王长兵
- 作品数：16 被引量：73H指数：4
- 供职机构：广州医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广州市科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 2010年冬-2011年春广州地区儿童腺病毒的分子流行病学研究
- 张其威赵素慧朱冰王长兵朱利赵卫万成松
- 新发急性呼吸道疾病病原体:人14型、55型腺病毒的基因组学研究
- 张其威曹彬朱冰王长兵陈翊赵素慧万成松
- 诺如病毒表达衣壳蛋白单克隆抗体的制备、鉴定和初步应用被引量：4
- 2008年
- 目的:建立能稳定分泌抗诺如病毒(Norovirus)N蛋白的单克隆抗体(mAb)细胞株,制备抗诺如病毒核衣壳蛋白的mAb,为诺如病毒的早期快速检测及致病机制的研究提供实验材料。方法:用E.coli表达的GⅡ组广州株NVgz01(DQ369797)Norovirus-N蛋白免疫BALB/c小鼠,通过PEG使小鼠脾细胞和Sp2/0细胞融合,使用HAT选择性培养基培养融合细胞,用间接ELISA和Western blot测定mAb的效价、免疫球蛋白亚型和mAb的特异性,并将各mAb之间进行配对。结果:通过细胞融合和克隆化,共筛选出4株分泌抗Norovir-us-N蛋白抗体的杂交瘤细胞株N2C3、N7C2、N4B1、N8A9。间接ELISA和Western blot检测结果表明,这4株mAb都可以与E.coli表达的GⅡ组广州株Norovirus-N蛋白产生特异性反应,并且能与天然粪便标本中的GⅡ组Norovirus产生特异性反应。配对结果显示N2C3和N7C2之间配对,对表达蛋白和天然病毒都具有较强的检测灵敏度。结论:获得了诺如病毒GⅡ组特异性mAb,为制备免疫诊断试剂盒及致病机制的研究奠定了基础。
- 李潇周荣盛慧英王长兵田新贵王友绍
- 关键词：NOROVIRUS核衣壳蛋白单克隆抗体
- 肠道病毒71型重组VP2蛋白原核表达及初步鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的利用大肠杆菌表达系统表达并纯化肠道病毒71型(EV71)VP2蛋白,并对重组蛋白功能进行初步鉴定。方法 PCR扩增EV71 VP2基因,在测序正确的基础上,将其插入表达载体形成pET32a(+)/VP2,转化BL21(DE3),IPTG诱导表达,经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)初步分析蛋白表达产物,利用Ni+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,经Western blot初步验证其抗原性。结果成功构建pET32a(+)/VP2重组质粒,经大肠杆菌表达,纯化获得相对分子质量约为48000的融合蛋白,经Western blot证实其抗原性良好。结论表达并鉴定了VP2抗原,为EV71疫苗研制及检测试剂盒的研发奠定了基础。
- 施静朱冰钟家禹王长兵许甜甜
- 关键词：肠道病毒71型VP2蛋白原核表达
- 星状病毒ORF2基因的克隆及进化树分析被引量：1
- 2006年
- 目的 探讨广州地区儿童感染的星状病毒ORF2基因特点和基因类型。方法 参考CenBank上的星状病毒Ⅰ型ORF2基因设计了两对特异性引物，进行巢式PCR扩增出目标片段，克隆于T载体上，测定序列，用phylip3．65软件、NJ法构建进化树。结果 星状病毒ORF2基因为2316bp，编码771个氨基酸，ClustalW同源性比较发现，Hastv-gz克隆与4型星状病毒氨基酸同源性为最高（93％），与其它基因型的同源性为61％～70％。结论 广州地区儿童腹泻感染的星状病毒Hastv-gz克隆ORF2基因序列为2316bp，Hastv-gz克隆与4型星状病毒同源性为93％，以phylip3．65软件、NJ法构建ORF2基因进化树中，Hastv-gz与4型星状病毒密切相关，确认Hastv-gz是4型星状病毒。
- 钟家禹朱冰周荣王长兵肖密丝龚四堂
- 关键词：星状病毒ORF2基因进化树
- 婴幼儿病毒性腹泻985例粪便标本分析研究被引量：37
- 2010年
