李秀娟
- 作品数：10 被引量：15H指数：2
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Apelin促进人诱导性多能干细胞心肌定向分化的研究被引量：2
- 2014年
- 目的探讨Apelin对人诱导性多能干细胞(hiPSC)的心肌定向分化作用。方法 hiPSC经悬浮法诱导形成拟胚体,分为Apelin处理组(Apelin组)和对照组。Apelin组在高糖DMEM培养液中加入10μmol/ml Apelin,分别于第3、7、11、15、21天采用RT-PCR、Western blot法检测及免疫荧光染色,观察干细胞全能性标记物Oct4、心肌祖细胞标记物Nkx 2.5、心肌特异性肌钙蛋白I(cTnI)的表达变化。结果 Apelin组iPSC在诱导分化后第3天Oct4和Nanog基因表达水平明显降低,分别为同期对照组的(63.2±10.1)%和(51.7±1.6)%(P<0.01);诱导分化后第7天Nkx 2.5和cTnI基因表达水平明显升高,分别为同期对照组的(162.4±22.5)%和(250.6±22.3)%(P<0.05,P<0.01);诱导分化后第15天时,cTnI表达为同期对照组的(156.2±6.4)%(P<0.05);免疫荧光染色显示,cTnI阳性细胞明显多于对照组。结论 Apelin可明显促进hiPSC的心肌定向分化。
- 马珂刘通黄炜卜庆婷李秀娟赵传旭李霜王亚斌曹丰
- 关键词：多能干细胞肌钙蛋白
- 自噬参与高糖缺氧诱导的人脐静脉内皮损伤机制的实验研究被引量：2
- 2017年
- 目的观察高糖缺氧状态人脐静脉内皮细胞(HUVECs)自噬水平的变化,探讨自噬在这一过程中所起到的作用。方法通过体外细胞培养的方法培养HUVECs并分为6组,即正常对照组、高糖组、正常细胞缺氧组、高糖缺氧组、高糖缺氧+雷帕霉素组、高糖缺氧+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组。各组经过相应处理后,通过流式细胞仪、Caspase-3活性试剂盒检测凋亡率、Western blot检测自噬相关蛋白(LC-3、Beclin-1、Atg-5和STSQM1)的表达情况。结果与正常缺氧组相比,高糖缺氧组的自噬相关蛋白LC-3B、Beclin-1和Atg-5表达降低,STSQM1表达升高(均P<0.05),使用雷帕霉素可以上调高糖缺氧组自噬水平并且降低细胞凋亡率,加入自噬抑制剂3-MA使高糖缺氧组自噬下调,细胞凋亡率上升(均P<0.05)。结论高糖缺氧状态下HUVECs自噬功能受损,上调自噬可以降低凋亡率,发挥保护细胞的作用。
- 范文斯王亚斌韩东邱雅樊苗苗李秀娟曹丰
- 关键词：自噬缺氧内皮细胞
- 低频脉冲磁场调节NO/ONOO-对缺氧/复氧条件下心肌细胞的保护作用
- 2013年
- 目的:观察低频脉冲磁场(LF-PMFs)对缺氧/复氧(H/R)条件下乳鼠心肌细胞增殖与凋亡的影响,并探讨一氧化氮/过氧亚硝基阴离子(NO/ONOO-)平衡在LF-PMFs保护心肌细胞的作用。方法:采用酶消化法分离SD乳鼠心肌细胞,随机分为对照组、H/R组和磁场组。用TUNEL法检测心肌细胞凋亡程度,MTT比色法检测心肌细胞增殖活性,以观察LF-PMFs对损伤心肌细胞的效果,用WST-1法检测超氧阴离子,Griess法测定NO和ONOO-。结果:LF-PMFs磁场可减少H/R诱导的心肌细胞凋亡,并促进心肌细胞的存活,以15 Hz,4.5 mT LF-PMFs磁场的作用效果最为显著。同时LF-PMFs可减少H/R条件下乳鼠心肌细胞超氧阴离子的生成,促进NO生成,提高NO/ONOO-比值。结论:LF-PMFs可通过抗氧化及调节NO/ONOO-平衡减轻H/R导致的心肌细胞损伤。
- 张正勋易甫范伟伟张荣庆王东娟李秀娟曹丰
