李静
- 作品数：15 被引量：16H指数：2
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- 发文基金：浙江省自然科学基金国家自然科学基金浙江省重点科技创新团队项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 调控植物果实和种子大小的新基因及其应用
- 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种调控植物果实和种子大小的新基因及其应用。本发明公开了一种与植物果实/种子大小相关的TAF12b基因，为以下任一：来源于水稻的OsTAF12b基因、来源于番茄的同源基因SlTAF12b或...
- 李静郭留明齐盼盼袁正杰吕明芳张恒木
- 一个植物原纤维蛋白基因的克隆及其表达特性分析
- 2019年
- 植物原纤维蛋白(fibrillin, FBN)作为一大类保守的蛋白,广泛分布于植物界,但其在本氏烟( Nicotiana benthamiana )中的生物学特性和功能迄今尚不清楚。为了分析其表达特性和功能,采用RT-PCR技术从本氏烟中扩增并克隆了1个 FBN 基因( NbFBN )。进化树分析显示, NbFBN 和拟南芥 FBN1a 、 FBN1b 的亲缘关系较近;同源分析表明,它与不同植物来源的 FBN 基因高度同源,其C-端部分尤为保守。定量分析发现, NbPAP 在叶片和花中的表达水平较高,同时发现该基因受到干旱胁迫和激素ABA的诱导,表明该基因可能参与非生物逆境响应过程。
- 姜瑶瑶李静蔡年俊陈剑平张恒木
- 关键词：同源性分析定量PCR非生物逆境
- 中国小麦花叶病毒(CWMV)复制酶基因在病株体内的表达分析被引量：2
- 2017年
- 中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)是引起我国小麦花叶病的重要病原之一,其基因组由2条单链正义RNA片段(RNA1-2)组成。本研究根据发表的基因组序列设计特异性引物,扩增了CWMV复制酶基因的部分片段(nt102~1101),并克隆至原核表达载体pGEX-6P1,然后导入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)pLysS中诱导表达。重组的复制酶蛋白经亲和层析纯化后免疫家兔制备多克隆抗体。Western-blot分析表明该抗体具有高度的特异性,能用于病株体内CWMV复制酶蛋白的检测。检测分析显示在病株体内,CWMV基因组RNA1可直接充当其复制酶基因的mRNA;在感染的细胞中,其复制酶组分主要是RNA1 ORF1编码的蛋白,分子量约153 kDa,且特异性地定位于膜结构上。
- 张芬张芬羊健羊健李静陈剑平
- 关键词：多克隆抗体复制酶
- 一种快速检测水稻黑条矮缩病病原的方法
- 本发明涉及一种快速检测水稻黑条矮缩病病原的方法，应用水稻黑条矮缩病毒和南方水稻黑条矮缩病毒的一对病毒特异性引物以待测样本总RNA为模板进行RT-PCR扩展，扩增产物在封闭条件下经高分辨率溶解曲线分析判断水稻黑条矮缩病的病...
- 张恒木羊健李静刘晓雅项聪英刘靖陈剑平
- 一个水稻小热休克蛋白基因的克隆和鉴定被引量：5
- 2016年
- 小分子热休克蛋白(SHSP)广泛存在于各类生物体中且在生物发育和逆境响应过程中发挥重要作用。我们克隆了一个水稻小热休克蛋白基因(OsSHSP17.6),序列分析表明该基因编码区为477bp,可编码一个含158个氨基酸的多肽,分子量约17.6kD。序列分析显示该类SHSP在不同的植物中是保守的,在分类上隶属于CI类。实时定量RT-PCR分析显示热激处理可显著增强该基因的转录;Western blotting分析显示该蛋白大小与预期一致,且其含量在热激处理时大幅度增加。这些结果一致表明OsSHSP17.6可能参与了水稻热应激反应,这为进一步鉴定OsSHSP17.6的功能提供了基础。
- 项聪英蔡年俊李静羊健陈剑平张恒木
- 关键词：热激处理
- 一个水稻β-肌动蛋白基因的克隆及其亚细胞定位被引量：4
- 2014年
- 目的:克隆一个水稻β-肌动蛋白基因,并研究其蛋白的亚细胞分布。方法:利用RT-PCR技术从日本晴水稻中扩增得到β-肌动蛋白基因Os Actin,将其与拟南芥肌动蛋白基因家族进行分子进化分析;利用胶体金免疫电镜技术对水稻β-肌动蛋白基因进行定位分析。结果:核苷酸和氨基酸序列分析表明,Os Actin与水稻的Os RAc1基因有较高的同源性(98%);胶体金免疫电镜定位结果显示β-肌动蛋白在细胞核、细胞质中均有分布。结论:获得了水稻β-肌动蛋白基因Os Actin,并研究了其蛋白在水稻韧皮部内的分布,为进一步探讨该基因的功能及作用机理奠定了基础。
- 李培培谢礼薛进羊健李静严成其张恒木陈剑平
- 关键词：克隆分子进化分析亚细胞定位
- 中国小麦花叶病毒富含半胱氨酸蛋白多克隆抗体的制备与应用
- 2023年
