徐艳玲
- 作品数：30 被引量：104H指数：6
- 供职机构：首都医科大学宣武医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 叠氮钠对SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞膜电位和胞内β-淀粉样蛋白表达的影响被引量：5
- 2002年
- 目的 观察线粒体呼吸链复合体Ⅳ抑制剂叠氮钠对SH SY5Y细胞的细胞膜电位及胞内 β 淀粉样蛋白 (Aβ)表达水平的影响 ,以探讨用叠氮钠建立模拟Alzheimer病 (AD)脑中神经细胞能量代谢障碍的细胞模型的可能性。 方法 不同浓度的叠氮钠损伤细胞后 ,用激光共聚焦显微镜观察细胞膜电位 ;用免疫细胞化学法检测细胞内 β 淀粉样蛋白前体蛋白 (APP)和Aβ的表达水平。 结果 叠氮钠在浓度 2 5～ 10 0mmol/L时 ,与细胞共孵育 4h ,可使细胞膜电位去极化程度明显增高 ,并引起胞内Aβ表达显著增高 ,但对胞内APP表达水平影响不明显。
- 朴景华李林张丽安文林徐艳玲
- 关键词：膜电位淀粉样Β蛋白神经母细胞瘤叠氮钠
- 小鼠胚胎干细胞分化扩增期连续低密度传代对原始细胞中Oct-4阳性细胞比例及神经分化能力的影响被引量：2
- 2009年
- 目的:探讨在分化扩增期采用连续低密度传代的方法是否能降低小鼠胚胎干细胞向神经细胞分化的前体细胞中Oct-4阳性细胞的比例,以及对神经分化能力的影响。方法:采用"五步法"将小鼠胚胎干细胞向神经元分化,进入扩增期后采用连续低密度传代的方法连续传10代。然后应用细胞免疫组化鉴定Oct-4阳性细胞、神经元与胶质细胞、流式细胞仪检测Oct-4阳性细胞比例、凋亡试剂盒测定细胞凋亡。结果:流式细胞仪检测出扩增期连续低密度传代得到的前体细胞中Oct-4阳性细胞的比例由16.17±4.8%降至4.33±1.63%,扩增期低密度传代细胞和正常高密度传代细胞的细胞凋亡率鉴定分别为15.16±3.64%和11.88±2.63%,步骤5诱导分化后的细胞GFAP和Tuj-1免疫组化染色呈阴性。结论:低密度传代培养可以减少分化后Oct-4阳性细胞的比例,且该比例下降不是由Oct-4阳性细胞的凋亡引起的。同时可能是因为低密度传代培养和高密度相比引起了细胞的质变、或者改变了前体细胞向神经元分化的某种微环境,导致了前体细胞不能分化为神经细胞。提示高密度培养在前体细胞向神经元分化过程中具有重要作用,高密度和低密度培养的比较,提供了研究ES细胞向神经元分化机制的新平台和研究方向。
- 王芳杜庆安朱宛宛吴迪徐艳玲关云谦张愚
- 关键词：神经分化
- 山茱萸羟甲基糠醛对冈田酸致神经细胞形态及细胞骨架损伤的保护作用被引量：3
- 2008年
- 目的观察山茱萸活性成分山茱萸羟甲基糠醛(HMF)对蛋白磷酸酶抑制剂冈田酸(OA)致神经细胞骨架系统损伤的拮抗作用。方法不同浓度的HMF与人神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞预孵育24h,弃去培养液,加100nmol/LOA损伤4h后,用MTT法测定细胞存活率,激光共聚焦显微镜观察细胞的微管、微丝结构。结果HMF(12.5～200μg/mL)与SK-N-SH神经细胞预孵育能明显拮抗OA致细胞存活率的下降,使损伤的微管、微丝结构基本恢复正常。结论HMF能够拮抗蛋白磷酸酶抑制剂致神经细胞损伤,其机制与保护细胞骨架系统有关。
- 张如意朴景华楚晋徐艳玲李林
- 关键词：羟甲基糠醛山茱萸蛋白磷酸酶冈田酸阿尔茨海默病
- 6-羟多巴诱导大鼠黑质的持续胶质细胞反应被引量：8
- 2005年
- 本研究将40μg6- 羟多巴注射到SD大鼠一侧纹状体制作Parkinson病动物模型,研究黑质反应性神经胶质增生在Par kinson病发病过程中的可能作用。筛选成功的模型大鼠,术后12周处死。应用免疫荧光双标记法检测模型大鼠黑质胶质细胞对多巴胺能神经元损伤的反应。结果显示:在注射后12周,损伤侧黑质仍然存在明显的星形胶质细胞反应和小胶质细胞激活。此外,小胶质小结和淋巴细胞浸润的存在提示在注射后12周的注射侧黑质内依然有多巴胺能神经元死亡。结论: 6 -羟多巴对大鼠黑质多巴胺能神经元的急性损伤可以通过胶质细胞反应从而对多巴胺能神经元产生长期的毒性作用。
- 徐胜利周明刘平张丽艳徐艳玲张愚陈彪
- 关键词：黑质PARKINSON病星形胶质细胞多巴胺能神经元神经胶质增生
- 免疫磁珠分选去除分化体系中鼠胚胎干细胞的方法
- 本发明公开了一种免疫磁珠分选去除分化体系中胚胎干细胞的方法，属于医学生物技术领域。本发明包括如下步骤：(1)制备单细胞悬液；(2)MACS分离纯化分化细胞：按1∶100的稀释比例加入小鼠抗小鼠SSEA-1IgM抗体，使总...