- 关键词：低频脉冲磁场心肌细胞缺氧复氧NO
- 生长分化因子-11促进小鼠诱导性多能干细胞向心肌细胞定向分化的研究被引量：2
- 2016年
- 目的明确生长分化因子(GDF)-11对小鼠诱导多能干细胞(mi PSCs)向心肌细胞定向分化的促进作用,为心肌再生的细胞生物学治疗提供种子细胞和实验依据。方法常规培养小鼠mi PSCs,分为对照组和GDF-11组。GDF-11组在普通分化培养基中加用10 ng/ml的GDF-11。悬滴法诱导培养形成拟胚体(EBs),每日观察搏动拟胚体数目。采用实时荧光定量PCR检测多能干细胞标志物Oct-4、心脏中胚层标志物Flk-1、心脏祖细胞标志物Nkx2.5、和心肌特异性标志物c Tn T的表达变化。用免疫荧光染色观察心肌结构蛋白c Tn I的表达水平。结果GDF-11组的Oct-4表达水平在诱导分化的第3、7天分别为同期对照组的(0.55±0.31)倍(P<0.01)和(0.41±0.57)倍(P<0.05);诱导分化的第10天,GDF-11组的Flk-1和Nkx2.5表达相分别为对照组的(2.09±0.8)倍(P<0.05)和(2.47±0.22)倍(P<0.01);c Tn T的表达在分化后第10天和第14天分别为对照组的(1.81±0.19)倍(P<0.01)和(1.61±0.20)倍(P<0.01);两组均出现了心肌样搏动细胞团,GDF-11组搏动EBs百分比要显著高于对照组(P<0.01)。免疫荧光染色显示,GDF-11组的c Tn I阳性率要显著高于对照组(P<0.01)。结论 GDF-1能够显著促进mi PSCs的心肌定向分化。
- 郭涛刘通陈江炜江振华李秀娟樊苗苗曹丰
- 关键词：诱导多能干细胞小鼠
- 肝X受体激动剂可改善间充质干细胞移植治疗小鼠急性心肌梗死的疗效被引量：1
- 2012年
- 目的 探讨肝x受体（LXR）激动剂对脂肪来源的间充质干细胞移植治疗小鼠急性心肌梗死（MI）的影响。方法酶消化法分离出稳定表达报告基因萤火虫荧光素酶（firefly lueiferase，Fluc＋）小鼠的脂肪间充质干细胞（AD-MSC^Fluc），流式细胞术检测CD90、CD44、CD34、CD45等细胞表面标志物。雄性近交系小鼠（无报告基因表达）随机分成以下4组（每组10只）：（1）假手术组；（2）MI＋PBS组；（3）MI＋AD-MSC^Fluc＋组；（4）MI＋AD-MSC^Fluc＋LXR激动剂（T0901317）干预组，每组分别进行相应的干预。生物发光成像（BLI）检测移植后AD．MSC的存活情况，小动物超声检查评价小鼠心脏功能。结果流式细胞术结果显示脂肪间充质干细胞CD44、CD90阳性，CD34、CIM5阴性。光学成像结果显示AD-MSC^Fluc的光学信号强度与细胞数量呈正相关（r^2=0．98）。术后在体生物发光成像结果显示术后第7、14、2l、28天MI＋AD-MSC^Fluc＋＋319901317组BLI信号强度依次为（1．60±0．11）×10^3、（0．934-0．08）×10^5、（0．554-0．07）×10^5和（0．274-0．05）×10^5P·S^-1·CIll^-2·sr^-1，MI＋AD-MSC^Fluc＋组的BLI信号强度依次为（1．284-0．08）×10^5、（0．56±0．07）×10^5、（0．25±0．05）×10^5和（0．054-0．03）×10^5 P·s^-1·cm^-2·sr^-1，MI＋AD-MSC^Fluc＋。＋39901317组BLI信号强度明显强于MI＋AD-MSC^Fluc＋组相同时间点（P均〈0．05）。小动物超声检测结果显示术后第28天，MI＋PBS组、MI＋AD-MSC^Fluc＋组和MI＋AD-MSC^Fluc＋＋T0901317组小鼠LVEF依次为（27．874-1．81）％、（30．334-1．06）％和（40．494-1．31）％，FS依次为（16．544-0．83）％、（17．83±1．01）％和（25．24±0．99）％，MI＋AD-MSC^Fluc＋＋T0901317组小鼠LVEF和Fs均明显高于其他两组（JP均〈0．05）。结论LXR激动NT0901317可提高移植到小鼠梗死心肌的AD-MSC^Fluc＋的存活率，并能明显改善心�
- 李春红段红莉范伟伟王亚斌张铮张荣庆卜庆婷李秀娟曹丰
- 关键词：心肌梗死间质干细胞移植肝X受体激动剂
- 白藜芦醇通过抑制细胞凋亡延缓内皮细胞衰老被引量：5
- 2016年
- 目的探讨SIRT1在内皮细胞自然衰老过程中的变化和作用机制。方法连续培养传代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)38代,选取第1、5、10、15、20、25、30和35代细胞做Western blot检测内皮细胞自然衰老过程中SIRT1蛋白含量变化以及Annexin V-FITC法测定内皮细胞凋亡水平变化。选取第25代细胞,给予SIRT1激动剂白藜芦醇(30μmol/L)干预,β-半乳糖苷酶染色法检测内皮细胞的衰老程度以及Annexin V-FITC法测定内皮细胞凋亡水平。结果随着代数增加,内皮细胞上的SIRT1蛋白表达逐渐降低(P<0.01),内皮细胞凋亡率逐渐升高(P<0.01);给予第25代细胞白藜芦醇干预后,内皮细胞上的SIRT1表达升高(P<0.01),β-半乳糖苷酶阳性细胞率降低(P<0.01),凋亡率也降低(P<0.05)。结论内皮细胞自然衰老过程中,SIRT1的表达会降低;给予白藜芦醇干预后,能逆转内皮细胞的衰老,其作用机制可能与SIRT1降低了内皮细胞凋亡水平有关。
- 江振华马赛陈江炜郭涛李秀娟樊苗苗曹丰
- 关键词：SIRT1白藜芦醇内皮细胞衰老凋亡
- 白藜芦醇通过PI3K/Akt/SVV信号通路改善大鼠心肌微血管内皮细胞缺血再灌注损伤被引量：3
- 2014年
- 目的 探讨生存素（survivin,SVV）在白藜芦醇抗心肌微血管内皮细胞（cardiac microvascular endothelial cells,CMEC）缺血再灌注损伤中的作用.方法 体外培养大鼠心肌微血管内皮细胞,建立缺血再灌注损伤模型,完全随机法分为正常对照组（对照组）、缺血再灌注组、缺血再灌注＋白藜芦醇组（白藜芦醇组）、缺血再灌注＋白藜芦醇＋ LY294002组（LY294002组）.采用MTT比色法检测CMEC的增殖数量,Transwell法检测CMEC的迁移数量,PI-AnnexinV检测CMEC的凋亡率.Western blot法检测细胞SVV的蛋白表达水平.结果 缺血再灌注组CMEC增殖和迁移数量均显著低于对照组[0.19±0.03比0.42±0.07和（28±2）个/5个视野比（50±3）个/5个视野,P均＜0.01],凋亡率则显著高于对照组[（19.7±0.8）％比（5.4±0.3）％,P＜0.02].白藜芦醇组CMEC增殖和迁移数量均显著高于缺血再灌注组[0.36±0.07比0.19±0.03和（55±3）个/5个视野比（28±2）个/5个视野,P均＜0.05],凋亡率则显著低于缺血再灌注组[（9.6±0.7）％比（19.7±0.8）％,P＜0.05],SVV蛋白表达水平则高于缺血再灌注组（P＜0.05）.而LY294002组CMEC增殖和迁移数量均显著低于白藜芦醇组[0.25±0.05比0.36±0.07和（34±3）个/5个视野比（55±3）个/5个视野,P均＜0.05],凋亡率则显著高于白藜芦醇组[（16.2±0.6）％比（9.6±0.7）％,P＜0.05],SVV蛋白表达水平低于白藜芦醇组（P＜0.05）.结论 白藜芦醇可抑制缺血再灌注诱导的心肌微血管内皮细胞凋亡,其机制可能与PI3K/Akt介导的SVV上调相关.