- 中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)是小麦花叶病的重要病原体之一,长期威胁小麦的产量和品质;CWMV富含半胱氨酸蛋白(cysteine-rich protein,CRP)在病毒侵染过程中具有重要而复杂的功能。为了深入研究CRP的功能和CWMV侵染机制,本研究采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)从CWMV侵染的小麦叶片中获得CRP基因编码区,将其克隆至原核表达载体pET-32a上,并将重组质粒pET-CRP转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达;通过镍柱亲和层析法纯化CRP重组蛋白,并用作抗原免疫新西兰白兔,制备多克隆抗体。蛋白质印迹法、间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和斑点ELISA分析结果显示:纯化的CRP抗体不仅具有高度的特异性,而且效价高达1∶4096000,是未纯化抗体效价的4倍;该抗体能识别0.5 ng抗原,显示出较高的灵敏度;在1∶120000稀释条件下,该抗体能特异且灵敏地识别天然CRP。综上所述,本研究所制备的CRP抗体不但可用于田间CWMV病株样品的精准诊断,还可用于植物体内瞬时表达CRP的检测分析,为后续CRP检测、定量分析及其亚细胞定位等研究提供了依据。
- 戴远兴郭留明何婧沈峥嵘耿艳飞吕明芳袁正杰李静张恒木
- 关键词：原核表达蛋白质纯化多克隆抗体
- 白背飞虱酵母双杂交cDNA文库的构建被引量：2
- 2017年
- 白背飞虱(Sogatella furcifera Horváth)作为一种迁飞性害虫,不仅自身危害水稻,而且以持久性方式传播南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)。为了研究白背飞虱与SRBSDV之间的相互作用,需要构建一个高质量的酵母筛选文库,试验利用Gateway技术构建了白背飞虱cDNA酵母表达文库,检测分析显示,白背飞虱初级文库库容量约为1.72×10~7CFU,cDNA插入片段主要分布在500~2 000 bp,重组率约为95.8%;次级文库库容量约为1.73×10~7CFU,cDNA插入片段主要分布在400~2 000bp,重组率为100%;Y187酵母菌株的白背飞虱酵母双杂交cDNA文库库容量约5.09×10~7CFU,插入片段大小在750~2 000 bp,重组率100%,再随机挑选36个单克隆进行测序分析,所得结果与Gen Bank数据库比对显示36个克隆中含有22个不同的基因,长度在750~2 000 bp,这些分析表明,该文库可以用于酵母双杂交的后续筛选,为研究白背飞虱与SRBSDV之间的互作奠定了基础。
- 薛进薛进李静羊健梁瑶陈剑平陈剑平
- 关键词：白背飞虱GATEWAY技术酵母双杂交CDNA文库
- 外源水杨酸对水稻苗期生长与防卫相关基因表达的影响被引量：2
- 2021年
- 为探究外源水杨酸(SA)对水稻苗期生长与SA相关防卫反应的影响,用不同浓度外源SA喷施苗期日本晴水稻,利用分光光度计测定水稻苗期生长关键指标叶绿素含量,采用qRT-PCR定量分析外源SA对水稻苗期SA合成基因PAL1、SA受体基因NPR1、SA信号途径下游的转录因子WRKY45/WRKY76和防卫基因PR1a/PR1b的表达水平。结果表明,外源SA对上述水稻基因的影响不同,即低浓度SA在一定程度上促进水稻苗期叶绿素积累,并显著影响水稻苗期防卫相关基因的表达水平;高浓度SA抑制叶绿素的积累,影响水稻的正常生长。综合比较结果显示,喷施2.0 mmol·L-1外源SA对水稻苗期防卫相关基因表达的影响最为有效,该结果为进一步探索外源SA促进水稻苗期生长并提高水稻苗期防卫能力的作用研究奠定基础。
- 刘寒戴远兴吕明芳袁正杰李静严成其张恒木
- 关键词：水稻水杨酸
- 一个水稻小热休克蛋白的异源表达及寡聚特性分析被引量：2
- 2017年
- 【目的】在前期研究中,本实验室已克隆了一个水稻小热休克蛋白基因(OsSHSP17.6),并发现该基因的表达明显受到热激和病毒侵染调控,表明该蛋白可能在逆境胁迫过程中起重要作用。本研究的目的在于进一步明确OsSHSP17.6的特性。【方法】在本研究中,进一步将该基因亚克隆至原核表达载体p ET-32a并导入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)pLysS诱导表达,通过亲和层析的方法纯化了该重组蛋白,进一步用于非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blotting分析。【结果】异源表达的重组OsSHSP17.6能减轻IPTG对宿主菌的毒害。非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blotting分析显示纯化的重组OsSHSP17.6蛋白在体外能形成同源二聚体和寡聚体。【结论】这些结果支持OsSHSP17.6是一个有功能的分子伴侣蛋白并表明该蛋白可能通过形成同源寡聚体的方式参与逆境胁迫反应,这为进一步明确OsSHSP17.6的功能机制奠定基础。
- 蔡年俊郭留明李静项聪英羊健陈剑平张恒木
- 关键词：异源表达
