肖密丝
- 作品数：10 被引量：32H指数：3
- 供职机构：广州医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 儿童呼吸道腺病毒基因分型方法的建立及其应用被引量：1
- 2007年
- 目的利用PCR技术，建立引起儿童呼吸道感染的腺病毒的基因分型方法，便于推广和应用。方法分析GenBank中不同型别腺病毒的六邻体基因序列特点，设计不同型腺病毒的特异性引物，以PCR方法进行基因分型，建立基因分型方法，并利用此方法对广州市2004年7月某幼儿园流行的腺病毒感染进行了基因分型。结果建立了呼吸道腺病毒的基因分型方法。广州市2004年7月某幼儿园流行的腺病毒为3型腺病毒。结论PCR方法可进行腺病毒的基因分型，且简便、结果可靠，便于推广应用。
- 朱冰龚四堂钟家禹周荣肖密丝
- 关键词：腺病毒聚合酶链反应基因型
- 广州地区2006年1至6月上旬儿童呼吸道病毒感染的研究
- 目的利用实时荧光PCR技术,进行呼吸道病原体的快速诊断。方法设计儿童常见的呼吸道病原体流感病毒A、流感病毒B、呼吸道合胞病毒及肠道病毒的引物及探针,采用实时荧光PCR技术方法, 建立呼吸道病原体快速诊断方法,并对2006...
- 朱冰周荣张莹莹肖密丝华亮赵明奇
- 文献传递
- 星状病毒ORF2基因的克隆及进化树分析被引量：1
- 2006年
- 目的 探讨广州地区儿童感染的星状病毒ORF2基因特点和基因类型。方法 参考CenBank上的星状病毒Ⅰ型ORF2基因设计了两对特异性引物，进行巢式PCR扩增出目标片段，克隆于T载体上，测定序列，用phylip3．65软件、NJ法构建进化树。结果 星状病毒ORF2基因为2316bp，编码771个氨基酸，ClustalW同源性比较发现，Hastv-gz克隆与4型星状病毒氨基酸同源性为最高（93％），与其它基因型的同源性为61％～70％。结论 广州地区儿童腹泻感染的星状病毒Hastv-gz克隆ORF2基因序列为2316bp，Hastv-gz克隆与4型星状病毒同源性为93％，以phylip3．65软件、NJ法构建ORF2基因进化树中，Hastv-gz与4型星状病毒密切相关，确认Hastv-gz是4型星状病毒。
- 钟家禹朱冰周荣王长兵肖密丝龚四堂
- 关键词：星状病毒ORF2基因进化树
- 诺如病毒广州株全基因组序列测定及分析被引量：8
- 2007年
- 目的 探讨广州地区儿童感染的诺如病毒基因组分子结构特点和基因组类型。方法 参考GenBank上的诺如病毒MD145-12基因组设计分段扩增引物，进行RT-PCR分段扩增诺如病毒基因组，克隆于T载体上，测定序列，用Clustal W／X、DNAStar、RAT（recombination analysis tool）等软件分析基因组序列。结果 诺如病毒NVgz01全基因组为7558bp，提交到C,enBank上的序列号为DQ369797，3’端非编码区末端长45bp，病毒基因组有3个开放阅读框（ORF），ORF1长5100bp（5～5104nt），ORF2基因长1623bp，位于基因组中5085～6707nt之间，ORF3基因长807bp（6707～7513nt），其中ORF1、ORF2两基因有19个核苷酸的重叠区；NVgz01全基因组核苷酸序列与GenBank上诺如GI组Norwalk68、Southampto、BS5、Chiba、WUG1的同源相似性在43％～44％之间，与GⅡ组MD145、Farmington Hills、B4S5、Hawaii、Lordsdale、SaitamaU1、Mc37同源相似性在76％～90％之间。