- 左惠荣廖东初林龙张荣庆李秀娟
- 关键词：心肌再灌注损伤内皮细胞白藜芦醇
- 大麻素Ⅱ型受体激动剂促进小鼠心肌梗死后心脏干/祖细胞增殖的作用
- 2014年
- 目的:探讨大麻素Ⅱ型受体(CB2)选择性激动剂AM1241对小鼠心肌梗死(MI)模型中心脏干/祖细胞增殖的作用。方法:40只雄性C57BL/6小鼠通过结扎小鼠心脏左冠状动脉前降支建立MI模型并随机分为4组,每组10只(n=10):①假手术(Sham)组;②MI组;③MI+CB2受体激动剂AM1241(MI+AM1241)组;④MI+CB2受体激动剂AM1241+CB2受体拮抗剂AM630(MI+AM1241+AM630)组。采用小动物超声系统观察小鼠左室射血分数(LVEF)的变化。用免疫荧光染色法观察MI周边区表达干细胞生长因子受体(c-kit)、干细胞抗原1(Sca-1)的阳性细胞数,实时荧光定量PCR测定MI周边区c-kit、Sca-1和多药耐药蛋白P糖蛋白(MDR1)的表达水平。结果:与MI组相比,MI+AM1241组小鼠7 d和14 d心脏LVEF值显著提高(P<0.01)。免疫荧光染色的结果提示,MI+AM1241组c-kit和Sca-1的表达较MI组增多(P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示,MI+AM1241组c-kit和Sca-1的基因表达水平明显高于MI组(P<0.05)。同时,CB2受体拮抗剂AM630可阻断AM1241的上述作用。结论:CB2受体激活可促进梗死心肌干/祖细胞的增殖,改善心脏的收缩功能。
- 胡文星王亚斌刘通李秀娟马赛梁栋曹丰
- 关键词：心肌梗死祖细胞
- 心肌营养素-1诱导小鼠诱导性多能干细胞心肌细胞定向分化的实验研究被引量：1
- 2013年
- 目的:观察心肌营养素-1(CT-1)对小鼠诱导性多能干细胞(miPSCs)心肌细胞定向分化的诱导作用。方法:实验分为对照组与CT-1处理组。miPSCs经悬滴法诱导形成拟胚体,第3天培养基中加入1μmol/ml CT-1(CT-1组),对照组采用普通培养基。于第4、7、10和14天,收取细胞样本,采用实时PCR检测心脏特异标志物基因的表达。用免疫荧光染色及流式细胞术检测干细胞标志物Oct4和心肌特异性分化标志物肌钙蛋白I(cTnI)的表达。用透射电镜观察心肌样细胞的超微结构。结果:CT-1组第10天,样本中心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)基因表达的水平为同期对照组的1.75倍,有显著性差异(P<0.05)。免疫荧光染色法检测显示,两组均有cTnI表达。流式细胞术鉴定的结果显示,对照组与CT-1组cTnI的阳性率分别为28.5%和56.4%,有显著性差异(P<0.05)。电镜观察显示,CT-1组肌原纤维及胞内线粒体明显增多,肌纤维排列规则,可见细胞间桥粒连接和缝隙连接。结论:CT-1可显著提高miPSC向心肌细胞定向分化的效率。
- 刘通卜庆婷马珂金岩孙冬冬李秀娟曹丰
- 关键词：心肌营养素-1
- 大麻素Ⅱ型受体通过激活心脏祖细胞促进小鼠心肌梗死后内源性的心肌再生
- 2014年
- 大麻素Ⅱ型受体(CB2受体)激活可促进干细胞(如造血干/祖细胞和神经祖细胞)的增殖.心脏祖细胞激活和增殖在心肌梗死(心梗)后心肌内源性再生和修复中发挥重要作用.为了探讨CB2受体激活在促进心梗后心肌内源性再生和修复中的作用及具体机制,将雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、心梗组、心梗+AM1241(CB2受体激动剂)组和心梗+AM1241+Wortmannin(PI3K抑制剂)组,通过结扎左冠状动脉前降支建立小鼠心梗模型.利用vevo2100小动物超声观察小鼠左室射血分数和短轴缩短率的变化;马松三色染色观察心梗后心肌纤维化水平;免疫荧光染色观察心梗周边区表达c-kit,Runx1和ki67的阳性细胞数;酶联免疫吸附测定检测血浆中MDA,TNF-α和IL-6的水平;Western blot检测p-Akt,HO-1和Nrf-2蛋白的表达变化.结果表明,与心梗组相比,AM1241干预可提高小鼠心脏左室射血分数和短轴缩短率,同时减轻心肌纤维化的程度.免疫荧光染色结果显示,心梗+AM1241组,c-kit,Runx1和ki67染色的阳性细胞数量明显高于心梗组(P<0.05).此外,AM1241还可降低心梗后血浆中MDA,TNF-?和IL-6水平(P<0.05).Western blot结果提示,AM1241可明显增加细胞质中p-Akt和HO-1表达(P<0.05),同时促进胞核中Nrf-2的表达水平(P<0.05).然而,PI3K抑制剂Wortmannin可阻断AM1241的上述作用.以上结果表明,AM1241干预可促进心梗后心肌内源性再生,改善心脏功能和心肌重塑,此作用可能是通过调节PI3K/Akt/Nrf-2信号通路实现的.
- 马赛王亚斌王强胡文星王东娟李秀娟苏涛秦星张小天马珂陈江炜熊利泽曹丰
- 关键词：CB2受体
