曾琦
- 作品数：8 被引量：14H指数：3
- 供职机构：中南大学湘雅医院更多>>
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- 转化生长因子α对鼠视网膜Muller细胞谷氨酸转运体调控作用的研究被引量：4
- 2008年
- 目的 观察转化生长因子α（TGFα）对鼠视网膜Muller细胞谷氨酸转运体（GLAST）mRNA、蛋白质表达及摄取活性的调控作用。方法取出生后7～10d的新生昆明小鼠视网膜组织，体外进行Muller细胞的培养。同一原代细胞的第3～4代细胞培养后随机分为2组：①TGFα干预组：分别加入浓度为50、75、125、150ng／ml的TGFα，每种浓度3孔；②对照组：仍用含20％胎牛血清的Dulbeccon改良Eagle培养基培养。采用L-3H-谷氨酸摄取分析方法观察不同浓度TGFa对Muller细胞GLAST摄取活性的影响；逆转录聚合酶链反应方法分析MOiler细胞GLAST mRNA表达的差异；免疫组织化学染色方法检测Muller细胞GLAST蛋白质表达的变化。结果随着TGFα浓度的增加，L-3H-谷氨酸的摄取量及GLAST mRNA表达量均逐渐增加，TGFα浓度为125ng／ml时，L-3H-谷氨酸的摄取量达到最大值，为对照组的266％，同时GLAST mRNA表达量也达到最大值，为对照组的近4倍。免疫组织化学染色显示当TGFα浓度为125ng／ml时，干预组Muller细胞内的GLAST蛋白表达量明显高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0．05）。结论TGFα可通过上调GLAST mRNA和蛋白质的表达增加视网膜Muller细胞谷氨酸转运体GLAST的摄取活性。
- 曾琦夏晓波
- 关键词：MULLER细胞
- Math5调控视网膜Müller细胞向神经节细胞定向分化的研究
- 曾琦夏晓波戴敏
- 脑源性神经营养因子对鼠视网膜Müller细胞谷氨酸转运体GLAST的调控
- 夏晓波戴敏曾琦
- 体外诱导鼠视网膜Müller细胞向视网膜干细胞分化及math5基因转染的研究
- 曾琦夏晓波
- 体外诱导大鼠视网膜Müller细胞向神经节细胞定向分化的研究被引量：5
- 2010年
- 目的 研究鼠视网膜Müller细胞经体外条件培养基诱导后去分化为神经干细胞及进一步定向分化成神经节样细胞的特性.方法 实验研究.体外培养出生后7-10 d的Sprague Dawley大鼠视网膜Müller细胞,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法及免疫荧光染色法鉴定Müller细胞纯度.取培养的第3或4代Müller细胞,用含有N2、碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子的Delbeccon＇s modified Eagle＇s medium（DMEM）-F12干细胞条件培养基培养3～5 d后,再用含5%胎牛血清、脑源性神经营养因子和视黄酸的DMEM培养基诱导分化7～10 d,采用免疫荧光染色法分别鉴定去分化及再诱导分化后的细胞.结果 RT-PCR及免疫荧光染色结果显示,分离培养的视网膜Müller细胞纯度可达（95.17±2.68）%以上.干细胞条件培养基培养3～5 d后,大部分Müller细胞汇集形成细胞球,经免疫荧光染色法鉴定,显示细胞球内（95.26 ±1.35）%以上的细胞Nestin表达阳性,（90.33±4.12）%以上细胞BrdU表达阳性.将这些细胞球进一步诱导分化后,可见细胞球内细胞可向外扩展、铺开,分化出形态各异的细胞,其中约（21.14±1.49）%细胞表达神经节细胞特异性标记物Thy1.1阳性.结论 成年啮齿动物视网膜Müller细胞经体外条件培养基诱导后,可以产生具有增殖能力和分化潜能的神经干细胞,并可进一步定向分化为神经节样细胞,这为干细胞研究和视神经再生治疗等提供了新的方法和手段.
- 曾琦夏晓波
- 关键词：视网膜视网膜神经节细胞细胞分化细胞
- 脑源性神经营养因子对小鼠视网膜Müller细胞谷氨酸转运体表达的调控被引量：1
- 2010年
- 谷氨酸是视网膜主要的兴奋性神经递质,然而在病理性浓度升高时,对视网膜神经节细胞（RGC）具有兴奋毒性作用.L-谷氨酸/L-天门冬氨酸转运体（GLAST）是表达在视网膜Müller细胞上最主要的谷氨酸转运体,在维持谷氨酸平衡和保护RGC免受谷氨酸兴奋毒性作用中发挥着重要作用.
- 戴敏夏晓波曾琦
- 关键词：脑源性神经营养因子MÜLLER细胞
- 谷氨酸诱导对鼠视网膜Müller细胞谷氨酸转运体的调控被引量：3
- 2008年
- 目的研究底物谷氨酸对视网膜Müller细胞L-谷氨酸和L-天门冬氨酸转运体（GLAST）的调控作用。方法采用L^-3H-谷氨酸摄取分析方法研究底物谷氨酸诱导对GLAST活性影响。并提取细胞总蛋白，采用免疫印迹法分析视网膜Müller细胞GLAST蛋白质表达量的差异。结果在培养的鼠视网膜Müiler细胞中加入不同浓度的谷氨酸培养30min后，发现随着底物谷氨酸浓度增加（5～1000μmol／L），L^-3H-谷氨酸的摄取量增加。平均摄取量分别为（3100．7±86．8）、（3247．0±84．2）、（3840．0±118．6）、（4493．7±229．2）、（6429．0±81．5）、（6305．3±31．0）、（6346．3±36．2）cpm·mg^-1·ml^-1。当谷氨酸浓度为100μmol／L时，L^-3H-谷氨酸摄取量最大。随着谷氨酸浓度的增加，谷氨酸转运体GLAST蛋白质的表达量增加，当谷氨酸浓度为100μmol／L时，GLAST蛋白质表达量达最大。结论谷氨酸的底物诱导可增加GLAST摄取活性，且上调GLAST蛋白质的表达。
- 夏晓波周霞曾琦
- 关键词：视网膜神经胶质生物转运谷氨酸细胞
- 脂质体法和电穿孔法体外转染SD大鼠视网膜Mller细胞的比较被引量：4
- 2010年
- 目的:探讨脂质体法及电穿孔法介导增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因转染体外培养的视网膜Mller细胞的可行性和区别。方法:体外培养出生后7～10d的SD大鼠视网膜Mller细胞,免疫荧光染色法鉴定95%以上为视网膜Mller细胞。分别用阳离子脂质体Lipofectamine2000介导的脂质体转染法和电穿孔法将质粒PEGFP-N1转染视网膜Mller细胞,荧光显微镜下检测转染后1,2,3,4d的转染效率,并持续观察至转染后14d,比较两者基因表达持续时间。结果:荧光显微镜下检测转染后1d,两组均可见少量细胞表达EGFP绿色荧光蛋白。转染后2d,两者转染效率均达到最大,并且电穿孔法介导质粒PEGFP-N1转染Mller细胞效率约为31.0%±2.8%,较脂质体法转染效率(10.5%±2.4%)更高。两者比较有统计学意义(P<0.01)。随后,两者转染效率均逐渐降低。电穿孔转染后的PEGFP-N1可在视网膜Mller细胞内持续表达近14d,而脂质体转染后仅能表达约7d。结论:脂质体法和电穿孔法均适用于视网膜Mller细胞的基因转染,但电穿孔法效率更高,表达时间更长。
- 曾琦夏晓波
- 关键词：电穿孔