NVgz01的ORF1与Mc37核苷酸序列同源性为94％，但ORF2与Mc37的同源性只有65％；NVgz01的ORF2与Fannillgton Hills（AY502023）同源性为最高（94％），ORF1的同源性为88％。结论广州地区儿童腹泻感染的诺如病毒NVgz01株全基因组序列为7558bp，GenBank序列号为DQ369797，NVgz01与诺如病毒的GⅡ组同源性较高，确认NVgz01株属于诺如病毒GⅡ组；根据ORF1、ORF2的同源性差异和RAT程序分析初步认为NVgz01可能是重组病毒。
- 曾其毅钟家禹李潇苏嫌莉朱冰陈翊林涛肖密丝盛慧英周荣龚四堂
- 关键词：诺如病毒基因组同源重组
- 婴幼儿腹泻标本病毒学的检测被引量：1
- 2006年
- 【目的】了解婴幼儿秋季腹泻中轮状病毒、星状病毒及肠道腺病毒的感染情况,为临床防治提供理论依据。【方法】利用胶体金方法检测婴幼儿秋季腹泻大便标本中的轮状病毒和腺病毒抗原,利用酶联免疫吸附试验方法(ELISA)检测星状病毒。【结果】105份大便标本中,轮状病毒阳性86例,腺病毒阳性77份,星状病毒阳性4份,轮状病毒及腺病毒均阳性56份,轮状病毒及星状病毒均阳性2例,腺病毒及星状病毒阳性2例。【结论】轮状病毒是婴幼儿秋季腹泻的主要原因,其次是肠道腺病毒及星状病毒,且存在混合感染情况。
- 朱冰王长兵钟家禹赖桂香肖密丝周荣
- 关键词：腹泻轮状病毒肠道腺病毒星状病毒
- 儿科临床病毒学实验室检测技术应用及意义
- 自2003年我至今，我们在广州市儿童医院进行了较大量的儿童呼吸道和肠道疑似病毒感染临床样品的实验室检测分析，主要采用的技术方法是病毒培养、荧光PCR和ELISA抗原检测技术，结果提示：荧光PCR或RT-PCR、病毒抗原E...
- 周荣崔红欧志英陈诩张莹莹朱冰肖密丝黄茜华李川江王海
- 实时荧光聚合酶链反应方法在2006年广州地区儿童流行性感冒病毒监测中的应用被引量：2
- 2008年
- 目的应用实时荧光聚合酶链反应（PCR）方法检测流感病毒，并对2006年广州地区儿童感染流感病毒进行流行病学分析。方法以流感病毒的NP基因序列为参考，综合分析GenBank上的NP基因序列，使用引物和探针设计软件Primer Express设计A／B型流感病毒及A亚型流感病毒各1对特异性引物和1条TaqMan荧光探针，用于分别检测A／B型流感病毒及A亚型流感病毒，建立实时荧光PCR方法，进行灵敏度和特异性检测。采用实时荧光PCR方法，对来自2006年门诊或住院呼吸道感染患儿的12301份咽拭子或鼻腔抽洗液样本进行检测，并与病毒分离方法进行对照。结果实时荧光PCR方法共检出1687份阳性样本，总阳性率为13．71％，其中A型773份（45．8％），全部为H1N1型；B型914份（54．2％）。1—4月份检出流感病毒阳性525例，其中B型流感病毒455例（86．7％），A型（H1N1）流感病毒70例（13．3％）；5—8月份检出流感病毒阳性1118例，其中B型流感病毒419例（37．5％），A型（H1N1）流感病毒699例（62．5％）。病毒培养分离阳性为1380份，均为实时荧光PCR方法阳性，占实时荧光PCR方法阳性者的81．80％。结论实时荧光PCR方法应用于流感病毒的检测具有简便快捷、特异、敏感的特点，2006年广州地区儿童流行性感冒病毒的流行1—4月份以B型流感病毒为主，5—8月份以H1N1亚型流感病毒为主。
- 陈翊周荣朱冰赵明奇常汝虚张莹莹肖密丝陈焕辉曾其毅
- 关键词：正黏病毒科聚合酶链反应流感病毒B型
