周俊明
- 作品数：175 被引量：240H指数：9
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- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 用于检测抗猪产肠毒素性大肠杆菌抗体的融合蛋白、制备方法及应用
- 本发明提供用于检测抗猪产肠毒素性大肠杆菌抗体的融合蛋白、制备方法及应用，属于生物技术领域。所述融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ？ID？NO:1所示。制备融合蛋白的方法，包括：将所述融合蛋白的编码基因插入pCold？I质粒，...
- 张雪寒俞正玉张强张碧成汪伟茅爱华周俊明何孔旺倪艳秀温立斌李彬周萍
- 文献传递
- 猪链球菌2型丝氨酸/苏氨酸磷酸酶的鉴定和特性分析被引量：2
- 2014年
- 利用PCR扩增猪链球菌2型强毒株SS2-1丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(STP)的编码基因,克隆到表达载体pET-30a(+),在大肠杆菌BL21中进行原核表达,获得重组蛋白质rSsSTP。重组蛋白质经His蛋白质层析柱纯化后,利用pNPP分析rSsSTP的酶活性。结果显示rSsSTP为Mn2+依赖的磷酸酶,最适离子浓度为2 mmol/L,最佳反应温度为37℃,最佳pH值为8.0。
- 祝昊丹倪艳秀周俊明俞正玉茅爱华吕立新何孔旺
- 关键词：猪链球菌2型丝氨酸STREPTOCOCCUSSUIS
- 猪链球菌2型粘附相关因子荧光定量PCR检测方法的建立被引量：3
- 2014年
- 为了建立定量检测猪链球菌2型(SS2)粘附相关因子mRNA转录水平的荧光定量PCR方法,根据已报导的SS2粘附相关因子甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、分选酶A(SrtA)、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGD)及其管家基因aroA,用GenBank登录的核苷酸序列,设计特异性引物,提取SS2总RNA,经RT-PCR扩增和克隆了各粘附相关因子的核苷酸片段,以构建含有各自引物扩增序列的重组质粒,建立检测各粘附相关因子SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。该方法起始模板数的对数与荧光信号达到所设定荧光阈值所经历的循环数(Ct)之间线性关系好,相关系数均达到0.995以上;扩增产物形成单一的特异性熔解峰;初始模板的检出下限达到了1μl 1.0×102拷贝数;组内变异系数小于2%,说明该方法特异性强、敏感性高、重复性好。
- 汪伟何孔旺倪艳秀周俊明张雪寒俞正玉吕立新茅爱华温立斌王小敏李彬郭容利
- 关键词：猪链球菌2型STREPTOCOCCUSSUIS
- 肠出血性大肠杆菌O157:H7三基因缺失菌株
- 本发明涉及肠出血性大肠杆菌O157:H7三基因缺失菌株，属于生物技术领域。①抗性诱导，获得具有链霉素抗性的EHECO157:H7菌株。②缺失株构建，首先EHECO157:H7（△<I>hly</I>），而后依次构建EHE...
- 何孔旺张雪寒卢维彩赵攀登叶青温立斌郭容利李彬王小敏倪艳秀吕立新周俊明俞正玉茅爱华周萍沈江萍
- 猪博卡病毒的LAMP检测试剂盒及其检测方法
- 本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种猪博卡病毒的LAMP检测试剂盒及其检测方法；该试剂盒包含如下4条引物，所述引物的碱基序列分别如SEQIDNo:1、SEQIDNo:2、SEQIDNo:3、SEQIDNo:4所示；利用...
