陶剑平
- 作品数：14 被引量：53H指数：4
- 供职机构：中山大学中山医学院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
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- 丙型肝炎病毒核心蛋白引发肝脂肪变性机制的研究进展被引量：5
- 2009年
- 丙型肝炎病毒（hepatitis Cvirus，HCV）是一种主要经血液传播的肝炎病毒，是造成慢性肝炎、肝硬化甚至肝癌的主要原因之一。已经证明，HCV感染引发的肝脏脂肪变性与慢性丙型肝炎患者的肝脏纤维化及对抗病毒治疗的疗效应答有显著的影响，因此HCV核心（Core，C）蛋白引发肝脏脂肪变性机制的研究对探索HCV感染治疗新方法，乃至最终控制HCV感染，都有十分重要的意义。
- 孙英梅许国蓉陶剑平
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白脂肪变性
- 腺病毒介导的T-bet基因转染诱导Th1型淋巴细胞分化被引量：11
- 2005年
- 目的:构建含有T细胞转录因子T-bet(T-boxexpressedinTcells)的重组腺病毒Ad.T-bet,并诱导Th1型淋巴细胞分化。方法:采用RT-PCR的方法从健康人外周血淋巴细胞的总RNA中克隆T-bet基因,亚克隆入腺病毒穿梭载体成为pAdtrack-CMV.T-bet,与腺病毒基因组载体pAdeasy-1同源重组为pAd.T-bet,经PacI酶切后转染293细胞,用Westernblotting和RT-PCR的方法鉴定Ad.T-bet;联合腺病毒和脂质体以感染倍数(m.o.i)5000感染活化的淋巴细胞,用ELISA法检测培养液中IFN-γ含量。结果:采用RT-PCR方法从健康人外周血淋巴细胞中扩增出T-bet基因,构建出重组腺病毒Ad.T-bet,Westernblotting和RT-PCR均检测出细胞内T-bet蛋白表达;联合Ad.T-bet和脂质体感染淋巴细胞诱导Th1型细胞因子IFN-γ持续高表达。结论:重组腺病毒Ad.T-bet有效诱导Th1型细胞分化,有望成为改变肿瘤患者免疫抑制状态的有效方法。
- 陈祖兵陶剑平梁力建刘晓平胡文杰李绍强
- 关键词：腺病毒载体淋巴细胞
- 小干扰RNA特异性抑制淋巴细胞T-bet表达的研究
- 2009年
- 目的探讨体外转录法合成的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人淋巴细胞T-bet基因表达及功能的影响。方法设计并合成4条siRNA(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3及siRNA-co),脂质体法转染淋巴细胞。转染后48h收集转染后细胞,采用RT-PCR方法检测细胞T-bet mRNA的抑制率;酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测细胞上清液中IL-4和IFN-γ水平;将淋巴细胞与人脐静脉血管内皮细胞(ECV304)共培养检测淋巴细胞对ECV304增殖的抑制作用。结果转染后48h半定量RT-PCR的检测显示siRNA-1、siRNA-2和siRNA-3转染后的淋巴细胞T-bet表达抑制率分别为(72.50±1.01)%、(5.40±0.63)%和(30.90±0.90)%,以siRNA-1转染后的淋巴细胞T-bet表达抑制作用最强(P<0.05),其细胞上清液中IL-4水平最高,而IFN-γ的水平最低(P<0.05),siRNA-1转染淋巴细胞对人脐静脉血管内皮细胞(ECV304)增殖的抑制作用低于siRNA-2及siRNA-3。结论siRNA可特异性抑制淋巴细胞T-bet基因的表达,从而为进一步研究siRNA在移植免疫耐受中应用提供了理论和实验基础。
- 张维李宝金伊远学吴立旋刘晓平陶剑平
- 关键词：RNA干扰小干扰RNA淋巴细胞
- 转入IL-18 cDNA的鼻咽癌细胞在hu-PBL-SCID鼠中致瘤性的影响被引量：1
- 2002年
- 为了探讨人白细胞介素 18(hIL 18)的表达对鼻咽癌细胞体内致瘤性的影响 ,我们构建了hIL 18的真核表达载体pcD NA3/hIL 18,转染人鼻咽癌细胞株SUNE细胞 ;然后以转染阳性的SUNE细胞和未转染的SUNE细胞接种到用健康人外周血白细胞免疫重建的SCID鼠 (hu PBL SCID鼠 ) ,观察成瘤情况。结果发现 ,所构建的真核表达载体在鼻咽癌细胞中能高效表达hIL 18;ELISA法测得转染阳性细胞培养上清液中hIL 18的含量为 (85± 10 )pg/ml,而未转染的SUNE细胞的培养上清液中hIL 18的含量低于 5pg/ml。将转染阳性的细胞克隆和未转染的SUNE细胞接种hu PBL SCID小鼠后连续观察 5 0d ,发现前者形成的肿瘤其生长速度明显慢于后者 ,其平均瘤重也有显著性差异 (P <0 0 0 1)。说明在体内hIL 18的表达能有效地抑制鼻咽癌细胞的成瘤作用。