- 广州地区健康儿童肠道病毒71型抗体水平调查被引量：14
- 2011年
- 目的调查广州地区健康儿童肠道病毒71型抗体IgG（EV71-IgG）的水平,分析与EV71所致手足口病（HFMD）发病的关系。方法以来源于广州市妇女儿童医疗中心（我院）中心实验室分离到的EV71 C4亚型标本,制备EV71诊断抗原,建立EV71-IgG抗体诊断试剂盒方法,并进行实验室评价。收集2010年1~3月在我院儿保科抽血进行常规保健检测的标本,筛选出无发热、无HFMD症状的健康儿童血清标本,检测EV71-IgG抗体。选取我院2010年全年门诊及住院HFMD患儿的咽拭子标本进行EV71特异性核酸检测。结果①本研究建立的试剂盒EV71-IgG抗体检测临界值为0.148;与细胞中和实验方法阳性符合率为100%,阴性符合率为92%,与柯萨奇A16病毒抗体无交叉反应。②819名健康儿童血清标本中,男481名,女338名。〈1岁组（60%,60/100名）和~2岁组（39.3%,72/183名）EV71-IgG抗体阳性率显著高于其他各年龄组[~3岁、~4岁、~5岁和~14岁组分别为12.9%（15/116名）、27.1%（38/140名）、14.2%（16/113名）和22.8%（38/167名）]。EV71-IgG抗体阳性率无显著性别差异。③4 780例EV71阳性HFMD患儿中,男3 070例,女1 718例。〈1岁310例（6.5%）,~2岁1 157例（24.2%）,~3岁1 337例（28.0%）,~4岁1 094例（22.9%）,~5岁450例（9.4%）,~14岁432例（9.0%）。④各年龄组EV71-IgG抗体阳性率与EV71阳性年龄构成比呈相反趋势,〈1岁组EV71-IgG抗体阳性率最高,EV71阳性年龄构成比最低;~3岁组EV71-IgG抗体阳性率最低,EV71阳性年龄构成比最高。结论 〈1岁健康儿童EV71-IgG阳性率最高,EV71阳性年龄构成比与EV71-IgG阳性率呈相关现象。
- 邝璐王长兵梁卓夫钟家禹肖密丝朱冰
- 关键词：肠道病毒71型酶联免疫吸附法IGG手足口病儿童
- 肠道病毒71型的快速纯化及其鉴定被引量：5
- 2012年
- 目的建立一种简单、快速有效的从细胞培养物中纯化肠道病毒71(EV71)的方法。方法 EV71病毒在恒河猴肾细胞(LLC-MK2)中增殖后,将获得的细胞培养物经反复冻融、聚乙二醇6000沉淀、超速离心、氯化铯垫层超速离心的方法纯化病毒。用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫印迹(Western blot)和透射电镜(TEM)的方法对纯化病毒进行鉴定,并测定其感染性的滴度及回收率。结果 SDS-PAGE显示出3个条带,相对分子质量分别为3.6×103、3×103和2.6×103与EV71的VP1、VP2和VP3相符合。Westernblot证实为EV71特异性条带。经磷钨酸负染后电镜观察,能看到典型病毒颗粒。采用终浓度为10%的聚乙二醇6000沉淀后的病毒的感染性回收率为82.0%,再经氯化铯垫层超速离心后浓缩病毒的感染性回性率为29.0%。结论聚乙二醇6000沉淀结合氯化铯垫层超速离心的方法比氯化铯密度梯度区带离心方法更简便,易于操作,并且比单独聚乙二醇6000沉淀有更高的纯度,是一种简便、有效的病毒纯化方法。
- 胡小云朱冰王长兵邝璐肖密丝
- 关键词：肠道病毒71型病毒纯化超速离心
- 肠道病毒71型的快速纯化及其鉴定
- 胡小云朱冰王长兵邝璐肖密丝
- 关键词：肠道病毒71型病毒纯化超速离心
