张碧成
- 作品数：34 被引量：25H指数：3
- 供职机构：江苏省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金引进国际先进农业科技计划江苏省农业科技自主创新基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生轻工技术与工程生物学更多>>
- 用于检测抗猪产肠毒素性大肠杆菌抗体的融合蛋白、制备方法及应用
- 本发明提供用于检测抗猪产肠毒素性大肠杆菌抗体的融合蛋白、制备方法及应用，属于生物技术领域。所述融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ？ID？NO:1所示。制备融合蛋白的方法，包括：将所述融合蛋白的编码基因插入pCold？I质粒，...
- 张雪寒俞正玉张强张碧成汪伟茅爱华周俊明何孔旺倪艳秀温立斌李彬周萍
- 文献传递
- 江苏地区奶牛场bla NDM阳性大肠杆菌的分子流行病学被引量：7
- 2020年
- 为了调查江苏地区奶牛场大肠杆菌中blaNDM基因的分子流行病学特征。从江苏部分地区3个奶牛场采集样品134份,使用PCR和测序的方法筛选blaNDM阳性大肠杆菌,同时对其进行超广谱β-内酰胺酶类基因的检测,采用药敏试验检测blaNDM阳性大肠杆菌对19种常用抗生素的敏感性,通过多位点序列分型(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)对携带NDM基因的大肠杆菌进行亲缘关系分析,通过质粒结合试验验证blaNDM基因的可转移性。结果显示,从134份奶牛场样品中共分离15株blaNDM阳性大肠杆菌,包括NDM-1和NDM-52种变体。15株blaNDM阳性大肠杆菌对多种抗生素均呈现不同程度的耐药,奶牛场15株blaNDM阳性大肠杆菌包括7种ST型,分别是ST410、ST846、ST206、ST101、ST1642、ST3076、ST1626,同一种ST型在粪便样品和环境样品中同时存在,表明相同ST型blaNDM阳性大肠杆菌可在动物与环境间相互传播。PFGE试验结果表明,15株blaNDM阳性大肠杆菌可以分为11个簇,同一样品的分离株倾向于相同的簇,在比较小的范围内存在PFGE图谱相同的现象;对15株菌株的结合子进行blaNDM基因的转移性试验结果表明,15株大肠杆菌的blaNDM耐药基因均通过质粒结合转移至受体菌J53。表明,blaNDM阳性大肠杆菌在江苏省部分地区奶牛场中流行相对较为严重,存在多重耐药现象,推测blaNDM基因主要通过质粒结合转移的方式进行水平传播,这为食品源耐药菌的监测及风险评估提供了依据。
- 王警张雪寒郭芸芸张碧成吴庆侠何孔旺
- 关键词：多位点序列分型药敏试验
- 同时检测肠出血性大肠杆菌O45和O145的纳米PCR试剂盒及其应用
- 本发明提供同时检测肠出血性大肠杆菌O45和O145的纳米PCR试剂盒及其应用，涉及出血性大肠杆菌的检测技术领域。该试剂盒，包括第一引物对和第二引物对，所述第一引物对包括序列如SEQ ID No：3和SEQ ID No：4...
- 张雪寒葛东红张碧成王警郭芸芸俞正玉倪艳秀温立斌李彬汪伟胡屹屹周俊明祝昊丹肖琦范宝超朱雪娇
- 文献传递
- 一种改善猪免疫抑制状态的中草药复方制剂及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种改善猪免疫抑制状态的中草药复方制剂及其制备方法和应用，属于兽药领域。本发明的中草药复方制剂为散剂或液体制剂，由刺五加、绞股蓝、叶下珠、荔枝草、紫草、马蹄香六种药材直接混合制得或将上述药材加水煎煮，去渣取液...
- 胡屹屹卢宇何孔旺温立斌祝昊丹张碧成张雪寒
- 文献传递
- 肝片吸虫Fh8标签融合表达口蹄疫O型病毒结构蛋白
- 2018年
- 口蹄疫病毒（foot and mouth disease virus，FMDV）的结构蛋白VP1难以实现体外的高效表达。本研究为获得良好免疫原性的VP1蛋白，选用肝片吸虫Fh8小肽段作为新型融合表达标签，构建重组Fh8-VP1免疫原，以期获得大肠杆菌中的高效表达。分别合成VP1的20440aa和129～169aa之间的核苷酸片段，并用2个甘氨酸（GG）连接2个片段，合成的核苷酸片段（△VP1）克隆入Fh8标签之后，构建重组菌BL21（DE3）／pCold I—Fh8-△VP1，SDS-PAGE分析蛋白表达形式，Westernblot方法检测重组His—Fh8-△VP1的抗原性。结果显示，成功构建重组质粒BL21（DE3）／pCold I—Fh8-△VP1，并在大肠杆菌BL21（DE3）中获得高效表达，且以包涵体形式存在于菌体蛋白，可与猪源FMDV阳性血清发生特异性反应。
- 孙小涵张雪寒张碧成张强张强
- 关键词：口蹄疫病毒VP1可溶性表达
- 一株大肠杆菌O157:H7弱毒株及其应用
- 本发明提供了一株大肠杆菌O157:H7弱毒株及其在应用，属于生物技术领域。该大肠杆菌O157:H7的弱毒株JSC2株的保藏号为CCTCC M 2017356。通过制备该弱毒株菌液，对BALB/c小鼠和乳兔进行攻毒试验发现...
