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新型双基因表达盒真核载体的构建及功能验证被引量：1: 2011年; 目的:构建含双基因表达盒的新型基因疫苗真核表达载体pVAX2,并对其功能进行验证。方法:设计一个包含人巨细胞病毒启动子(CMVpromoter)、T7启动子、信号肽基因、血凝素A表位基因(HA)、多克隆位点区域(MCS)、c-myc抗原表位、血小板来源的生长因子受体跨膜区域(PDGFR TM)及牛生长激素多腺苷酸化信号(BGHpolyA)等八种元素的表达盒Ⅱ(Expressing cassetteⅡ),在其上下游添加NruⅠ酶切位点后,进行人工化学合成,连接到克隆载体pGH中得pGH-Ⅱ;用NruⅠ酶切pGH-Ⅱ,回收1 300bp左右的片段,去磷后插入到pVAX1的相应位点,NruⅠ及BglⅡ/PstⅠ酶切鉴定,获得新型基因疫苗真核表达载体pVAX2;然后以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,将其分别构建至两个不同的表达盒内,脂质体转染BHK-21细胞,利用RT-PCR及荧光显微镜技术进行该载体的功能验证。结果:两个表达盒内的EGFP基因在BHK-21细胞均能高效表达,相互间不受影响,且新构建的表达盒具有蛋白展示功能。结论:成功构建含双基因表达盒的新型基因疫苗真核表达载体pVAX2,为多价DNA疫苗的研究奠定了坚实基础。; 杜寿文李昌王宇航任大勇刘存霞孙丹丹朱娜李沂秦艳青金宁一; 关键词：EGFP

新型三基因表达盒痘苗病毒转移载体的构建及评价: 引言/目的痘苗病毒天坛株自身具有广阔的克隆空间、广泛的宿主和细胞范围、可形成稳定的重组体等作为载体的优越性,还具有相对毒力较弱、比较安全等特点,因此广泛用于生物医药研究与开发。本研究本着提升临床应用安全性、外源基因高效表...; 杜寿文李昌王宇航刘存霞任大勇孙丹丹朱娜李沂秦艳青金宁一; 文献传递

HIV-1 B亚型假病毒的制备与鉴定被引量：1: 2014年; 目的制备携带增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因和ENV包膜蛋白的HIV-1 B亚型假病毒用于感染研究,并建立可行的鉴定方法。方法双质粒共转染HEK293T细胞后收获病毒上清,TRIzol法提取病毒基因组并采用RT-PCR进行报告基因扩增,Western印迹和ELISA法检测病毒P24抗原。假病毒感染HIV-1允许细胞,进行报告基因检测、病毒滴度测定以及单轮感染活性实验研究。结果与结论建立了HIV-1假病毒制备与鉴定方法,制备获得了B型HIV-1假病毒,经鉴定具备感染SupT1和TZM-bl细胞能力,为HIV-1与宿主细胞相互作用研究奠定了基础。; 王茂鹏李昌杜寿文朱羿龙朱娜孙丹丹金宁一; 关键词：HIV-1

新型三基因表达盒痘苗病毒转移载体的构建及评价: 痘苗病毒广泛用于外源基因表达和基因工程重组病毒疫苗的研发，因此一种高重组率、高效表达、遗传稳定性优良的痘苗病毒转移载体非常重要。本研究为疫苗研制和基因治疗提供了有效的载体pSTKE，运用该载体制备的重组病毒可同时高效表达...; 杜寿文金宁一李昌王宇航刘存霞任大勇孙丹丹朱娜李沂秦艳青; 关键词：痘苗病毒穿梭载体基因转移

IFITM3基因的克隆及其在真核细胞中的表达与定位研究被引量：1: 2012年; 目的:干扰素rhIFN-α2B体外诱导人胚胎肾细胞系293T细胞获得IFITM3基因,观察IFITM3基因在293T细胞中的表达与定位。方法:利用干扰素rhIFN-α2B体外诱导293T细胞获得IFITM3基因,采用RT-PCR技术扩增获得干扰素诱导的跨膜蛋白IFITM3全长cDNA,扩增产物连接至pMD18-T载体上,测序正确后,将IFITM3基因亚克隆至真核表达载体pVAX1中获得重组质粒pV-IFITM3,通过转染293T细胞进行表达与定位研究。结果:RT-PCR和Western blot结果表明,获得的目的基因IFITM3能够表达,且具有良好抗原活性;激光共聚焦显微镜观察显示,IFITM3基因表达后主要分布于细胞膜上。结论:成功获得IFITM3基因,并验证了其表达。该研究为基于IFITM3的抗病毒药物以及探讨其抗病毒机制研究奠定了坚实基础。; 朱娜李昌郭焱李沂孙丹丹任静强杜寿文秦艳青王茂鹏田宇飞金宁一; 关键词：克隆

中国鸡痘病毒282E4弱毒株全基因组序列及其应用: 本发明首次提供了中国鸡痘病毒282E4弱毒株全基因组序列，其全基因组序列如SEQ IDNo.1所示。所述序列可用于鸡痘病毒功能基因组学、新型病毒载体构建、鸡痘病毒预防性疫苗等研究。该序列为进一步明晰我国鸡痘病毒282E4...; 金宁一李昌刘存霞李霄杜寿文王茂鹏朱娜孙丹丹秦艳青李沂鲁会军田明尧金扩世; 文献传递

HIV-1包膜蛋白ENV慢病毒载体的构建及表达被引量：4: 2012年; 目的:构建表达HIV-1包膜蛋白ENV的慢病毒载体,感染人胚肾细胞HEK293T,观察env基因在HEK293T中的表达。方法:通过点突变获得HIV-1 env完整基因,将env基因亚克隆至慢病毒穿梭载体pLVX-IRES-ZsGreen1的EcoRⅠ、XhoⅠ位点,构建重组质粒pLV-env,采用脂质体转染法转染HEK293T,经RT-PCR、Western blot检测目的基因表达,同时利用激光共聚焦技术对env基因的表达进行了定位。结果:成功获得了HIV-1 env基因,构建了重组慢病毒质粒pLV-env,RT-PCR、Western blot检测均表明外源基因能够表达,并具有抗原性,同时env基因表达后可以分泌到细胞膜表面膜上。结论:成功构建了含有HIV-1包膜蛋白env基因的重组慢病毒质粒,并验证了其表达,为下一步慢病毒的包装以及细胞模型和动物模型的构建奠定了基础。; 孙丹丹李昌李太元朱娜杜寿文任大勇刘存霞秦艳青李沂金宁一; 关键词：ENV HIV-1 慢病毒载体真核表达

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朱娜