- 陶剑平李满枝汪慧民郭翔洪明晃
- 关键词：鼻咽癌人白细胞介素18真核表达载体致瘤性
- 人T-bet基因的体外扩增及克隆和鉴定
- 2007年
- 目的:克隆人T-bet基因,构建其真核表达载体pEGFP-C1-T-bet。方法:实验于2005-07/2006-07在北京大学深圳医院中心实验室完成。①根据Genebank的人T-bet基因的全长cDNA序列,设计合成一对附加BglⅡ和SalⅠ两个限制性内切酶酶切位点的特异性引物。②分离人外周血单个核细胞,提取RNA,用反转录-聚合酶链反应方法将T-bet的编码序列cDNA扩增,装入pMD18-T载体并送去测序。③BglⅡ+SalⅠ双酶切质粒pMD18-T-bet,经琼脂糖电泳切胶回收T-bet片段,将T-bet插入载体pEGFP-C1构建成重组真核表达载体pEGFP-C1-T-bet。④用双酶切和聚合酶链反应对插入片段进行分析和验证。结果:①反转录-聚合酶链反应产物经琼脂糖电泳结果显示在预期位置有相对分子质量为1608bp的特异性扩增带。②测序结果证实,T-bet的编码序列和Genbank中T-bet mRNA序列相同。③双酶切和聚合酶链反应结果证实插入片段序列正确。结论:实验成功扩增出人T-bet基因,构建了基因重组真核表达载体pEGFP-C1-T-bet,为探索T-bet基因对免疫细胞的调节作用和肿瘤基因治疗奠定了基础。
- 郝颖刘晓平徐勤魏小勇李宝金伊远学陶剑平张超张立兵
- 关键词：T淋巴细胞转录因子
- HepG2细胞表达蛋白HCVC体外活化肝星状细胞的研究
- 2013年
- 目的观察HCV核心蛋白对肝星状细胞活化及合成细胞外基质的影响,为进一步研究HCV核心蛋白的致肝纤维化机制提供实验依据。方法采用双抗体夹心ELISA检测HepG2-HCV-C细胞株培养液中TGF-β1的表达。用HepG2-HCV-C和HepG2两株细胞培养5d的上清液培养人肝星状细胞系LX-2细胞,同时用DMEM培养LX-2细胞作对照,分别制备细胞爬片,采用免疫细胞化学染色(ICC)法检测LX-2细胞中人α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)、结缔组织生长因子(CTGF)和纤维连接蛋白(FN)的表达;采用双抗体夹心ELISA检测LX-2细胞1~6d培养上清液中人ColⅣ、Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)、透明质酸(HA)和人层粘连蛋白(LN)的表达。所有数据采用SPSS11.0统计软件进行统计分析。结果双抗体夹心ELISA检测HepG2-HCV-C细胞1~6d培养液中的TGF-β1量为(110.00±11.45)pg/ml^(935.00±21.36)pg/ml,HepG2细胞为0^(124.16±11.81)pg/ml,差异有统计学意义(F=21984.81,P<0.01)。ICC检测用HepG2-HCV-C上清液培养的LX-2细胞α-SMA、ColⅣ、CTGF和FN均为弥漫阳性,细胞染成深褐色;用HepG2培养的LX-2细胞呈局灶性棕黄色,DMEM培养的LX-2细胞染色阴性。ELISA检测LX-2(HepG2-HCV-C)组ColⅣ、HA、LN和PⅢNP的值均显著高于LX-2(HepG2)组和LX-2(DMEM)组(均P<0.05或P<0.01)。结论 HCV C蛋白能上调TGF-βl的表达,表达C蛋白的细胞系能促进LX-2细胞多种细胞外基质(ECM)的合成。提示HCV C蛋白可能通过活化肝星状细胞,参与肝纤维化形成中多种ECM合成的调控。
- 孙英梅李文杰陶剑平
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白HEPG2细胞活化
- 转染肝癌总RNA的树突状细胞疫苗对肝癌的抑制作用及其机制被引量：4
- 2006年
- 目的探讨转染肝癌细胞总RNA转染的树突状细胞(DC)疫苗抑制肝癌作用及其机制。方法采用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素(IL)-4联合培养6 d成小鼠骨髓来源不成熟DC(iDC),质脂体转染肝癌细胞系Hepa1-6 RNA入iDC,用LPS刺激后成为Hepal-6 RNA/DC疫苗,对照组为iDC组、LPS/DC组Saline组,以每只2×10~6个细胞腹腔注射免疫小鼠每周1次共3次,然后接种5×10~5 Hepal-6细胞,观察肿瘤生长情况、特异性CTL活性的测定以及抗体阻断实验。结果实验组Hepal-6 RNA/DC组肿瘤在第8周为(8．5±3．6)mm,而iDC组、LPS/ DC组、Saline对照组分别为(36．6±3．6)、(31．3±4．7)、(32．2±4．0)mm,与实验组比较差异均有统计学意义(P＜0．05)。实验组脾细胞对Hepal-6细胞有特异性杀伤效应,而对肺癌LLC细胞无杀伤活性。所诱导的抗肿瘤效应细胞包括CD^(8+)、CD^(4+)T淋巴细胞。结论肝癌细胞的总RNA转染的DC肿瘤疫苗能诱导CD^(8+)、CD^(4+)T细胞免疫,是较有临床应用前景的肝癌免疫治疗方法。
