15个潜在的磷酸化位点,hERGIC3可能参与了氨基酸、辅酶的生物合成以及脂肪、能量代谢和蛋白质翻译、转运等功能;hERGIC3含有ERGIC_N和COPⅡcoated_ERV 2个蛋白保守结构域,hERGIC3可能与PPKCSH、ERGIC1、ERGIC2、COPA、PSMD11等蛋白有相互作用。结论成功克隆了hERGIC3基因;深入地分析了hERGIC3的结构与功能,为下一步研究hERGIC3基因在肺癌中的病理生理功能奠定了理论基础。; 耿娜娜吴明松郑翔刘兴宇李学英; 关键词：肺肿瘤基因计算生物学

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刘兴宇