张雪寒
- 作品数：235 被引量：413H指数：10
- 供职机构：江苏省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金江苏省农业科技自主创新基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 用于检测抗猪产肠毒素性大肠杆菌抗体的融合蛋白、制备方法及应用
- 本发明提供用于检测抗猪产肠毒素性大肠杆菌抗体的融合蛋白、制备方法及应用，属于生物技术领域。所述融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ？ID？NO:1所示。制备融合蛋白的方法，包括：将所述融合蛋白的编码基因插入pCold？I质粒，...
- 张雪寒俞正玉张强张碧成汪伟茅爱华周俊明何孔旺倪艳秀温立斌李彬周萍
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株的分离鉴定及遗传变异分析被引量：11
- 2014年
- 从江苏某猪繁殖与呼吸综合征（ PRRS）发病猪场采集的血清样本中分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒（ PRRSV）毒株,对该毒株的生物学特性进行了鉴定,并对其Nsp2和ORF5序列进行测定和序列比对分析。利用细胞传代的方法对PRRSV检测阳性,PPV和PRV检测阴性的猪血清进行病毒分离。通过RT-PCR、CPE和IFA对PRRSV分离毒株进行鉴定,并测定其TCID50。测序获得Nsp2和ORF5基因,并利用DNAStar软件进行序列同源性和进化分析。成功分离获得1株PRRSV毒株,该毒株能够在Marc-145细胞上增殖并产生细胞病变,免疫荧光检测可观察到特异性荧光,TCID50为105.5。 Nsp2序列分析表明,该分离株具有HP-PRRSV 30个氨基酸缺失的基因特征,同时495-516位也存在缺失。分离株ORF5基因与其他参考毒株氨基酸同源性为57.1%-99.5%,与NJ-1106的同源性最高,为99.5%。系统进化树分析表明,该分离株属于北美型,与WUH4、NJ-1106等HP-PRRSV毒株属于同一分支。本试验分离得到一株HP-PRRSV变异毒株,为分析我国PRRSV的遗传变异和防控奠定了基础。
- 王小敏何孔旺周忠涛茅爱华俞正玉汪伟倪艳秀温立斌张雪寒郭容利李彬于洋
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 猪链球菌2型粘附相关因子荧光定量PCR检测方法的建立被引量：3
- 2014年
- 为了建立定量检测猪链球菌2型(SS2)粘附相关因子mRNA转录水平的荧光定量PCR方法,根据已报导的SS2粘附相关因子甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、分选酶A(SrtA)、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGD)及其管家基因aroA,用GenBank登录的核苷酸序列,设计特异性引物,提取SS2总RNA,经RT-PCR扩增和克隆了各粘附相关因子的核苷酸片段,以构建含有各自引物扩增序列的重组质粒,建立检测各粘附相关因子SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。该方法起始模板数的对数与荧光信号达到所设定荧光阈值所经历的循环数(Ct)之间线性关系好,相关系数均达到0.995以上;扩增产物形成单一的特异性熔解峰;初始模板的检出下限达到了1μl 1.0×102拷贝数;组内变异系数小于2%,说明该方法特异性强、敏感性高、重复性好。
- 汪伟何孔旺倪艳秀周俊明张雪寒俞正玉吕立新茅爱华温立斌王小敏李彬郭容利
- 关键词：猪链球菌2型STREPTOCOCCUSSUIS
- 肠出血性大肠杆菌O157:H7三基因缺失菌株
- 本发明涉及肠出血性大肠杆菌O157:H7三基因缺失菌株，属于生物技术领域。①抗性诱导，获得具有链霉素抗性的EHECO157:H7菌株。②缺失株构建，首先EHECO157:H7（△<I>hly</I>），而后依次构建EHE...
- 何孔旺张雪寒卢维彩赵攀登叶青温立斌郭容利李彬王小敏倪艳秀吕立新周俊明俞正玉茅爱华周萍沈江萍
- 猪博卡病毒的LAMP检测试剂盒及其检测方法
- 本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种猪博卡病毒的LAMP检测试剂盒及其检测方法；该试剂盒包含如下4条引物，所述引物的碱基序列分别如SEQIDNo:1、SEQIDNo:2、SEQIDNo:3、SEQIDNo:4所示；利用...