- 赵海专陈祖兵陶剑平胡文杰喻瓴沈世强
- 关键词：树突状细胞细胞毒T淋巴细胞
- 常见食源性感染致病菌属、种用PCR-RFLP及PCR-SSCP技术鉴定探讨被引量：6
- 2005年
- 【目的】探讨运用聚合酶链反应邛艮制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)和聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)进行食源性感染常见致病菌属种鉴定的可行性。【方法】选择细菌23S rDNA基因作为鉴别细菌属的靶基因,通过设计合适的通用引物进行PCR扩增,并对13属食源性感染常见致病菌和5种不同血清型大肠杆菌扩增产物的酶切片段进行RFLP分析和SSCP分析。【结果】运用通用引物可以扩增出13 属食源性感染常见致病菌的23S rDNA基因HpaⅡ酶切产物的RFLP分析表明,不同种属的致病菌表现出不同的RFLP图谱,利于进行细菌属的鉴定。不同种属食源性感染常见致病菌SSCP图谱变异性更大,不利于进行种属间鉴别。对5种不同血清型大肠杆菌的23S rDNA基因扩增产物的RFLP和SSCP分析表明,不同血清型大肠杆菌表现出相似的RFLP图谱。SSCP图谱的变异性较大,这有利于进行血清型间鉴别甚至株间的鉴别。【结论】PCR-RFLP和PCR-SSCP具有应用于食源性感染常见致病菌种、属鉴别诊断的潜力。
- 洪帮兴江丽芳胡玉山方丹云陶剑平晏辉钧
- 关键词：RDNA限制性片段长度多态性单链构象多态性聚合酶链反应食源性感染
- 应用寡核苷酸芯片技术检测食源性感染常见致病菌被引量：20
- 2005年
- 目的建立食源性感染常见致病菌的快速检测方法。方法利用带正电荷尼龙膜为芯片载体,合成寡核苷酸探针,点样于载体制成寡核苷酸芯片,对食源性感染常见致病菌23SrDNA基因片段扩增产物进行杂交检测。结果在同一条件下运用设计的通用引物扩增出16种(属)细菌23SrDNA基因片段。大肠埃希菌、沙门菌、志贺菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌、变形杆菌、单核细胞增生李斯特菌、蜡样芽孢杆菌、肉毒梭菌和空肠弯曲菌等10种(属)菌杂交结果显示,高灵敏度和特异性;金黄色葡萄球菌、链球菌、小肠结肠炎耶尔森菌和产气荚膜梭菌等4种(属)菌,未能显示预期的种(属)杂交结果;而应用食源性感染模拟标本,检测肺炎链球菌和绿脓假单胞菌两种与食源性感染无关的致病菌未与芯片上探针出现杂交反应,检出水平可达10CFU/ml。结论建立的寡核苷酸芯片技术在食源性感染常见致病菌的检测上快速准确等优点,为食源性感染的诊治与预防提供了有效的技术手段和方法依据。
- 洪帮兴江丽芳胡玉山方丹云陶剑平郭辉玉
- 关键词：食源性感染常见致病菌寡核苷酸芯片小肠结肠炎模拟标本志贺菌
- 反义人IL-10和反义病毒性IL-10抗鼻咽癌细胞成瘤效应的研究被引量：1
- 2002年
- 目的:探讨反义人IL-10和反义病毒性IL-10抑制鼻咽癌细胞成瘤的效果。方法:扩增及克隆hIL-10 cDNA和 vIL-10基因,构建反义hIL-10和反义vIL-10双价真核表达载体pcDNA3/AS hIL-10+AS vIL-10,转染鼻咽癌细胞株SUNE。将转染阳性的SUNE细胞克隆和未转染的SUNE细胞接种SCID小鼠和经健康人外周血白细胞免疫重建的SCID小鼠（hu-PBL-SCID鼠）,观察成瘤效应。结果:ELISA法测得未转染SUNE细胞培养上清液中IL-10和vIL-10的总含量为242±23pg/ml,而转染阳性的SUNE细胞培养上清液中hIL-10和vIL-10的总含量仅为22±6pg/ml。在SCID鼠体内,vIL-10和hIL-10的表达与否,并不影响鼻咽癌细胞的成瘤活性,但在hu-PBL-SCID鼠体内,抑制vIL-10和hIL-10的表达则可明显抑制鼻咽癌细胞的成瘤作用。结论:反义人IL-10和反义病毒性IL-10可显著抑制鼻咽癌细胞在血hu-PBL-SCID鼠体内的成瘤作用,鼻咽癌组织表达vIL-10和hIL-10的确与鼻咽癌免疫耐受有关。
- 陶剑平杨琨朱振宇林学颜
- 关键词：鼻咽癌
