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广州地区婴幼儿感染Noro病毒基因型的初步研究被引量：2: 2006年; 目的探讨广州地区婴幼儿腹泻中感染Noro病毒的基因型。方法用Clustal W比对GⅡ组Noro病毒后，设计处于ORF1与ORF2连接点两旁两对简并引物，进行巢式RT—PCR扩增出目标片段，克隆于T载体上，测定序列，对ORF1与ORF2连接点两旁序列和衣壳蛋白N／S区用Clustal W进行同源性分析，用phylip 3．65软件、邻接法构建进化树。结果标本NVgz100、NVgz10成功扩增出ORF1与ORF2连接点两旁1208bp片段（相对于Hawaii virus，U07611位置为4476—5683），包含ORF1的3’端RdRp的大部分基因和ORF2基因的5’端的S区。对标本NVgz100、NVgz10与另一实验NVgz01（DQ369797）的1208bp进行同源性分析发现，3份标本与GⅠ组同源性为58％～61％，与GⅡ组同源性为74％～92％；将这3份标本与GⅠ、GⅡ组构建进化树，可发现NVgz100、NVgz10和NVgz01与GⅡ组Bristol等病毒密切相关，将NVgz100、NVgz10和NVgz01的衣壳蛋白N／S区与GⅡ组各基酬型进行同源性比较，发现3份标本与GⅡ4基因型Camberwell、Bristolt Grimsby同源性较高（92％～96％），与其他基因型同源性为70％～73％，以N／S区构建进化树可发现3份标本与Camberwell、Bristol、Grimsby、Lordsdale处于同一簇中。结论本实验结果表明Noro病毒株以GⅡ组为主，病毒流行的基因型为与Camberwell、Bristol、Grimsby和Lordsdale等密切相关的GⅡ-4基因型。; 钟家禹周荣朱冰区文玑龚四堂; 关键词：同源性比较

肠道病毒71型重组VP2蛋白原核表达及初步鉴定被引量：1: 2013年; 目的利用大肠杆菌表达系统表达并纯化肠道病毒71型(EV71)VP2蛋白,并对重组蛋白功能进行初步鉴定。方法 PCR扩增EV71 VP2基因,在测序正确的基础上,将其插入表达载体形成pET32a(+)/VP2,转化BL21(DE3),IPTG诱导表达,经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)初步分析蛋白表达产物,利用Ni+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,经Western blot初步验证其抗原性。结果成功构建pET32a(+)/VP2重组质粒,经大肠杆菌表达,纯化获得相对分子质量约为48000的融合蛋白,经Western blot证实其抗原性良好。结论表达并鉴定了VP2抗原,为EV71疫苗研制及检测试剂盒的研发奠定了基础。; 施静朱冰钟家禹王长兵许甜甜; 关键词：肠道病毒71型 VP2蛋白原核表达

2016年广州市H1N1流感病毒变异情况分析: 2019年; 目的对2016年广州市15株流感病毒8个蛋白的氨基酸位点进行变异分析,了解病毒耐药性和致病性的变化,为后续病毒研究、寻找变异规律提供科学依据。方法从患者咽拭子中提取病毒,采用RT-PCR方法对病毒进行鉴定,应用二代测序技术测定15个分离株的全基因组序列,通过MAGA6.0软件与参考株pdm2009(A/California/07/2009(H1N1))进行比对,分析氨基酸变异情况。结果15个H1N1流感病毒分离株与参考株pdm2009(A/California/07/2009(H1N1))进行比对发现,8个蛋白片段的变异程度不高,HA蛋白受体结合位点未发现变异,NA蛋白在与耐药性有关的氨基酸位点均未发现变异,表明对神经氨酸酶抑制剂药物敏感,并发现影响抗原性、病毒感染细胞能力和病毒基因组的复制和转录有关的变异。结论2016年广州市H1N1流感病毒为保守毒株,未发现新的耐药病毒株,发现病毒致病力增强了,因此可能导致流感病毒的局部爆发。; 赵思婷钟家禹张宝; 关键词：H1N1流感病毒氨基酸

广州地区2011—2013年儿童呼吸道合胞病毒流行特征分析被引量：2: 2015年; 目的了解广州地区2011—2013年急性呼吸道感染患儿呼吸道合胞病毒（RSV）的流行情况。方法用实时荧光PCR方法对本院收治的27116例急性呼吸道感染患儿咽拭子标本进行RSV检测。随机取30例RSV阳性标本，扩增其G基因并测序。从30例阳性标本中随机取3例，扩增RSV全基因组并测序。结果27116例标本中共检出RSV阳性4421例，阳性率为16．30％（4421127116）。30株测序标本中，21株属于NA1型，2株属于ON1型，7株属于BA9型。27株G基因的GenBank登陆号是KM586819～KM586845。3株全基因组的GenBank登陆号是KM517572、KM578843、KM517573。结论RSV是引起2011—2013年广州地区儿童急性呼吸道感染的重要病原体。NA1型和BA9型分别是RSVA、B亚型的优势基因型。; 谢嘉慧华亮钟家禹张莹莹陈翊刘晓敏连广琬周珍文朱冰; 关键词：呼吸道合胞病毒 G蛋白基因组儿童

