周莹
- 作品数：10 被引量：12H指数：2
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- 肠出血型大肠埃希菌O157∶H7 EspF蛋白诱导细胞凋亡的研究
- 周莹王春晖张其威万成松
- 肠出血性大肠埃希菌O157∶H7 espF基因缺陷突变株的构建及其特性初步研究被引量：1
- 2010年
- 目的为研究肠出血性大肠埃希菌O157∶H7效应分子EspF功能,构建EHECO157∶H7espF基因缺陷突变株,并对其生物学特性进行初步研究。方法采用OL-PCR和自杀性质粒pCVD442介导的同源重组方法构建中间缺失162bp的espF基因缺陷突变株,并比较突变株与野生株对结肠癌细胞Lovo的黏附性。结果 PCR及序列分析证实,缺陷突变株的espF基因缺失了162bp碱基,野生株对Lovo细胞的黏附率明显高于突变株(P<0.001)。结论成功构建EHECO157∶H7espF基因缺陷突变株,突变株黏附Lovo细胞能力减弱,表明EspF促进细菌的粘附,为进一步研究其在EHECO157∶H7的A/E损伤中的作用奠定基础。
- 杨瑜王春晖周莹万成松
- 关键词：同源重组
- 大肠杆菌0157(:)H7EspF蛋白诱导细胞凋亡的研究
- 本文采用重叠延伸PCR技术将EHEC 0157：H7毒力岛LEE上的espF基因N端核苷酸序列缺失，克隆到自杀质粒pCVD442，通过转化、转移、同源重组、抗性筛选、PCR和测序鉴定，构建EHEC 0157：H7 esp...
- 周莹王春晖张其威万成松
- 关键词：大肠杆菌蛋白表达细胞凋亡基因缺失
- 文献传递
- A型肉毒梭菌atx基因TaqMan探针荧光定量PCR检测被引量：2
- 2012年
- 目的采用TaqMan探针荧光定量PCR方法对A型肉毒梭菌atx基因进行检测。方法以atx基因为靶基因,设计引物和TaqMan探针,优化反应条件,制作定量标准曲线,进行灵敏度、特异性和重复性验证,建立A型肉毒梭菌TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果构建质粒pUC57-△atx,标准曲线在103～107拷贝数之间有较好的线性关系,相关系数为0.997,灵敏度达到22个拷贝数,比普通PCR提高约100倍;能选择性检测A型肉毒梭菌,与其他5种食源性病原菌无交叉反应,结果与普通PCR一致;重复性试验表明,同一浓度的15个平行样品的变异系数为1.0%。结论 A型肉毒梭菌TaqMan探针荧光定量PCR方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好等特点,可以快速、准确、定量地检测A型肉毒梭菌。
- 王春晖赵素慧韦耀周莹万成松
- 关键词：肉毒梭菌TAQMAN探针荧光定量PCR
- 肠出血型大肠埃希菌O157:H7 EspF蛋白多克隆抗体的制备和初步纯化
- 2012年
- 目的制备肠出血型大肠埃希菌(EHEC)O157:H7EspF蛋白多克隆抗体并初步纯化。方法生物信息学方法分析EHECO157:H7EspF蛋白的柔韧性、亲水性、表面可能性及抗原表位,选取1条由15个氨基酸残基组成的多肽为半抗原,在其C端偶联钥孔血蓝蛋白(KLH),免疫新西兰大白兔制备抗血清。ELISA测定抗血清效价,免疫印迹法鉴定其特异性,辛酸-硫酸铵法初步纯化抗血清,SDS-PAGE检测抗体纯度。结果选择EspF蛋白抗原指数最高的肽段72-TPSRPAPPPPTSGQA-86(0.506)为半抗原,合成抗原多肽经高效液相色谱鉴定,纯度为95.78%,经质谱分析其分子量为1563.76Mr,与目的多肽分子量一致;加强免疫3次后,EHECO157:H7EspF蛋白的抗血清效价达1:2048000;该血清对EHECO157:H7野生株和espF突变株(△espF)的EspF蛋白均有特异性,并经辛酸-硫酸铵法获得一定纯度的抗体。结论成功地制备了效价高、特异性强的EHECO157:H7EspF蛋白多克隆抗体。
- 周莹赵素慧韦耀王春晖张其威万成松
- 关键词：O157:H7多克隆抗体
- 影像组学在预测肝癌部分肝切除术后病人预后中的应用研究
- 目的：探讨基于增强CT的影像组学标签在预测肝癌部分肝切除术后早期复发（≤1年）与无复发生存时间(DFS)中的价值，来帮助临床医生在术前或术后筛选出具有高复发风险的病人，从而制定个体化的治疗与随访方案，改善患者预后，达到精...