- 目的探讨婴幼儿病毒性腹泻的流行现状与流行特点。方法采集2008-08-01—2009-07-31广州市儿童医院就诊的急性腹泻患儿粪便标本并记录其病情信息,运用实时荧光定量PCR法对采集的985例患儿粪便标本进行轮状病毒(HRV)、肠道腺病毒(EADV)、诺如病毒(NORV),扎如病毒(SPAV)、星状病毒(ASTV)检测。结果腹泻病毒的年检出率为45.9%,混合感染率为22.8%,未发现GI组NORV株,单月中11月检出率最高76.3%,HRV、NORV、EADV、ASTV、SPAV的年检出率分别是28.0%、13.7%、8.8%、4.9%、1.0%,95%的阳性标本来自2岁以下婴幼儿,水样便、呕吐、发热的发生率为88.9%、75.2%与68.4%。结论病毒性腹泻是本地季节性婴幼儿急性腹泻常见原因,10～12月是发病高峰,2岁以下婴幼儿是主要的流行人群,HRV是最重要的病原体,水样便、发热、呕吐是婴幼儿病毒性腹泻的三联症。混合感染较常见但其症状较单一感染可能并未加重。
- 刘志华龚四堂钟家禹王长兵朱冰何婉儿
- 关键词：病毒性腹泻轮状病毒实时荧光定量PCR
- 基因免疫制备抗SARS病毒N蛋白单克隆抗体被引量：2
- 2007年
- 目的通过基因免疫方法,制备抗SARS病毒N蛋白的单克隆抗体并对单抗进行初步鉴定。方法将含有N蛋白的编码基因的真核重组质粒pSecTagB/N免疫BALB/c小鼠,然后取鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,用原核表达的SARS病毒N蛋白筛选阳性克隆。然后通过免疫印迹法进一步证明抗体对N蛋白的特异性,用ELISA方法检测抗体对灭活SARS全病毒的免疫反应。结果筛选得到10株抗N蛋白的单克隆抗体,ELISA和免疫印迹结果表明这些抗体特异性针对N蛋白上的抗原决定簇,且有7株抗体对SARS灭活病毒有阳性反应。结论所得的单克隆抗体特异针对N蛋白。
- 盛慧英曾其毅田新贵朱冰邝璐王长兵周荣
- 关键词：N蛋白基因免疫单克隆抗体
- RD细胞肠道病毒71型受体的筛选被引量：2
- 2012年
- 目的筛选和鉴定RD细胞能与肠道病毒71型(EV71)VP1蛋白结合的受体蛋白,为进一步深入研究EV71病毒受体特性和功能提供实验依据。方法提取RD细胞膜蛋白,双向凝胶电泳分离RD细胞膜蛋白后,通过Far-western印迹实验筛选能与EV71病毒VP1蛋白相互作用的RD细胞膜蛋白,同时设立阴性对照,利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS),对特异性结合的蛋白点进行鉴定。结果通过Far-western印迹检测,从RD细胞筛选到4个能与EV71结合的蛋白点;质谱分析仅鉴定出一个膜蛋白,即stomatin-like protein2(SLP-2)。结论至少有4个蛋白可以与EV71的VP1蛋白相互作用,其中RD细胞膜上的SLP-2蛋白能够与EV71病毒的VP1特异性结合,可能是EV71病毒候选受体或受体辅助分子之一,其在EV71病毒感染RD细胞过程中的作用有待进一步研究。
- 胡小云王长兵朱冰钟家禹邝璐
- 关键词：肠道病毒71型双向电泳飞行时间质谱SLP-2
- 重组人3型腺病毒六邻体蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的制备抗人3型腺病毒六邻体蛋白的单克隆抗体并对单抗进行鉴定。方法用纯化的重组六邻体蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合。经ELISA间接法筛选和克隆化培养,获得4株分泌抗腺病毒六邻体蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,纯化其腹水获得单抗。使用ELISA、Western blot和中和实验等方法鉴定单抗的敏感性、特异性以及中和活性。结果ELISA和免疫印迹结果表明这4株单抗与腺病毒六邻体蛋白可以特异性结合。而且,4C6株单抗具有中和活性。结论获得了4个单抗为腺病毒六邻体蛋白的单克隆抗体,可用于3型腺病毒的早期诊断和药物治疗的研究。
- 周荣盛慧英田新贵王长兵龚四堂陈俏连
- 关键词：单克隆抗体中和抗体
- RD细胞上EV71病毒候选受体的筛选
- 目的筛选和鉴定RD细胞膜上能与肠道病毒71型(EV71)VP1蛋白结合的受体蛋白,为进一步深入研究EV71病毒受体特性和功能提供实验依据。方法提取RD细胞膜蛋白,双向凝胶电泳分离RD细胞膜蛋白后,通过Far-wester...
- 胡小云王长兵朱冰钟家禹邝璐
- 关键词：肠道病毒71双向电泳飞行时间质谱SLP-2
- 文献传递
