李忠鹏
- 作品数：17 被引量：44H指数：5
- 供职机构：吉林省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项“十一五”国家科技支撑计划吉林省科技厅重点项目更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程生物学医药卫生更多>>
- 转Cp4 epsps基因大豆快速DAS-ELISA检测方法的建立被引量：1
- 2021年
- 为了快速检测转Cp4 epsps基因大豆,本研究以纯化后的CP4-EPSPS单克隆抗体1D12为捕获抗体,辣根过氧化物酶标记的羊抗CP4-EPSPS多克隆抗体8092为检测抗体,通过优化抗体工作浓度和抗原抗体反应时间,成功建立转Cp4 epsps基因大豆快速双抗夹心ELISA检测方法。结果显示:最佳检测条件为捕获抗体浓度10μg/mL,检测抗体浓度1.25μg/mL,样品与检测抗体先后加入酶标板37℃共同孵育60 min。该方法的检测范围为0.3125~80μg/mL,待检叶片、籽粒最佳检测范围为10~80倍稀释;板内变异系数为1.64%~5.42%,板间变异系数为3.05%~9.13%,符合ELISA定性试剂盒参考标准;对100份大豆叶片、20份大豆籽粒进行检测,与Western blot结果和标准结果进行比较,符合率为100%,表明该检测方法具有良好的准确性和重复性。该检测方法75 min内即可完成检测,适用于快速检测转Cp4 epsps基因大豆,为转Cp4 epsps基因快速检测试剂盒的开发奠定了基础。
- 候吉超李忠鹏梁雨欣张春雨李小宇王永志
- 关键词：大豆
- 燕麦新品种吉燕2号
- 曲祥春何中国郭中校李玉发栾天浩刘红欣张小军李忠鹏窦忠玉檀辉高忠
- 选育出适于我省中西部地区中等肥力土壤种植，生育期与“白燕7号”相当，每公顷籽粒和干草产量均较“白燕7号”提高10%左右的饲草兼用型皮燕麦新品种，其生育期82天左右，我省中西部地区及类似生态区，也可在麦茬后种植用于青贮，根...
- 关键词：
- 关键词：燕麦
- 燕麦新品种吉燕1号
- 何中国曲祥春郭中校李玉发栾天浩张小军李忠鹏窦忠玉檀辉高忠
- 选育出适于我省中西部地区中等肥力土壤种植，生育期与“白燕2号”相当，每公顷籽粒和干草产量均较“白燕2号”提高10%左右的粮草饲兼用型裸燕麦新品种。其生育期85天左右，我省中西部地区及类似生态区，也可在麦茬后种植用于青贮，...
- 关键词：
- 关键词：燕麦
- 非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体制备及线性抗原表位定位被引量：5
- 2022年
- 【目的】制备非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p30蛋白的单克隆抗体(monoclonal antibodies,MAbs)并初步分析其所识别的线性抗原表位,为ASFV及其抗体检测方法的建立及p30蛋白结构和功能的研究奠定基础。【方法】将原核表达并纯化的p30重组蛋白作为免疫原,免疫6—8周龄BALB/c雌鼠,每两周免疫1次,共免疫3次,首次免疫是抗原与等体积的弗氏完全佐剂乳化后免疫,第二次和第三次免疫与等体积的弗氏不完全佐剂乳化,3次免疫后1 w断尾采血,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清抗体效价,选择血清效价最高的小鼠进行加强免疫,3 d后取小鼠脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞按照4:1的比例使用PEG进行常规细胞融合。利用重组p30蛋白作为包被抗原,间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞,有限稀释法进行克隆纯化,直至筛出能够稳定分泌抗体的MAbs。将ASFV接种于猪肺泡巨噬细胞,以筛选的MAbs为一抗、兔抗鼠HRP-IgG为二抗,进行间接免疫荧光试验(IFA)。将感染和未感染ASFV的细胞沉淀处理后进行SDS-PAGE并转印至硝酸纤维素膜,分别以IFA鉴定为阳性的MAbs上清为一抗、兔抗鼠HRP-IgG为二抗,进行Western blotting分析,筛选获得p30 MAbs。根据已知序列设计引物扩增p30ab与p30bc两段截短基因,其中p30ab代表由第86—153位氨基酸残基的截短体,p30bc代表由第120—187位氨基酸残基的截短体,原核表达部分重叠的截短p30蛋白,最终获得重组蛋白GST-p30ab与重组蛋白GST-p30bc。分别以GST-p30ab和GST-p30bc融合蛋白为包被抗原,以5株MAbs为一抗,以兔抗鼠HRP-IgG为二抗,通过间接ELISA方法初步定位p30蛋白的抗原表位。【结果】以纯化的重组蛋白为包被抗原,经间接ELISA试验筛选出25株可分泌抗重组p30蛋白的杂交瘤细胞株。IFA结果显示,5株MAbs(8F4、1D3、1H2、6C3和8E11)与ASFV感染的猪肺泡巨噬细胞IFA试验呈阳性;Western blotting结果显示,5株MAbs均�
- 魏天王成宇王凤杰李忠鹏张芳毓张守峰扈荣良吕礼良王永志
- 关键词：非洲猪瘟病毒酶联免疫吸附试验单克隆抗体抗原表位
- CP4-EPSPS夹心ELISA配对单克隆抗体的研制和生物学特性分析被引量：1
- 2013年
- 为获得能够用于夹心ELISA检测的配对抗CP4-EPSPS蛋白单克隆抗体,构建CP4-EPSPS原核表达载体并转化大肠杆菌Rossetta,获得高效表达。通过对可溶性蛋白纯化,获得了高纯度目的蛋白。以纯化后的CP4-EPSPS蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,经过细胞融合和筛选获得2株抗CP4-EPSPS蛋白单克隆抗体(1A5和8A3)。经鉴定,这2株抗体可以有效地识别高温变性和天然CP4-EPSPS蛋白;叠加ELISA分析表明两株抗体识别的抗原表位不同,说明两株抗体能够用于夹心ELISA检测CP4-EPSPS蛋白。
- 李忠鹏于寒松胡耀辉时圣凤刘蕴慧段永杰李小宇王永志李启云
- 关键词：蛋白表达单克隆抗体夹心ELISA
- 乡镇企业建立现代企业制度研究
- 李忠鹏
- CP4-EPSPS蛋白抗体的制备及其夹心ELISA定量检测方法的建立
- 2020年
- 为了快速高效地检测转Cp4 epsps基因抗除草剂大豆,本研究利用已制备的CP4-EPSPS蛋白免疫实验动物,获得5株CP4-EPSPS蛋白鼠单克隆抗体及3份羊抗血清,建立了CP4-EPSPS蛋白双抗夹心酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测方法,同时利用该方法对结荚期的Cp4 epsps转基因抗除草剂大豆的根、茎、叶、种子进行定量检测。结果显示,最佳检测条件为捕获抗体1D12,工作浓度1.25μg/mL,包被酶标板,4℃静置过夜,检测样品20℃孵育45 min,检测抗体8092,工作浓度2.5μg/mL,20℃孵育30 min;CP4-EPSPS蛋白在模拟大豆环境中最低检测限为3.6 ng/mL,检测范围为7.5~125 ng/mL;重复性变异系数小于15%。利用上述检测条件,在转Cp4 epsps基因抗除草剂大豆的根、茎、叶、种子中均检测到CP4-EPSPS蛋白的表达,且各组织部位表达量差异显著,其中CP4-EPSPS蛋白在叶片中表达量最高,茎、种子、根中CP4-EPSPS蛋白表达量逐渐降低。
- 候吉超李忠鹏李小宇张春雨于寒松王永志
- 关键词：大豆抗体
- OYDV衣壳蛋白表达及其单克隆抗体分析被引量：9
- 2018年
- 洋葱黄矮病毒(Onion yellow dwarf virus,OYDV)是危害洋葱质量和产量的主要病毒之一。本研究从吉林省农安县的分蘖洋葱种植区分离到一株OYDV,通过RT-PCR克隆OYDV衣壳蛋白(coat protein,cp)基因,构建重组质粒pET28-OYDVcp,转化大肠杆菌Rosetta,经诱导后表达并纯化,Western-blot鉴定为OYDV cp蛋白。与实验室制备的9株大豆花叶病毒单克隆抗体进行反应,得出其中3株单克隆抗体(2D3、4F9、4G12)能够识别OYDV。综上,本研究首次从分蘖洋葱上分离并鉴定OYDV,对OYDV cp基因进行原核表达,获得重组蛋白,并且鉴定到能够识别OYDV的单克隆抗体3株,为分蘖洋葱病毒检测提供了抗体材料。
- 王永志万千万千李小宇张春雨刘宝泉李忠鹏苏颖
- 关键词：衣壳蛋白单克隆抗体
- 春小麦丰产栽培及复种新技术
- 2006年
- 目前在吉林省表现优良的春小麦品种主要有：“丰强1号”、“丰强7号”、“小冰麦33号”、“吉春12号”等几个品种，它们均由吉林省农科院作物所育成。在一般旱地条件下栽培，产量均可达到4000公斤／公顷左右，在高水肥条件下，产量可达5000-6000公斤／公顷。
- 何中国曲祥春栾天浩李忠鹏
- 关键词：春小麦品种丰产栽培复种水肥条件小冰麦公顷
- 膦丝菌素乙酰转移酶的表达及单克隆抗体制备被引量：5
- 2013年
- 目的表达有生物活性的膦丝菌素乙酰转移酶(PAT),制备PAT蛋白单克隆抗体(mAb)。方法通过PCR克隆bar基因编码区全长,将bar基因与原核表达载体pET28a(+)连接,构建重组质粒pET28-bar并转化大肠杆菌菌株BL21(DE3),经IPTG诱导目的蛋白表达,利用镍离子亲和层析纯化PAT蛋白,分析PAT蛋白活性。免疫BALB/c小鼠,取免疫后的小鼠脾脏与Sp2/0细胞融合,经间接ELISA筛选分泌抗PAT蛋白抗体杂交瘤细胞。结果在大肠杆菌中以可溶形式表达出重组PAT蛋白,纯化的重组PAT蛋白具有乙酰转移酶活性,制备了9株抗PAT蛋白mAb。结论表达的PAT蛋白可以用于除草剂解除剂研究,制备的mAb可能用于转基因产品的检测研究。
- 高旭东王永志时圣凤李忠鹏李小宇徐文静张正坤路扬张佳诗李启云王金刚
- 关键词：BAR基因蛋白表达抗体制备
