劳妙芬
- 作品数：17 被引量：102H指数：6
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 贮存温度对携带HGF基因的重组腺病毒Ad-HGF稳定性的影响被引量：1
- 2004年
- 目的 :探讨不同温度对重组腺病毒Ad_HGF保存时间的影响。方法 :以含 10 %甘油的Hanks液保存Ad_HGF(携带人肝细胞生长因子基因 )、Ad_GFP(携带绿色荧光蛋白基因 ) ,用快速细胞病变 (CPE)法、ELISA方法、流式细胞仪分别检测在不同贮存温度 (- 6 0℃ ,- 2 0℃ ,4℃ ,2 5℃和 37℃ )、不同保存时间的重组腺病毒对其感染滴度、目的基因表达和转染细胞效率的影响。结果 :- 6 0℃保存最长时间 4 4个月 ,其转染效率、HGF蛋白表达、病毒滴度未见明显下降 ;- 2 0℃保存 12个月各指标未见明显变化 ;4℃冰箱保存 2个月 ,其各项指标已有所下降 ,但不是很明显 ,而保存 7个月时 ,其转染效率、HGF蛋白表达量及病毒滴度均明显下降 ;2 5℃和 37℃保存 ,除病毒滴度外 ,其余指标呈逐日下降趋势。结论 :该病毒保存于 - 2 0℃以下性能是稳定的 ,可以满足临床贮存和应用条件。
- 哈小琴王澜劳妙芬吴祖泽
- 关键词：重组腺病毒肝细胞生长因子稳定性
- 比格犬注射重组腺病毒Ad-HGF后血清中抗腺病毒抗体及中和抗体的检测
- 2007年
- 目的:观察Beagle犬重复给予Ad-HGF后血清中抗腺病毒抗体及抗肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)抗体的出现时间及消失规律.方法:将24只比格犬随机分为四组:正常对照组、手术对照组、Ad-HGF小剂量组(2.4×107pfu/kg)和Ad-HGF大剂量组(2.4×108pfu/kg).Ad-HGF各组犬给予不同剂量Ad-HGF共14次.在给药2次后分别利用病毒中和反应和ELISA方法检测血清中抗腺病毒抗体和抗HGF抗体.结果:手术组、正常对照组及实验组动物于给药前及给药3次时血清细胞均未出现明显中和反应.给药4次后各剂量组动物血清均对腺病毒有不同程度中和作用,至停药后12wk抗体水平很低或已不存在.各时间点血清样品中未检测到抗HGF抗体.结论:犬肌注Ad-HGF4次后动物血清中检测到了抗腺病毒抗体,停药4wk后抗体水平有不同程度下降,直至12wk后血清中腺病毒抗体基本消失.
- 哈小琴赵治华吕同德劳妙芬吴丹莉吴祖泽
- 关键词：AD-HGF中和抗体血清
- 重组腺病毒Ad-HGF体外感染成纤维细胞后转染效率及表达的检测被引量：2
- 2004年
- 押检测携带人肝细胞生长因子基因的重组腺病毒Ad-HGF在体外对成纤维细胞的感染效率以及感染细胞对目的蛋白的表达。以不同感染复数(m.o.i.)(25,50,100,200)的Ad-GFP感染NIH3T3细胞,48h时用流式细胞仪检测转染效率;以50m.o.i.感染NIH3T3细胞后48h,用ELISA和Western印迹杂交法分别检测感染上清中HGF的表达。分别以50m.o.i.的Ad-GFP和Ad-HGF感染原代培养人瘢痕成纤维细胞,以检测重组腺病毒对原代培养人瘢痕成纤维细胞的转染效率和其对HGF的表达。结果表明,当m.o.i.为50时,重组腺病毒对NIH3T3细胞的转染效率已达95%以上;HGF的表达量可达每2×106细胞249ng;并可检测到HGF蛋白的一特异杂交带。以50m.o.i.的Ad-GFP感染原代培养人瘢痕成纤维细胞,72h时GFP表达达高峰,此时转染效率可高达36.75%。Ad-HGF感染原代培养人瘢痕成纤维细胞后HGF的表达在72h时达高峰,表达量可达每3.3×105细胞66ng。初步认为重组腺病毒可有效地介导HGF基因转染正常或瘢痕成纤维细胞,且感染细胞可有效表达目的蛋白。
- 哈小琴王澜劳妙芬吴祖泽