- 关云谦朱宛宛任萍王淑艳徐艳玲张愚
- 文献传递
- 老年痴呆发病机制的研究:APP17肽对β-淀粉样肽导致神经元毒性作用的影响(英文)被引量：5
- 2004年
- 背景:老年斑是老年性痴呆(Alzheimer'sDisease,AD)的主要病理特征之一,以β-淀粉样肽(β-Amyloid,Aβ)沉积为核心,Aβ的神经元毒性定位于Aβ25-35。Aβ前体蛋白(β-amyloidproteinprecursor,APP)中319-335肽段即APP17肽(APP17-merpeptide),具有神经营养和神经保护作用。目的:通过观察APP17肽对Aβ引起神经毒性作用的影响,进一步证实此肽的神经营养作用,并为阐明AD的发病机制和临床治疗提供理论依据。设计:标准对照实验研究。地点和材料:本研究的地点为首都医科大学宣武医院神经生化研究室。SY5Y细胞株由瑞典卡罗琳斯卡研究所赠送,APP17肽和Aβ25-35由本室用固相法合成,高效液相纯化。方法:固相法合成APP17肽、Aβ25-35,高效液相纯化,以人神经母细胞瘤株SY5Y为细胞模型,分为正常对照组、Aβ25-3510μmol/L损伤组和Aβ25-3510μmol/L加APP17肽10μmol/L保护组。以细胞计数、噻唑蓝代谢率、乳酸脱氢酶漏出率、细胞轴突长度、胞体面积和细胞内游离钙离子(Ca2+)浓度为观察指标。结果:与正常对照组相比,Aβ25-35损伤组轴突长度(35.74±16.25)和胞体面积(495.92±87.68)均缩小,细胞计数接种后第6天犤(8.39±1.31)×107L-1犦减少,噻唑蓝代谢率降低,乳酸脱氢酶漏出率升高,细胞内游离钙离子浓度升高。
- 王蓉张景艳姬志娟徐艳玲盛树力
- 关键词：老年痴呆APP17肽Β-淀粉样肽神经元毒性病理特征老年斑
- 免疫磁珠分选降低分化体系中胚胎干细胞的比例被引量：1
- 2009年
- 研究目的:采用免疫磁珠分选系统(magnetic activated cell sorting,MACS)分离去除小鼠胚胎干细胞(murine embryonic stem cells,mES)向神经细胞分化时培养体系中的ES细胞,即对分化细胞进行纯化,以期减少移植致瘤性。方法:诱导mES细胞向神经细胞分化,取分化第四期的细胞,胰酶消化制成单细胞悬液,用mES特异性表面抗原SSEA-1(special stage embryonic antigen-1)单抗标记,间接免疫磁珠分选系统分离去除SSEA-1阳性细胞,流式细胞仪检测分选前后细胞中mES细胞的比例,台盼蓝染色检测分选前后细胞存活率。结果:经MACS分选后的阴性细胞中的SSEA-1阳性率可以由分选前的(7.19±1.36)%下降到(1.34±0.80)%,结果具有显著性差异;分选后的细胞存活率仍为92%左右,与分选前存活率无明显变化。结论用SSEA-1作为表面标志,用MACS方法能有效地去除胚胎干细胞分化细胞中残存的胚胎干细胞,得到高纯度的分化细胞,并且细胞存活率不受影响,为下一步进行移植实验奠定基础。
- 朱宛宛杜庆安王淑艳徐艳玲关云谦张愚
- 关键词：免疫磁珠分选胚胎干细胞神经前体细胞分化
- APP17肽对Aβ导致神经元毒性作用的影响被引量：11
- 2001年
