柳永蕾
- 作品数：20 被引量：68H指数：6
- 供职机构：山东省肿瘤医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 乏氧诱导因子-1α基因沉默对肺癌细胞乏氧应答相关基因表达的影响被引量：2
- 2007年
- 乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)是肿瘤细胞适应乏氧微环境的关键调控因子,具有作为治疗靶基因的潜力,以克服乏氧诱导的治疗抗拒等效应.下调其表达可能影响肿瘤细胞内一系列乏氧应答相关基因的表达.本研究采用已构建的HIF-1αRNAi慢病毒载体转导肺腺癌A549细胞,经杀稻瘟素(blasticidin)筛选建立HIF-1α基因稳定沉默的A549细胞株.应用cDNA微阵列技术检测并比较HIF-1α基因沉默A549细胞株和其亲本细胞株在常氧和乏氧状态下的基因表达谱改变.应用定量RT-PCR方法验证部分cDNA芯片差异表达基因的表达改变.HIF-1α基因稳定沉默细胞株A549/HIF-1α(-),在常氧和乏氧条件下HIF-1α mRNA水平分别较A549细胞下降89.2%和88.1%,HIF-1α蛋白水平分别下降97.2%和88.4%.在乏氧条件下,cDNA微阵列检测的1280个基因中,52个基因表达上调,15个基因表达下调.HIF-1α基因沉默显著影响其中27个基因的乏氧诱导效应.定量RT-PCR验证其中ENO2、BCL-2、CXCR4和MMP11的表达水平,与cDNA芯片结果相符合.结果提示,HIF-1α基因沉默能够在一定程度上阻断肺癌细胞的乏氧应答,在克服乏氧导致的肺癌治疗抗拒方面具有潜力.
- 宋现让宋宝魏玲柳永蕾王兴武
- 关键词：乏氧诱导因子-1ΑRNA干扰A549细胞
- HIF家族成员在肺癌的氧调节表达的研究
- 乏氧诱导因子(hypoxia2inducible factor,HIF)是细胞乏氧下激活的主要转录因子,可以通过与启动子部位具有乏氧反应元件的基因相结合,调控下游基因的表达,使肿瘤细胞生物学特性发生改变,与肿瘤细胞的生物...
- 宋现让宋宝魏玲谢丽柳永蕾吕丽燕
- 关键词：乏氧诱导因子肺癌基因表达
- 文献传递
- 人HIF-1α基因沉默肺癌细胞株的筛选及鉴定
- 2006年
- 宋现让迟伟玲柳永蕾魏玲王兴武宋宝
- 关键词：肺癌RNA干扰慢病毒乏氧诱导因子
- RNA干扰下调拓扑异构酶Ⅰ在小细胞肺癌细胞株的表达及其与拓扑替康敏感性的关系
- 2008年
- 目的检测拓扑异构酶Ⅰ（TopⅠ）在小细胞肺癌（SCLC）细胞株中的表达，并探讨其表达水平对拓扑替康（TPT）敏感性的影响。方法采用Western blot检测TopⅠ在SCLC细胞株H446蛋自水平的表达；应用人工合成并荧光标记的小干扰RNA（siRNA），通过脂质体瞬时转染H446细胞，流式细胞仪检测转染效率；应用定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blot检测各干扰序列对TopⅠ在mRNA及蛋白水平的干扰效果，筛选最佳干扰序列；对转染后的细胞株进行药物敏感性实验，观察TopⅠ的表达对TPT敏感性的影响。结果TopⅠ基因在H446中有较高表达；siRNA干扰效果满意，转染效率可达86．7％左右；siRNA oligo TopⅠ-892、siRNA oligo TopⅠ-1152、siRNA oligo TopⅠ-2084和siRNA oligo TopⅠ-2397等4个于扰序列均抑制H446细胞TopⅠ mRNA的表达，抑制率分别为（95．7±1．6）％、（90．8±1．6）％、（96．1±2．7）％和（96．3±1．8）％。序列siRNA oligo TopⅠ-2084和siRNA oligo TopⅠ-2397干扰后，H446细胞TopⅠ蛋白表达明显降低。药物敏感性实验结果显示，相同浓度的TPT对实验组H446细胞的抑制率明显低于转染前及阴性对照的H446细胞（P〈0．01）。结论脂质体介导的人工合成siRNA瞬时转染可有效抑制H446细胞的TopⅠ表达，明显降低细胞对TPT的敏感性。
- 刘秀菊郭其森张琼宋现让柳永蕾郭琛
- 关键词：RNAI拓扑替康药物敏感性
- 乏氧诱导肿瘤放化疗耐受的相关基础问题研究
- 宋现让谢丽魏玲柳永蕾宋宝
- 该项目属肿瘤基础研究领域，主要研究乏氧诱导的放化疗耐受的机制并在此基础上建立解决方案。化疗和放疗是恶性肿瘤的主要治疗手段，约90%以上的患者需接受放化疗。对药物和放射线的敏感性是治疗成功与否的关键。实体瘤中普遍存在的组织...