- 李彬何孔旺温立斌毛立倪艳秀吕立新张雪寒郭容利周俊明沈江萍
- 文献传递
- 肠出血性大肠杆菌O157:H7△hly△stx△toxB基因缺失株的构建被引量：1
- 2011年
- 肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)O157:H7是食源感染的人兽共患病原菌。志贺毒素(Shiga toxin,Stx)、溶血素(haemolysin,Hly)和ToxB是O157:H7重要的毒力因子。选用自杀性质粒pMEG375,体外构建具有同源臂的重组自杀性质粒,借助于sm10宿主菌获得O157:H7杂交菌株,通过同源重组,依次获得O157:H7(△hly△stx△toxB)基因缺失株,△hly△stx△toxB接种HEp-2细胞和感染链霉素处理的Balb/c小鼠,明确缺失株粘附定植的能力。经PCR鉴定,hly、stx和toxB基因分别被壮观霉素(Spc+)、庆大霉素(Gm+)和卡那霉素(Kan+)基因表达盒所代替,Western blot鉴定结果显示,O157:H7(△hly△stx△toxB)检测不到相应的Stx、Hly和ToxB蛋白。O157:H7(△hly△stx△toxB)生长特性与亲本株无明显差异。对于HEp-2细胞的粘附能力明显降低。Balb/c小鼠排菌时间和排菌量明显减少和降低。本研究成功获得O157:H7(△hly△stx△toxB),并且明确Stx、Hly和ToxB的缺失导致了O157:H7对HEp-2细胞和Balb/c小鼠的粘附和定植能力降低。本研究旨在为研制EHEC O157:H7基因缺失疫苗奠定物质基础。
- 张雪寒何孔旺赵攀登栾晓婷叶青温立斌倪艳秀周俊明李彬王小敏郭容利俞正玉茅爱华吕立新
- 关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7STX粘附
- 可视化-环介导等温扩增技术检测肠出血性大肠杆菌O157:H被引量：5
- 2020年
- 目的建立可视化的环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)联合横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)方法检测肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)0157:H7的分析方法。方法以EHEC 0157:H7的遗传标志性基因z3276基因序列为检测靶标设计6条LAMP特异性引物,其中2条环引物分别标记异硫氰酸荧光素和地高辛,用LFD检测扩增产物,建立EHEC0157:H7 LAMP-LFD检测方法。结果所建立的检测方法能够特异性的检测EHEC 0157:H7,与试验对照菌株EHEC 026、0145、045、0121,及其他主要大肠杆菌血清型025、078、0103、O111、0127、0138、0139、0141,及禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)E058、肠致病性大肠杆菌(enteropathogenic Escherichia coli,EPEC)SEC627、EPEC SEC689、K12-MG1655、BL21,和其他种属的受试菌,不存在交叉反应;对EHEC 0157:H7纯培养物的最低检测限为1.3 CFU/mL。结论本研究所建立的LAMP-LFD检测方法特异性和敏感性良好,操作简单,结果可视。
- 夏学峰张碧成王警张红印张雪寒
- 关键词：肠出血性大肠杆菌环介导等温扩增技术
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的LAMP检测试剂盒
- 本发明涉及一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的LAMP检测试剂盒属于生物技术领域。该试剂盒包含如下4条引物，所述引物的碱基序列分别如SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4所示；利用...
- 李彬何孔旺杜露平温立斌倪艳秀张雪寒郭容利冯志新
- 文献传递
- 黏蛋白2对猪流行性腹泻病毒感染的拮抗作用研究
- 2023年
- 肠黏膜屏障的完整性与猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的致病性密切相关。黏蛋白2(Mucin 2,Muc2)作为肠黏膜屏障的重要组成蛋白,在阻止病原体、毒素和异物入侵等方面发挥重要作用。本文旨在探究黏蛋白Muc2对PEDV复制的拮抗作用。通过观察PEDV感染仔猪空肠黏膜屏障情况,利用RNA干扰策略和分子病毒学检测方法在细胞水平上研究分析Muc2表达水平与PEDV复制的关系,并进一步探讨猪源Muc2天然蛋白发挥抗PEDV作用的具体阶段。结果显示:PEDV感染仔猪空肠段进行PAS染色发现,病毒感染后肠绒毛表面黏液层变薄,结构被破坏,杯状细胞明显减少;与对照组相比,干扰Muc2基因能够上调PEDV⁃N的mRNA及蛋白水平;Muc2蛋白添加后显著抑制PEDV⁃N蛋白的表达,且病毒mRNA水平显著下降(P<0.05);在病毒感染前使用50μg/mL Muc2蛋白预处理1 h后,PEDV⁃N mRNA相对表达量极显著下降(P<0.001),而在病毒吸附、入侵和复制阶段无显著差异(P>0.05),表明Muc2具有降低PEDV侵染宿主细胞的作用。综上所述,本研究验证了Muc2在PEDV感染中的拮抗作用,发现了Muc2主要作用于病毒侵染宿主细胞阶段,为深入探讨Muc2与PEDV间的作用机制奠定了基础,也为制定PEDV新防控策略提供了思路。
- 张雪张雪钱嘉莉徐红徐红宝梅英刘诗雨胡朝阳张雪寒胡朝阳张雪寒郭容利贾斌
- 关键词：猪流行性腹泻病毒MUC2肠道屏障
- ETEC肠毒素基因多重PCR检测方法的建立
- 本实验以三种毒素特异的三对引物同时PCR扩增.旨在建立从基因水平检测肠毒素性大肠杆菌毒素的多重PCR方法.
- 张雪寒何孔旺张书霞华荣虹
- 关键词：肠毒素性大肠杆菌多重PCR方法
- 文献传递