- 周莹
- 关键词：肝细胞癌部分肝切除术预后评估
- 大肠杆菌O157∶H7EspF蛋白与线粒体结合并诱导细胞凋亡的研究
- 周莹王春晖李凌万成松
- TaqMan探针实时荧光定量PCR快速检测土拉弗朗西斯菌被引量：3
- 2012年
- 目的建立TaqMan探针实时荧光定量PCR方法(QF-PCR),快速检测土拉弗朗西斯菌。方法针对土拉弗朗西斯菌的外膜蛋白fopA基因,利用Primer 5.0设计引物及TaqMan探针,人工合成fopA基因保守片段,克隆到载体作为阳性标准品,进行荧光定量检测,制作定量标准曲线,并以合成fopA基因为模板,PF、PR为引物,研究其灵敏度、特异性和准确性。结果构建了含fopA基因的重组质粒,以不同浓度的重组质粒制作标准曲线,在103～107拷贝数之间有较好的线性关系。灵敏度试验表明,该方法可检测到30.6个拷贝数的重组质粒,比普通PCR灵敏度高;特异性试验表明,能选择性检测土拉弗朗西斯菌,而与其他病原菌无交叉反应,与普通菌落PCR结果一致;重复性试验表明,拷贝数为3.06×106样品5次平行试验,标准差为0.201,变异系数为0.88%。结论本研究建立了TaqMan探针QF-PCR快速检测技术,具有灵敏度高、特异性强、重复性好等特点,可用于快速、实时、定量检测土拉弗朗西斯菌,为快速检测生物战剂级微生物建立了一种人工合成特异基因TaqMan探针实时荧光定量PCR新方法。
- 赵素慧王春晖周莹韦耀韩桂圆钮红岺赵卫张其威万成松
- 关键词：土拉弗朗西斯菌TAQMAN探针荧光定量PCR
- 肠出血型大肠埃希菌O157:H7 EspF蛋白靶向结合线粒体并诱导细胞凋亡的研究
- 一、研究背景和目的
肠出血型大肠埃希菌/[/(Enterohemorrhagic Escherichia coli, EHEC/)0157：H7是一种食源性人畜共患肠道病原微生物,可引起人和动物严重的腹泻、出血性...
- 周莹
- 关键词：线粒体
- 文献传递
- 鼠疫耶尔森菌TaqMan探针实时荧光定量PCR快速检测被引量：5
- 2012年
- 目的建立一种快速检测鼠疫耶尔森菌的方法。方法以编码F1抗原的基因caf1为靶序列,人工合成基因序列,制备重组质粒作为鼠疫耶尔森菌检测的标准样品;用实时荧光定量聚合酶链反应(fluorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)技术,针对pMT1质粒上的caf1基因设计引物和TaqMan荧光探针,进行实时FQ-PCR检验,评价该方法的准确性、敏感性及特异性。建立鼠疫耶尔森菌TaqMan探针实时FQ-PCR检测方法。结果本研究成功构建了质粒pUC57-caf1,引物、探针特异性良好,标准曲线在5.03×102～5.03×107拷贝数之间,具有较好的线性关系,相关系数1.0。实时FQ-PCR检验最低可检测出5.03×102拷贝数的重组质粒,灵敏度比普通PCR高100倍。特异性检测试验可选择性检测出鼠疫耶尔森菌,与其他细菌无交叉反应,结果与普通PCR一致。对同一浓度的重组质粒进行15个平行样品的重复性试验,Ct值标准差为0.28。结论建立TaqMan探针实时FQ-PCR检测技术,能够快速、准确、特异的检测鼠疫耶尔森菌,为鼠疫监控、诊断提供技术支持。
- 韦耀周莹王春辉赵素慧张其威万成松
- 关键词：耶尔森菌鼠疫