诺如病毒广州株全基因组序列测定及分析被引量：8: 2007年; 目的探讨广州地区儿童感染的诺如病毒基因组分子结构特点和基因组类型。方法参考GenBank上的诺如病毒MD145-12基因组设计分段扩增引物，进行RT-PCR分段扩增诺如病毒基因组，克隆于T载体上，测定序列，用Clustal W／X、DNAStar、RAT（recombination analysis tool）等软件分析基因组序列。结果诺如病毒NVgz01全基因组为7558bp，提交到C,enBank上的序列号为DQ369797，3’端非编码区末端长45bp，病毒基因组有3个开放阅读框（ORF），ORF1长5100bp（5～5104nt），ORF2基因长1623bp，位于基因组中5085～6707nt之间，ORF3基因长807bp（6707～7513nt），其中ORF1、ORF2两基因有19个核苷酸的重叠区；NVgz01全基因组核苷酸序列与GenBank上诺如GI组Norwalk68、Southampto、BS5、Chiba、WUG1的同源相似性在43％～44％之间，与GⅡ组MD145、Farmington　Hills、B4S5、Hawaii、Lordsdale、SaitamaU1、Mc37同源相似性在76％～90％之间。NVgz01的ORF1与Mc37核苷酸序列同源性为94％，但ORF2与Mc37的同源性只有65％；NVgz01的ORF2与Fannillgton Hills（AY502023）同源性为最高（94％），ORF1的同源性为88％。结论广州地区儿童腹泻感染的诺如病毒NVgz01株全基因组序列为7558bp，GenBank序列号为DQ369797，NVgz01与诺如病毒的GⅡ组同源性较高，确认NVgz01株属于诺如病毒GⅡ组；根据ORF1、ORF2的同源性差异和RAT程序分析初步认为NVgz01可能是重组病毒。; 曾其毅钟家禹李潇苏嫌莉朱冰陈翊林涛肖密丝盛慧英周荣龚四堂; 关键词：诺如病毒基因组同源重组

广州地区儿童诺如病毒性腹泻的分子流行病学研究被引量：17: 2008年; 目的应用TaqMan实时荧光逆转录聚合酶链反应（real-timeRT—PCR）法检测诺如病毒（norovirus，NV）的发病情况，为儿童NV腹泻的临床治疗或病毒爆发流行的预防、控制及疫苗的研制提供流行病学资料。方法随机收集2006年12月至2007年12月广州地区急性腹泻病患儿水样便或蛋花汤样便，应用针对病毒ORF1与ORF2连接区域设计的引物及TaqMan探针进行实时荧光RT—PCR检测标本。并将NV阳性标本进行克隆并测序，结合检测结果以确定此周期内NV的流行情况及优势毒株。结果本研究从1260份标本中检测出NV阳性257份（20．40％），其中GⅠ型87份（6．90％），GⅡ型214份（16．98％），GⅠ和GⅡ混合感染44份。测序分析后发现GI毒株检出率依次为GⅠ-3、GⅠ-2及GⅠ-4；GⅡ毒株检出率依次为GⅡ-4、GⅡ-3及GⅡ-7。NV主要感染年龄为2岁以内婴幼儿，发病高峰期在11至12月。结论NV已经成为广州地区婴幼儿腹泻的重要病原体之一，GⅡ-4型是2007年主要流行病毒株。; 冯晓敏钟家禹周荣耿岚岚区文玑龚四堂; 关键词：诺罗病毒腹泻儿童逆转录聚合酶链反应

星状病毒ORF2基因的克隆及进化树分析被引量：1: 2006年; 目的探讨广州地区儿童感染的星状病毒ORF2基因特点和基因类型。方法参考CenBank上的星状病毒Ⅰ型ORF2基因设计了两对特异性引物，进行巢式PCR扩增出目标片段，克隆于T载体上，测定序列，用phylip3．65软件、NJ法构建进化树。结果星状病毒ORF2基因为2316bp，编码771个氨基酸，ClustalW同源性比较发现，Hastv-gz克隆与4型星状病毒氨基酸同源性为最高（93％），与其它基因型的同源性为61％～70％。结论广州地区儿童腹泻感染的星状病毒Hastv-gz克隆ORF2基因序列为2316bp，Hastv-gz克隆与4型星状病毒同源性为93％，以phylip3．65软件、NJ法构建ORF2基因进化树中，Hastv-gz与4型星状病毒密切相关，确认Hastv-gz是4型星状病毒。; 钟家禹朱冰周荣王长兵肖密丝龚四堂; 关键词：星状病毒 ORF2基因进化树

