李小宇
- 作品数：51 被引量：49H指数：6
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- Carboxin抗性基因(Cbx^R)原核表达及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2015年
- [目的]克隆CbxR基因,进行原核表达,纯化CbxR基因蛋白并制备其多克隆抗体。[方法]CbxR基因克隆至原核表达载体p ET-28a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达并纯化,Western blot鉴定分析。制备CbxR蛋白的兔源多克隆抗体,运用间接ELISA方法检测多抗效价,利用Western blot印记检测抗体特异性。[结果]成功获得CbxR基因,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导可大量表达,成功制备CbxR蛋白兔源多克隆抗体,效价为1∶64 000,经Western blot检测表明多克隆抗体特异性良好。[结论]多克隆抗体为CbxR检测及进一步研究CbxR基因功能奠定了基础。
- 李小宇张正坤王秋华张春雨张淋淋尤晴杨凤升王永志李启云
- 关键词：原核表达蛋白纯化多克隆抗体
- 吉林省水稻二化螟发生动态研究被引量：3
- 2021年
- 2018-2020年,对吉林省不同水稻种植区水稻二化螟发生世代及发生动态进行了系统调查。结果显示,在中西部稻区白城市(洮北区)、扶余市和公主岭市二化螟一年可发生2代,性诱监测越冬代和第1代成虫发生高峰期分别在6月上、中旬和8月上、中旬。在中东部稻区的榆树市和吉林市(昌邑区),二化螟一年发生1~2代,榆树市在6月上、中旬和8月上、中旬,吉林市在6月中、下旬和8月中旬各有1个诱蛾高峰。在东南部稻区的柳河县和和龙市,二化螟1年发生1代,柳河县诱蛾高峰期在6月下旬到7月上旬,和龙市未发现明显诱蛾高峰。通过为害情况调查发现,水稻收获前2代区二化螟为害情况普遍重于1代区,应加强对2代区第2代二化螟的监测与防治。
- 周淑香陈立玲李丽娟鲁新高月波李小宇
- 关键词：水稻二化螟
- 洋葱黄矮病毒RT-PCR和ELISA检测方法的建立被引量：4
- 2019年
- 分麋洋葱Alliumcepa var.aggregatum俗称毛葱、鬼子葱,是北方地区特色经济作物,保健功效显著,其种植面积逐年增加。洋葱黄矮病毒(OBnion yellow dwarfvirus,OYDV)能够侵染分麋洋葱,造成其产量和品质下降。OYDV侵染分麋洋葱后,植株矮化,叶片变形褪绿、叶尖枯萎,后期整个叶片表现发黄、起皱及萎缩等症状。为能在发病早期及时快速地检测出OYDV,本研究利用特异性引物和已制备的单克隆抗体,通过优化参数确定最佳检测条件,建立OYDV的RT-PCR和ELISA检测方法,以期为分麋洋葱生产中农药减施提供技术保障。
- 郭炎李小宇苏颖张春雨周雪平王永志
- 关键词：ELISA检测方法RT-PCR单克隆抗体特异性引物经济作物
- 马铃薯卷叶病毒衣壳蛋白原核表达及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2021年
- 本研究克隆马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus,PLRV)衣壳蛋白(Coat Protein, CP)基因,改造其密码子,使其偏好原核表达,构建pCzn1-PLRV CP重组表达载体,通过大肠杆菌表达纯化,经Western Blot方法鉴定为PLRV CP蛋白,纯化后的蛋白免疫日本大耳兔,成功制备PLRV CP蛋白多克隆抗体,识别重组蛋白效价为128 000倍,识别PLRV叶片的效价为32 000倍,经Western Blot方法分析,其特异性良好。本研究为PLRV检测方法的建立及脱毒种薯的检测提供了必需的生物材料。
- 王韬远张春雨王忠伟李闯张胜利李建平李小宇王永志
- 关键词：马铃薯卷叶病毒衣壳蛋白原核表达多克隆抗体
- 双抗夹心ELISA检测转Bar基因抗除草剂大豆被引量：8
- 2016年
- 为快捷有效地检测转Bar基因抗除草剂大豆,利用已制备的抗除草剂Bar基因编码蛋白,膦丝菌素乙酰转移酶(phosphinothricin acetyltransferase,PAT)单克隆抗体和多克隆抗体,建立PAT蛋白双抗夹心酶联免疫吸附检测方法,对转Bar基因抗除草剂大豆不同组织材料进行定量检测。结果显示,最佳检测条件为捕获抗体质量浓度0.125μg/m L,包被酶标板,37℃孵育1 h后4℃静置过夜,检测样品37℃孵育1.5 h,检测抗体质量浓度6.25μg/m L,37℃孵育1.5 h;PAT蛋白的最低检测限为0.04 ng/m L,大豆蛋白体系中为8 ng/m L;重复性变异系数小于3%。利用上述检测条件,对实验建立的转Bar基因抗除草剂大豆进行PAT蛋白定量检测,成功地在根、茎、花、叶、种子不同部位检测到该蛋白的表达。
- 李小宇张春雨郭东全张淋淋尤晴董英山王永志李启云
- 关键词：BAR大豆
- 马铃薯Y病毒瞬时ELISA检测试剂盒的研制
- 马铃薯病毒检测方法主要有生物学检测法、电子显微镜检测法、分子生物学检测法和血清学检测法。ELISA属于血清学检测方法,具有高通量、不依赖特定仪器设备,稳定性好等优点,但操作繁琐耗时较长。为了建立马铃薯Y病毒(PVY)快速...