- 张雪寒张碧成俞正玉叶青孙小涵郭芸芸汪伟茅爱华周俊明何孔旺
- 文献传递
- 鲜奶中肠出血性大肠杆菌O157∶H7的定量PCR检测被引量：2
- 2015年
- 为建立鲜奶中肠出血性大肠杆菌(Enterohaemorrhagic E.coli,EHEC)O157∶H7的特异性检测方法,以EHEC O157∶H7独有的遗传标志性基因Z0372为靶序列设计引物和探针,以梯度稀释的含有Z0372基因的重组质粒作为标准品进行Taqman荧光定量PCR反应,分析该方法的敏感性、特异性,并检测鲜奶样品以验证Taqman荧光定量PCR实用性和可靠性。结果表明,建立的定量PCR方法在1μl 1×101拷贝至1μl 1×106拷贝之间具有良好的线性关系,相关系数达到0.996,扩增效率112%。该方法的检测灵敏度为1μl 70拷贝,敏感性较高,而且特异性良好,与其他血清型大肠杆菌、沙门氏杆菌和志贺氏菌等易混淆菌株核酸之间没有交叉反应。批间和批内检测的变异系数(RSD)低于2%,表明该方法重复性良好。
- 俞正玉张碧成张强汪伟何孔旺倪艳秀温立斌李彬周萍张雪寒
- 关键词：荧光定量PCR鲜奶
- 用于检测抗猪产肠毒素性大肠杆菌抗体的融合蛋白、制备方法及应用
- 本发明提供用于检测抗猪产肠毒素性大肠杆菌抗体的融合蛋白、制备方法及应用，属于生物技术领域。所述融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。制备融合蛋白的方法，包括：将所述融合蛋白的编码基因插入pCold I质粒，...
- 张雪寒俞正玉张强张碧成汪伟茅爱华周俊明何孔旺倪艳秀温立斌李彬周萍
- 文献传递
- 大肠杆菌O157∶H7独有基因z3276的表达及初步鉴定被引量：2
- 2016年
- 经BLAST分析表明,开放阅读框z3276是大肠杆菌O157∶H7独有的遗传标志性基因,编码氨基酸与大肠杆菌Ⅰ型菌毛有较高的同源性,但z3276基因编码蛋白的生物学特性尚不明确。为了明确z3276基因编码蛋白的抗原性,进一步研究其在大肠杆菌O157∶H7致病过程中的作用。采用PCR方法扩增z3276基因,去除其信号肽序列,克隆到原核表达载体pColdⅠ,转化感受态细胞BL21获得阳性重组菌,IPTG诱导表达重组蛋白,以大肠杆菌O157∶H7全菌抗血清为一抗,Western blot方法检测重组z3276蛋白抗原性。结果显示,成功构建重组菌BL21(pColdⅠ-z3276),并获得高效表达;相对分子质量33 000,占菌体总蛋白30%以上,主要以包涵体形式存在于菌体沉淀中;且与兔源全菌多克隆抗血清发生特异性反应,条带明显。
- 张碧成张雪寒何孔旺范红结
- 关键词：大肠杆菌O157:H7原核表达
- 同时检测肠出血性大肠杆菌O45和O145的纳米PCR试剂盒及其应用
- 本发明提供同时检测肠出血性大肠杆菌O45和O145的纳米PCR试剂盒及其应用，涉及出血性大肠杆菌的检测技术领域。该试剂盒，包括第一引物对和第二引物对，所述第一引物对包括序列如SEQ ID No：3和SEQ ID No：4...
- 张雪寒葛东红张碧成王警郭芸芸俞正玉倪艳秀温立斌李彬汪伟胡屹屹周俊明祝昊丹肖琦范宝超朱雪娇
- 文献传递