婴幼儿病毒性腹泻985例粪便标本分析研究被引量：37: 2010年; 目的探讨婴幼儿病毒性腹泻的流行现状与流行特点。方法采集2008-08-01—2009-07-31广州市儿童医院就诊的急性腹泻患儿粪便标本并记录其病情信息,运用实时荧光定量PCR法对采集的985例患儿粪便标本进行轮状病毒(HRV)、肠道腺病毒(EADV)、诺如病毒(NORV),扎如病毒(SPAV)、星状病毒(ASTV)检测。结果腹泻病毒的年检出率为45.9%,混合感染率为22.8%,未发现GI组NORV株,单月中11月检出率最高76.3%,HRV、NORV、EADV、ASTV、SPAV的年检出率分别是28.0%、13.7%、8.8%、4.9%、1.0%,95%的阳性标本来自2岁以下婴幼儿,水样便、呕吐、发热的发生率为88.9%、75.2%与68.4%。结论病毒性腹泻是本地季节性婴幼儿急性腹泻常见原因,10～12月是发病高峰,2岁以下婴幼儿是主要的流行人群,HRV是最重要的病原体,水样便、发热、呕吐是婴幼儿病毒性腹泻的三联症。混合感染较常见但其症状较单一感染可能并未加重。; 刘志华龚四堂钟家禹王长兵朱冰何婉儿; 关键词：病毒性腹泻轮状病毒实时荧光定量PCR

2022—2023年新冠疫情期间及疫情后手足口病流行病学及分型分析: 2023年; 目的对比了解2022—2023年新冠疫情期间及疫情后广州市和佛山市手足口病流行病学及非肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)非柯萨奇病毒A组16型(Coxsaekievirus group A 16,CA16)病毒的分子流行病学特征,为治疗和防控提供依据。方法运用荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对2022—2023年疑似手足口病患者标本同时进行肠道病毒(enterovirus,EV)通用型、EV71、CA16检测,并选取EV71和CA16是阴性而EV通用型是阳性的标本进行型别鉴定,设计5′非编码区(UTR)引物,RT-PCR扩增后进行序列测定,序列用BLAST程序进行序列的EV型别确定。结果2022年,同时进行EV通用型、EV71、CA163种病毒检测的疑似手足口病例标本共362份,总阳性47份,阳性率为12.98%;其中EV71阳性0份;CA16阳性5份,占1.38%;非EV71非CA16的EV阳性标本42份,占11.60%。2023年,同时进行EV通用型、EV71、CA163种病毒检测的疑似手足口病标本有297份,总阳性100份,阳性率为33.67%,全年没有检出EV71,CA16全年检出率为2.36%(7/297),非EV71非CA16的EV阳性率为31.31%(93/297)。51份非EV71非CA16阳性标本的序列分析表明,2022—2023检出的非EV71非CA16的EV有9种型别,分别为:CA6、CA10、CA4、CA2、CA8、柯萨奇病毒B组5型(CB5)、CB2、CB3、埃可病毒30型(E30),其中CA6占主要,为27.45%(14/51),其次是CA10,占15.69%(8/51)。结论新冠疫情结束后的2023年比疫情期间的2022年EV阳性率高。2022—2023年手足口病主要以非EV71非CA16为主,序列分析表明非EV71非CA16病毒中以CA6和CA10为主,应加强对CA6、CA10为主要非EV71非CA16病毒进行研究及监测。; 肖雪梁妤婷古锐李莉陈娟钟家禹; 关键词：肠道病毒流行病学

RD细胞肠道病毒71型受体的筛选被引量：2: 2012年; 目的筛选和鉴定RD细胞能与肠道病毒71型(EV71)VP1蛋白结合的受体蛋白,为进一步深入研究EV71病毒受体特性和功能提供实验依据。方法提取RD细胞膜蛋白,双向凝胶电泳分离RD细胞膜蛋白后,通过Far-western印迹实验筛选能与EV71病毒VP1蛋白相互作用的RD细胞膜蛋白,同时设立阴性对照,利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS),对特异性结合的蛋白点进行鉴定。结果通过Far-western印迹检测,从RD细胞筛选到4个能与EV71结合的蛋白点;质谱分析仅鉴定出一个膜蛋白,即stomatin-like protein2(SLP-2)。结论至少有4个蛋白可以与EV71的VP1蛋白相互作用,其中RD细胞膜上的SLP-2蛋白能够与EV71病毒的VP1特异性结合,可能是EV71病毒候选受体或受体辅助分子之一,其在EV71病毒感染RD细胞过程中的作用有待进一步研究。; 胡小云王长兵朱冰钟家禹邝璐; 关键词：肠道病毒71型双向电泳飞行时间质谱 SLP-2

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钟家禹

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