- 关键词：
- 关键词：肿瘤治疗药物治疗放射线治疗
- 肿瘤乏氧耐药机制及对策被引量：1
- 2005年
- 乏氧是实体肿瘤发生的普遍现象,它可通过多种途径引起肿瘤耐药。其机制分两类:氧分子减少的直接作用和低氧引起如细胞周期停滞、DNA 修复酶增加、耐药蛋白增加、微酸环境等的间接作用。针对肿瘤乏氧耐药的治疗主要有3种途径:提高肿瘤氧合、开发利用肿瘤乏氧微环境和以乏氧诱导因子-1(HIF-1) 为靶点的治疗。
- 柳永蕾宋现让
- 关键词：细胞低氧
- RNA干扰HIF-1α增强人肺腺癌SPCA-1细胞放射敏感性的研究被引量：8
- 2005年
- 目的探讨RNA干扰乏氧诱导因子1(HIF-1)增强人肺腺癌SPCA-1细胞的放射敏感性。方法构建干扰HIF-1α质粒pSUPER-HIF-1α,采用荧光定量RT-PCR、Western blot方法观察有氧与乏氧状态下RNA干扰HIF-1α的变化,用成克隆实验观察乏氧时RNA干扰HIF-1α对放射的增敏作用。结果在常氧和乏氧的状态下,RNA干扰HIF-1α引起mRNA的表达水平分别下降64%和76%;在乏氧的状态下,蛋白的表达下降。转染pSUPER-HIF-1α后的细胞存活曲线的D0值为2.5 Gy,转染空白质粒细胞和空白对照细胞的D0值分别为5.0 Gy和5.1 Gy,增敏比为2.1。结论RNA干扰HIF-1α可以增加SPCA-1细胞对放射的敏感性。
- 任瑞美于金明孙新东张建东宋现让柳永蕾尹勇
- 关键词：肺腺癌
- 乏氧诱导因子结构、表达及调控被引量：10
- 2006年
- 乏氧诱导因子(HIF)是乏氧应答中起重要作用的转录因子,一直是乏氧研究的焦点.HIF由α亚基和β亚基组成,α亚基包括HIF-1α、HIF-2α和HIF-3α,其中α亚基因诱导条件不同通过选择性剪接产生不同变体.β亚基包括ARNT、ARNT2和ARNT3.α与β亚基在乏氧等应激反应时形成二聚体HIF启动靶基因转录表达,参与多种细胞生物学功能的调控.目前为止,大多数的研究都集中于野生型HIF-1α,对它的结构、表达调控及其调控做了相对全面而清楚的了解.后来通过多种策略及方法,陆续发现并克隆出了除HIF-1α外的HIF各亚基.研究不再局限于HIF-1α,而是扩展至HIF整个系统,如相继发现的HIF-2α和HIF-3α亚基,以及它们的变体,对HIF-1α的研究也更深入了,但是关于HIF-1α的变体、HIF-2α、HIF-3α及β亚基的表达调控及功能还不明确,是未来研究的方向.本文全面介绍HIF的最新研究进展,阐述HIF各亚基的结构、表达调控及其靶基因的表达情况.
- 柳永蕾宋现让
- 关键词：乏氧诱导因子变体
- 慢病毒shRNA表达载体介导人肿瘤细胞基因稳定沉默的影响因素被引量：5
- 2007年
- 目的:探讨慢病毒载体介导人肿瘤细胞RNA干扰的影响因素。方法:用介导RNAi的慢病毒载体Lenti6-HIF1α和Lenti6-HIF1β分别转导人肿瘤细胞系Hela、SPCA1和A549,筛选靶基因稳定表达沉默的细胞株。病毒RNA分子拷贝数和靶基因mRNA水平用实时定量RT-PCR确定。结果:针对不同靶基因的慢病毒转导肿瘤细胞的效率与靶基因无关、存在细胞类型特异性。8h内病毒转导效率与吸附时间呈正关,12h后继续延长吸附时间不能提高转导效率。对靶基因表达的特异性抑制效果与病毒量呈正相关。靶基因稳定沉默细胞株的RNAi效果与细胞类型无关,与靶细胞基因组整合的shRNA表达结构的拷贝数呈正相关。结论:慢病毒载体介导人肿瘤细胞RNA干扰,短期基因抑制效果取决于细胞类型、病毒量和病毒的吸附时间,稳定基因沉默效果与病毒整合到靶细胞基因组的拷贝数相关,筛选稳定基因沉默细胞株时,应尽可能提高病毒量以提高病毒整合的拷贝数。
- 宋现让迟伟玲魏玲王兴武柳永蕾宋宝
- 关键词：慢病毒载体RNA干扰
- 18种人肿瘤细胞株药物敏感性与基因表达的关系被引量：6
- 2006年
- 目的探讨18种人肿瘤细胞对化疗药物的敏感性与基因表达的关系。方法采用MTT法检测细胞株对阿霉素(ADM)、顺铂(DDP)、丝裂霉素(MMC)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)和卡氮芥(BCNU)的敏感性。流式细胞术检测P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽-S-转移酶-π(GST-π)、肺耐药蛋白(LRP)、多药耐药相关蛋白(MRP)和甲基鸟嘌呤甲基转移酶(MGMT)等耐药相关基因和Fas、bcl-2、p53和p16等凋亡调控基因的表达。结果不同细胞株对同一药物敏感性有较大差异。相关分析表明,细胞株对DDP的敏感性与p53表达呈负相关(P=0.041),对其余药物的敏感性与所检基因的表达水平无关(P>0.05)。结论细胞株对DDP的敏感性与p53表达有关。
- 宋现让魏玲王兴武郑燕柳永蕾
- 关键词：肿瘤细胞株化疗敏感性基因表达
