王永志
- 作品数：84 被引量：109H指数：7
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- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 大豆花叶病毒衣壳蛋白单克隆抗体的制备及其中和活性分析
- 本研究克隆了东北大豆花叶病毒3号株系衣壳(cp)蛋白基因,在大肠杆菌中表达了cp蛋白,通过亲和层析获得了纯化的cp蛋白;制备了9株cp蛋白单克隆抗体,中和试验表明,6E7、2D3、1C2这3株单克隆抗体具有中和作用,能够...
- 王永志苏颖米丽娟张伟宋淑云刘颖张正坤董英山李启云
- 关键词：大豆花叶病毒衣壳蛋白单克隆抗体中和活性
- 文献传递
- 苜蓿花叶病毒ELISA检测方法的建立及其在大豆病毒调查和抗性资源鉴定中的应用
- 2023年
- 苜蓿花叶病毒(alfalfa mosaic virus,AMV)是一种世界性分布、宿主范围广、具有严重危害性的植物病毒,能引起大豆的严重病害。本研究利用原核表达的AMV CP蛋白制备的抗血清,建立了高效、准确的AMV间接ELISA检测方法,并应用于病害调查和抗性鉴定,结果表明制备的3份抗血清对重组蛋白和AMV感染的大豆植物粗提液的效价均达到256000倍,血清特异性分析结果显示3份抗血清仅识别感染AMV的大豆叶片,不识别感染大豆花叶病毒(soybean mosaic virus,SMV)的大豆叶片。通过建立的AMV间接ELISA与常规RT-PCR同时对采集的50份疑似感染AMV的大豆样品进行检测,有46份样品检测结果一致,符合率达92%。利用建立的AMV ELISA方法和课题组已建立的SMV ELISA方法对吉林省大豆主产区的大豆样品进行病毒检测的结果表明,病毒检出率为38.30%,SMV的检出率达30.85%,AMV的检出率达17.06%,复合侵染率为9.61%。对接种AMV的40个大豆品种进行抗性鉴定,结果显示40份大豆全部感染AMV,但是病毒载量存在差异,部分品种表现出AMV抗性,其中大豆抗性资源11份,首次发现AMV造成的大豆病害已经成为吉林省大豆的主要病害之一。
- 战笑蕾王馨玥李小宇张春雨刘建青王晨王斌梁雨欣王永志程晓非
- 关键词：大豆苜蓿花叶病毒间接ELISA
- 蚓激酶乳腺组织特异性表达载体构建及在山羊奶中的表达被引量：1
- 2005年
- 以合成的蚓激酶cDNA突变体为目的基因,构建了其乳腺组织特异性表达载体pIbCP-LK-neo和含有两个目的基因拷贝的表达载体pIbCP-LK-LK.以山羊乳腺作为生物反应器,在稳定泌乳期于乳腺组织分别注射以上两种表达质粒,采集乳汁,通过纤维蛋白平板溶圈试验进行纤溶活性测定.结果显示,注射了蚓激酶表达质粒的山羊奶具有明显的纤溶活性;pIbCP-LK-LK蚓激酶在奶中的表达量高于pIbCP-LK-neo.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析表明,表达的蚓激酶分子量为26kDa.本试验系首次实现了蚓激酶的基因工程表达,为通过转基因途径生产蚓激酶奠定了基础.