- 通过观察β 淀粉样肽 (Aβ)前体蛋白 (APP1 7)中 3 1 9 3 3 5肽段 (APP1 7肽 )对Aβ引起神经毒性作用的影响 ,进一步证实APP1 7肽的神经营养作用。用固相法合成APP1 7肽、Aβ2 5 3 5,高效液相纯化 ,以人神经母细胞瘤株SY5Y为细胞模型 ,分为正常对照组、Aβ2 5 3 51 0 μmol/L损伤组和Aβ2 5 3 51 0 μmol/L加APP1 7肽 1 0 μmol/L保护组。以细胞计数、噻唑蓝 (MTT)代谢率、LDH漏出率、细胞轴突长度、胞体面积、NT 3免疫细胞化学染色和细胞内游离钙离子(Ca2 + )浓度为观察指标。结果 :与正常对照组相比 ,Aβ2 5 3 5损伤组轴突长度和胞体面积均缩小 ,细胞计数减少 ,MTT代谢率降低 ,LDH漏出率升高 ,细胞内Ca2 + 浓度升高 ,而加入APP1 7肽保护后 ,可使上述指标恢复或接近正常。提示 :APP1 7肽具有神经营养和神经保护作用 ,可减轻Aβ引起的神经元损伤。
- 王蓉张景艳姬志娟徐艳玲盛树力
- 关键词：APP17肽AΒ25-35Β-淀粉样肽神经营养作用神经元毒性前体蛋白
- 不同滋养层对维持人胚胎干细胞的生长作用被引量：1
- 2009年
- 目的比较不同滋养层对保持连续传代培养的人胚胎干细胞(hESC)不分化和高增殖能力作用的差异。方法分别用小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)、人包皮成纤维细胞(hFF)、人骨髓间充质细胞(hMSC)作为滋养层培养hESC系H9细胞,采用碱性磷酸酶染色和台盼蓝染色观察不同滋养层支持的hESC的碱性磷酸酶阳性克隆数、细胞产量和细胞存活率,并采用免疫荧光染色对传代5代以后的hESC进行生物学鉴定。结果3种滋养层细胞均可维持hESC呈克隆样生长,但是不同滋养层支持的克隆的形态差异大。3种滋养层细胞支持的hESC的大鼠抗阶段特异性胚胎抗原-3及碱性磷酸酶染色均呈阳性。MEF支持的hESC的碱性磷酸酶阳性克隆数、细胞产量和细胞存活率均显著高于人来源滋养层(均P<0.01)。hMSC支持的hESC的碱性磷酸酶阳性克隆数、细胞产量均显著高于hFF的hESC(均P<0.01)。结论3种滋养层细胞均可支持hESC的正常生长。MEF最有利于hESC的增殖,但是两种人来源滋养层细胞为去除动物源性的hESC培养体系奠定了基础。在维持hESC增殖方面,hMSC优于hFF。
- 朱宛宛李宁王芳付琳琳徐艳玲关云谦张愚
- 关键词：人胚胎干细胞滋养层包皮成纤维细胞骨髓间充质干细胞
- OTX1基因慢病毒载体的构建及过表达研究被引量：1
- 2007年
- OTX1基因是神经发育调控中关键转录因子之一。实验构建表达OTX1基因慢病毒载体,探讨慢病毒介导OTX1基因体外过表达的可行性。将OTX1基因克隆到慢病毒穿梭质粒DUET101内,构建表达OTX1以及GFP-OTX1基因的慢病毒载体;将pDUET-OTX1、pDUET-GFP-OTX1及pDUET101(空载体对照)质粒分别与慢病毒包装质粒pCMVΔR8.91、pMD.G共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带OTX1基因、GFP-OTX1基因的重组慢病毒DUET-OTX1、DUET-GFP-OTX1以及仅携带GFP基因的DUET-GFP;用重组慢病毒分别转导293T细胞、SY5Y细胞、小鼠胚胎干细胞及大鼠胚胎15天皮层神经干细胞,证实慢病毒载体能够将外源基因转导入不同细胞,且转导的OTX1或GFP-OTX1在不同细胞中均仅在细胞核内表达;培养OTX1单克隆抗体细胞,浓缩抗体上清,通过Westernblot以及细胞免疫荧光法证实慢病毒介导的OTX1基因及GFP-OTX1基因转导入293T细胞后的过表达。证实了慢病毒载体是高效的基因转移载体;OTX1作为发育过程中至关重要的转录因子,经过重组慢病毒体外转导后均只在细胞核内表达。
- 任萍王淑艳关云谦徐艳玲张愚
- 关键词：慢病毒基因表达