- 梁雨欣李小宇张春雨侯吉超王永志
- 关键词：马铃薯Y病毒单克隆抗体抗原表位
- 文献传递
- 马铃薯卷叶病毒衣壳蛋白原核表达及多克隆抗体的制备
- 中国是世界第一大马铃薯生产国,种植面积占全球25％,总产量约占全球的20％,随着2015年中国提出马铃薯主粮化战略,马铃薯已成为第四大主粮作物.在马铃薯的生产过程中,病毒病是最严重的病害之一,其可以通过种薯传播,所以脱毒...
- 李小宇王韬远张春雨王忠伟李闯张胜利王永志
- 关键词：马铃薯卷叶病毒衣壳蛋白原核表达多克隆抗体
- 东北大豆花叶病毒3号株系全基因组感染性克隆的构建
- 为获得东北大豆花叶病毒3号株系(SMV-3)全基因组感染性克隆,提取SMV-3总RNA,反转录体外合成cDNA第一条链,采用PCR方法扩增出SMV-3全长的三个片段,将各PCR产物与载体通过同源重组的方法连接获得含有完整...
- 张淋淋李小宇张春雨尤晴王永志张俊华李启云
- 关键词：大豆花叶病毒感染性克隆
- 吉林、黑龙江毛葱病毒病调查被引量：2
- 2021年
- 本研究为明确吉林和黑龙江省毛葱病毒病发生率,从两省5个地区共采集255份毛葱样品。根据毛葱4种主要病毒基因组序列设计特异性引物,对胡葱黄条病毒Shallot yellow stripe virus(SYSV)和青葱X病毒Shallot virus X(SVX)、洋葱黄矮病毒Onion yellow dwarf virus(OYDV)和葱潜隐病毒Shallot latent virus(SLV)进行双重RT-PCR检测。结果表明,229份样品检出病毒,带毒率为89.8%,SLV的检出率最高,达87.06%,OYDV次之,为36.86%,SYSV检出率偏低,为0.78%;同时存在病毒复合侵染,其中双病毒复合侵染为SLV和OYDV,检出率为33.3%;三病毒复合侵染为SYSV、OYDV和SLV,检出率为0.78%,未发现4种病毒复合侵染。本研究为吉林和黑龙江种植区毛葱病毒病防治提供了参考依据。
- 刘建青王永志周琦黄淑敏梁雨欣张春雨魏健程兆伟李小宇
- 关键词：毛葱病毒病双重RT-PCR
- 百合斑驳病毒靖宇分离物全基因组序列测定与进化分析
- 2023年
- 以采自吉林省白山市靖宇县的野生百合感病叶片为试材,采用小RNA深度测序法检测到1株百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMoV),采用分段克隆方法,对LMoV靖宇分离物(LMoV-JY)的全基因组进行测定并分析,以期对吉林省百合病毒病的检测和防控提供参考依据。结果表明:LMoV-JY基因组大小为9648个核苷酸(nt)序列(GenBank登录号MT795719),该核苷酸序列在第154~9444位存在1个大的开放阅读框(ORF),编码1个多聚蛋白(分子量351.46kD)。LMoV-JY与GenBank中登录的其他LMoV分离物的全基因组核苷酸序列比较,其一致性为82.82%~97.85%,在氨基酸水平上的一致性为92.96%~98.64%,其中与百合斑驳病毒大连分离物LMoV-DL(HM222521)的一致性在该2种水平上均为最高。对比LMoV-JY外壳蛋白与其他54个分离物的氨基酸序列,发现可将LMoV分离物分为2个类群。
- 张春雨李小宇王晨黄瑞贤黄淑敏王永志
- 关键词：百合斑驳病毒基因组