- 李彬何孔旺温立斌毛立倪艳秀吕立新张雪寒郭容利周俊明沈江萍
- 文献传递
- 肠出血性大肠杆菌O157:H7△hly△stx△toxB基因缺失株的构建被引量：1
- 2011年
- 肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)O157:H7是食源感染的人兽共患病原菌。志贺毒素(Shiga toxin,Stx)、溶血素(haemolysin,Hly)和ToxB是O157:H7重要的毒力因子。选用自杀性质粒pMEG375,体外构建具有同源臂的重组自杀性质粒,借助于sm10宿主菌获得O157:H7杂交菌株,通过同源重组,依次获得O157:H7(△hly△stx△toxB)基因缺失株,△hly△stx△toxB接种HEp-2细胞和感染链霉素处理的Balb/c小鼠,明确缺失株粘附定植的能力。经PCR鉴定,hly、stx和toxB基因分别被壮观霉素(Spc+)、庆大霉素(Gm+)和卡那霉素(Kan+)基因表达盒所代替,Western blot鉴定结果显示,O157:H7(△hly△stx△toxB)检测不到相应的Stx、Hly和ToxB蛋白。O157:H7(△hly△stx△toxB)生长特性与亲本株无明显差异。对于HEp-2细胞的粘附能力明显降低。Balb/c小鼠排菌时间和排菌量明显减少和降低。本研究成功获得O157:H7(△hly△stx△toxB),并且明确Stx、Hly和ToxB的缺失导致了O157:H7对HEp-2细胞和Balb/c小鼠的粘附和定植能力降低。本研究旨在为研制EHEC O157:H7基因缺失疫苗奠定物质基础。
- 张雪寒何孔旺赵攀登栾晓婷叶青温立斌倪艳秀周俊明李彬王小敏郭容利俞正玉茅爱华吕立新
- 关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7STX粘附
- 猪链球菌3型分离菌的生物学特性及致病性被引量：1
- 2020年
- 为研究猪链球菌3型(Ss3)分离菌的生物学特性及致病性,对疑似Ss进行培养、染色、生化试验、猪链球菌PCR鉴定、血清分型PCR鉴定、多位点序列分型(MLST型)PCR鉴定,并对小鼠和仔猪进行致病性试验。结果显示,3株分离菌(分别命名为JSHZ菌株、GD7菌株、H30菌株)均呈革兰氏阳性,Ss PCR鉴定显示为阳性,血清分型PCR结果表明分离到的菌株为Ss3,序列型(ST)分别属于ST27型(JSHZ菌株)、ST1004型(GD7菌株)和ST 117型(H30菌株);3株分离菌的生化特性与猪链球菌相符;3株分离菌经腹腔注射均可致死Balb/C小鼠,半致死量(LD50)分别为2.0×107CFU/ml、3.5×107CFU/ml和2.5×108CFU/ml。选择3株分离菌中毒力较强的JSHZ菌株进行仔猪致病性试验,感染仔猪会出现明显的关节红肿、跛行,体温多数升高至40.5~41.8℃,精神萎靡,食欲减少等症状;高剂量(每头仔猪注射JSHZ菌数6.0×109 CFU)处理可致仔猪出现食欲废绝、神经症状,甚至濒死,并在其脑组织中分离到Ss3。本研究结果为进一步开展Ss3的防控研究奠定了基础。
- 肖琦赵霞玲钱雯娴郭佳慧檀济敏俞正玉汪伟孙珂倪艳秀祝昊丹周俊明姚火春范红结牛家强索朗斯珠何孔旺
- 关键词：生物学特性
- 类圆环病毒因子P1感染对猪外周血T淋巴细胞含量和增殖活性的影响被引量：4
- 2009年
- 探讨类猪圆环病毒因子P1感染对猪细胞免疫功能的影响。将12头30日龄广西巴马小型猪随机分成试验组和对照组,每组6头。在猪感染P1后第3,8,17,24,31和40天,采用血常规和单色流式细胞术分析猪外周血T淋巴细胞的含量,通过WST法对其增殖活性进行检测。P1感染组的T淋巴细胞数量(绝对数和相对数)整体趋势低于对照组,而两组的T淋巴细胞增殖活性没有显著差别。P1感染对机体的细胞免疫功能有一定程度的影响。
- 温立斌何孔旺杨汉春郭容利钟书霖周俊明陈梦海
- 关键词：广西巴马小型猪T淋巴细胞计数
- 规模化猪场传染性胸膜肺炎放线杆菌血清5型的分离与鉴定
- 从江苏镇江某猪场出现呼吸困难、肺脏有出血性纤维渗出性病变的死猪中分离出1 株革兰阴性球杆菌,PCR 鉴定该菌为猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清5 型。小鼠毒力试验显示其有较强的致病力。药敏试验显示该分离菌株对氟哌酸、头孢噻呋...
- 俞正玉周俊明倪艳秀茅爱华祝昊丹吕立新李彬何孔旺
- 关键词：猪传染性胸膜肺炎放线杆菌
- 猪链球菌2型支链氨基酸转移酶的原核表达及纯化
- [目的 ]利用大肠杆菌表达系统对猪链球菌2 型强毒株SS2-1 中的支链氨基酸转移酶的编码基因ilve 进行原核表达和纯化.[方法]利用PCR 扩增强毒株SS2-1 的ilve,将其克隆到表达质粒pET28a 中,构建重...
- 王锐倪艳秀孙珂周俊明王丹丹俞正玉何孔旺宋小凯祝昊丹
- 关键词：猪链球菌2型原核表达