- 梁慧颖张守峰扈荣良王永志涂长春王莘
- 关键词：蚓激酶乳腺组织特异性表达纤溶活性山羊奶目的基因
- 羊衣原体病检测方法的研究进展被引量：1
- 2023年
- 近年来,畜牧产业的蓬勃发展,养羊业的逐渐壮大,养羊场在扩大规模的同时其患羊衣原体病的概率也在增多,这给养殖户造成了严重的经济损失。羊衣原体病(Ovine chlamydidis)是由流产嗜羊衣原体引起的,主要侵害种羊和羔羊的一种传染性疾病。该病潜伏期长,多呈地方性流行,严重可表现出母羊流产、死胎和羔羊多发性关节炎、结膜炎等临床症状。因此,为有效遏制该疾病的传播、扩散,采用高效、快速的检测方法将成为重要的手段。本文主要综述了羊衣原体病检测方法的研究进展。
- 曲磊魏天王成宇王思月肖丹张芳毓王永志
- 转Cp4 epsps基因大豆快速DAS-ELISA检测方法的建立被引量：1
- 2021年
- 为了快速检测转Cp4 epsps基因大豆,本研究以纯化后的CP4-EPSPS单克隆抗体1D12为捕获抗体,辣根过氧化物酶标记的羊抗CP4-EPSPS多克隆抗体8092为检测抗体,通过优化抗体工作浓度和抗原抗体反应时间,成功建立转Cp4 epsps基因大豆快速双抗夹心ELISA检测方法。结果显示:最佳检测条件为捕获抗体浓度10μg/mL,检测抗体浓度1.25μg/mL,样品与检测抗体先后加入酶标板37℃共同孵育60 min。该方法的检测范围为0.3125~80μg/mL,待检叶片、籽粒最佳检测范围为10~80倍稀释;板内变异系数为1.64%~5.42%,板间变异系数为3.05%~9.13%,符合ELISA定性试剂盒参考标准;对100份大豆叶片、20份大豆籽粒进行检测,与Western blot结果和标准结果进行比较,符合率为100%,表明该检测方法具有良好的准确性和重复性。该检测方法75 min内即可完成检测,适用于快速检测转Cp4 epsps基因大豆,为转Cp4 epsps基因快速检测试剂盒的开发奠定了基础。
- 候吉超李忠鹏梁雨欣张春雨李小宇王永志
- 关键词：大豆
- 狂犬病病毒糖蛋白膜外区重组犬-2型腺病毒构建及免疫研究
- 通过RT-PCR扩增得到狂犬病病毒糖蛋白膜外区序列,将该序列克隆入pMD-18T中;用膜外区序列将pEGFP-C1中的绿色荧光蛋白部分取代,得到含有表达盒的pEGFP-G<,2>,用AseI和MluI双酶切可游离出此表达...
- 王永志扈荣良王莘张守峰李海涛肖跃强夏咸柱
- 关键词：狂犬病糖蛋白膜外区狂犬病病毒
- 文献传递
- 大豆花叶病毒浸染性克隆及其构建方法和应用
- 本发明提供了一种大豆花叶病毒浸染性克隆及其构建方法和应用，涉及生物技术领域。该大豆花叶病毒浸染性克隆中，大豆花叶病毒的p3基因区域内含有宿主的内含子片段，能够在大肠杆菌中增殖，浸染宿主后能使宿主产生SMV典型症状。
- 王永志李小宇张淋淋李启云董英山
- 文献传递
- 大豆花叶病毒衣壳蛋白单克隆抗体的制备及其中和活性分析
- 本研究克隆了东北大豆花叶病毒3号株系衣壳(cp)蛋白基因,在大肠杆菌中表达了cp蛋白,通过亲和层析获得了纯化的cp蛋白;制备了9株cp蛋白单克隆抗体,中和试验表明,6E7、2D3、1C2这3株单克隆抗体具有中和作用,能够...
- 王永志苏颖米丽娟张伟宋淑云刘颖张正坤董英山李启云
- 关键词：大豆花叶病毒衣壳蛋白单克隆抗体中和活性
- 文献传递
- 一种利用中药渣生产的保健饲料添加剂及制备方法
- 本发明提供一种利用中药渣生产的保健饲料添加剂及制备方法，涉及饲料技术领域。一种利用中药渣生产的保健饲料添加剂，按照重量份数计，其主要原料包括：中药渣110～150份、植物粉15～25份、第一菌种8～18份、第二菌种0.5...
- 王永志李小宇张春雨
- 文献传递
- 鲤鱼春季病毒出血症病毒G基因在昆虫细胞中的表达与鉴定
- 2012年
- 采用RT-PCR方法扩增鲤鱼春季病毒出血症病毒(SVCV)的糖蛋白(G)基因,将PCR产物插入到杆状病毒转移载体pFastBac 1中,获得重组转移载体pFastBac 1-G,将其转化入含有Bacmid的DH10Bac感受态细胞中,经3种抗性和蓝白斑筛选,获得含有G基因的重组穿梭质粒rBacmid-G。在脂质体转染试剂的介导下,将rBacmid-G转染sf9细胞,获得重组杆状病毒。提取重组杆状病毒基因组,用M13引物PCR鉴定。对重组杆状病毒感染的sf9细胞,通过电镜观察、SDS-PAGE、Western blotting进行检测,结果表明,重组蛋白在sf9细胞中获得正确表达,相对分子质量约58 000,与鼠抗SVCV阳性血清具有良好的反应原性。本试验为研究鲤鱼春季病毒出血症病毒G蛋白的生物学活性和亚单位疫苗的研制奠定了基础。
- 李月红付云红陈奇王永志扈荣良
- 关键词：G基因杆状病毒表达
