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杜寿文: 作品数：72 被引量：75H指数：4; 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金国家重点实验室开放基金更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>

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人树突状细胞分离与鉴定最新研究进展被引量：3: 2013年; 树突状细胞（dendriticcell，DC）是最重要的抗原提呈细胞．在许多疾病过程中发挥免疫调节作用。DC的发现者Steinman对它在获得性免疫中的作用进行了深入研究。Beutler深人探讨了DC在固有免疫中的作用．2011年他们以此获得诺贝尔生理或医学奖，充分表明DC在免疫学领域的重大意义。; 王茂鹏杜寿文李昌金宁一; 关键词：树突状细胞细胞分离诺贝尔生理或医学奖抗原提呈细胞获得性免疫疾病过程

新型双基因表达盒真核载体的构建及功能验证被引量：1: 2011年; 目的:构建含双基因表达盒的新型基因疫苗真核表达载体pVAX2,并对其功能进行验证。方法:设计一个包含人巨细胞病毒启动子(CMVpromoter)、T7启动子、信号肽基因、血凝素A表位基因(HA)、多克隆位点区域(MCS)、c-myc抗原表位、血小板来源的生长因子受体跨膜区域(PDGFR TM)及牛生长激素多腺苷酸化信号(BGHpolyA)等八种元素的表达盒Ⅱ(Expressing cassetteⅡ),在其上下游添加NruⅠ酶切位点后,进行人工化学合成,连接到克隆载体pGH中得pGH-Ⅱ;用NruⅠ酶切pGH-Ⅱ,回收1 300bp左右的片段,去磷后插入到pVAX1的相应位点,NruⅠ及BglⅡ/PstⅠ酶切鉴定,获得新型基因疫苗真核表达载体pVAX2;然后以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,将其分别构建至两个不同的表达盒内,脂质体转染BHK-21细胞,利用RT-PCR及荧光显微镜技术进行该载体的功能验证。结果:两个表达盒内的EGFP基因在BHK-21细胞均能高效表达,相互间不受影响,且新构建的表达盒具有蛋白展示功能。结论:成功构建含双基因表达盒的新型基因疫苗真核表达载体pVAX2,为多价DNA疫苗的研究奠定了坚实基础。; 杜寿文李昌王宇航任大勇刘存霞孙丹丹朱娜李沂秦艳青金宁一; 关键词：EGFP

表达基因Ⅶ型新城疫病毒F蛋白的重组鸡痘病毒的构建和筛选被引量：1: 2015年; 为了构建并筛选表达新城疫病毒(NDV)F蛋白的重组鸡痘病毒(rFPV-F),通过PCR扩增F基因,克隆至pMD18-T Simple载体,进行DNA序列分析和遗传进化关系分析。将测序正确的F基因克隆至笔者所在实验室自行构建的新型鸡痘病毒穿梭载体pTS2GFPV150中,获得重组质粒pTS2GFPV150-F。然后将其与鸡痘病毒FPV282E4株共转染鸡胚成纤维细胞进行同源重组,挑取表达增强型绿色荧光蛋白的噬斑,经多轮筛选获得重组病毒rFPV-F,应用PCR、RT-PCR、Western-blot等方法对重组鸡痘病毒进行鉴定。结果显示,成功获得NDV F基因及重组F基因的鸡痘病毒rFPV-F,并证实F基因已被整合到鸡痘病毒基因组中,且在感染细胞内被成功表达。本研究成功获得了1株表达NDV F基因的重组鸡痘病毒,为下一步开展动物体内免疫研究奠定了基础。; 辛舒田明尧曹佳媛薛斐杜寿文谭鹏肖朋朋陈兴郭海宁金宁一; 关键词：新城疫病毒 F蛋白同源重组

缺失E3L基因减毒天坛株痘苗病毒的构建及筛选被引量：4: 2011年; 通过在E3L同源重组臂中插入含有增强型痘苗病毒早晚期启动子(pE/L)、增强型绿色荧光蛋白基因和同向Loxp(Locus of X-over P1)序列的表达盒构建穿梭质粒pTE-EGFP。利用pTE-EGFP和野生型天坛株痘苗病毒共转染仓鼠肾细胞(BHK-21),通过对绿色荧光蚀斑的10次筛选,构建缺失E3L基因并含有EGFP基因的重组痘苗病毒rTTVV-TE--EGFP+。利用rTTVV-TE--EGFP+和含有Cre(Cyclization recombination)重组酶基因的重组质粒pVAX1-Cre共转染BHK-21细胞,通过对无荧光蚀斑的10次筛选,构建无筛选标记的天坛株痘苗病毒减毒株rTTVV-TE--,并利用聚合酶链式反应(PCR)对其进行鉴定。鉴定结果显示,rTTVV-TE--中无E3L基因转录和EGFP基因表达。以上结果说明,所构建的痘苗病毒减毒株rTTVV-TE--完全缺失了E3L基因和外源筛选标记EGFP基因,且具有良好的遗传稳定性。; 王宇航李霄王浩然阚式绂王卓越齐延新吴娜杜寿文金宁一; 关键词：病毒载体

基于Tet-On 3G的诱导表达IFITM3细胞株的建立及其功能分析: 引言干扰素诱导跨膜蛋白(IFITMs)属于宿主限制因子的一种,可对大多数囊膜病毒及极少部分无囊膜病毒复制有抑制作用。IFITM3作为其家族成员之一,因具有广泛的抗病毒谱而被广泛的研究。本实验利用Tet-On 3G系统构建...; 曹婷婷杜寿文许汪尹逊哲李昌金宁一; 文献传递

新型三基因表达盒痘苗病毒转移载体的构建及评价: 引言/目的痘苗病毒天坛株自身具有广阔的克隆空间、广泛的宿主和细胞范围、可形成稳定的重组体等作为载体的优越性,还具有相对毒力较弱、比较安全等特点,因此广泛用于生物医药研究与开发。本研究本着提升临床应用安全性、外源基因高效表...; 杜寿文李昌王宇航刘存霞任大勇孙丹丹朱娜李沂秦艳青金宁一; 文献传递

反转录病毒载体介导的EGFP基因在SP2/0小鼠骨髓瘤细胞中的表达被引量：1: 2011年; 为了构建携带报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的反转录病毒载体,并观察EGFP基因在SP2/0小鼠骨髓瘤细胞中的表达情况。试验将增强型绿色免疫荧光基因片段定向插入反转录病毒载体pFB-neo,获得重组反转录病毒质粒pFB-NE,利用三质粒共转染系统,将含有目的基因的重组反转录病毒质粒pFB-NE以及含有辅助病毒gag-pol和env基因的质粒pVPack-GP、pVPack-10A1共转染HEK-293细胞,用产生的重组反转录病毒感染小鼠骨髓瘤细胞SP2/0,并在荧光显微镜下观察EGFP基因的表达。结果表明:重组反转录病毒载体pFB-NE构建正确,重组病毒包装成功,EGFP基因在细胞中能够稳定表达。; 王婧李昌李林溪胡博丛艳昭任大勇王卓越杜寿文金宁一; 关键词：反转录病毒载体