- 关键词：腺病毒转染成纤维细胞肝细胞生长因子
- 重组腺病毒介导人野生型p53和B7-1基因诱导喉癌细胞凋亡并增强其免疫原性被引量：3
- 2002年
- 为开展喉癌的复合基因治疗,观察共表达人野生型p53和B7-1基因的重组腺病毒Ad-p53/B7-1对喉癌细胞增殖及免疫原性的影响。检测到Ad-p53/B7-1介导的人野生型p53基因可抑制喉癌细胞增殖并诱导其凋亡,同时B7-1基因的导入可增强喉癌细胞的免疫原性基因修饰的癌细胞可刺激自体肿瘤浸润淋巴细胞增殖,并诱导外周血淋巴细胞形成对肿瘤具有特异杀伤性的细胞毒性T淋巴细胞。
- 邱兆华潘鲁浙劳妙芬吴祖泽
- 关键词：重组腺病毒喉癌免疫原性
- 重组腺病毒介导人野生型p53和B7-1基因在喉癌细胞中的高效转移和高水平表达(英文)被引量：3
- 2002年
- 为开展肿瘤的复合基因治疗,构建以串联方式携带人野生型p53和B7-1基因的重组腺病毒穿梭质粒pXC53/B7-1。将pXC53/B7-1与腺病毒包装质粒GT4050共转染293细胞,通过细胞内同源重组获得重组腺病毒Ad-p53/B7-1。在293细胞中扩增病毒,并通过氯化铯密度梯度超速离心纯化病毒,获得高滴度和高纯度的病毒。分别经免疫组织化学分析和流式细胞分析检测Ad-p53/B7-1介导的人野生型p53和B7-1基因在喉癌细胞Hep-2中的表达。结果表明Ad-p53/B7-1能够有效地将其所携带的目的基因导入Hep-2细胞并使其在细胞中高效表达。
- 邱兆华王艳飞潘鲁浙劳妙芬吴祖泽
- 关键词：重组腺病毒抑癌基因P53喉癌细胞基因转移
- 重组腺病毒介导人肝细胞生长因子在病理性瘢痕基因治疗研究中的应用被引量：9
- 2003年
- 采用细胞内质粒DNA同源重组方法,将人肝细胞生长因子基因构建于E1,E3区缺失的复制缺陷型5型腺病毒载体上,获得携带人肝细胞生长因子基因(HGF)的重组腺病毒Ad—HGF.在293细胞中扩增后用氯化铯密度梯度离心法扩增制备Ad—HGF和Ad—GFP(携带绿色荧光蛋白报告基因的重组腺病毒),然后,用Ad—GFP和Ad—HGF体外分别转染原代培养的兔耳瘢痕成纤维细胞,观察体外转染效率及表达,并以新西兰兔耳瘢痕为体内模型,观察局部瘢痕组织中一次性注射Ad—HGF后对已形成瘢痕的治疗作用.结果显示:(i)Ad—GFP感染原代培养兔瘢痕成纤维细胞后,3 d时转染效率为(36.8±14.1)％,并持续表达20 d以上.(ii)用ELISA方法检测Ad—HGF感染原代培养兔瘢痕成纤维细胞后HGF的表达,结果感染后3 d表达量约为76 ng/4.0×105细胞.(iii)用兔耳瘢痕模型观察在瘢痕内注射不同剂量(8.6×109,8.6×108,8.6×107,8.6×106pfu)的Ad—HGF,于注射后第32天肉眼可见Ad—HGF治疗组瘢痕较治疗前明显缩小、变薄,甚至与周围皮肤在同一水平.这一效应呈剂量依赖性:大、中剂量组(8.6×109,8.6×108pfu)治疗前后瘢痕肥大指数的减少有统计学意义(P<0.05),尚可见不同程度再生的丛状新生毛,低剂量组(8.6×107,8.6×106pfu)治疗后瘢痕肥大指数有减小但无统计学意义。
- 哈小琴苑宾李元敏劳妙芬吴祖泽
- 关键词：病理性瘢痕创伤修复整形外科
- 携带肝细胞生长因子基因的重组腺病毒对犬心肌缺血的基因治疗被引量：6
- 2004年
- 为了进一步研究重组腺病毒Ad-HGF对心肌缺血的治疗效果及其安全性,在体外实验和大鼠实验的基础上制作了犬心肌缺血的模型,从3个方面评价Ad-HGF对心肌缺血的治疗效果.首先,通过冠状动脉造影观察侧支循环形成的情况,发现治疗组动物的侧支循环比对照组丰富;然后,对心脏切片进行TTC染色,并通过图像分析确定缺血区面积,结果显示治疗组动物的缺血区明显小于对照组;最后,从心肌中回收彩色微球计算局部心肌血流量,结果显示治疗组动物的局部心肌血流量基本恢复到了结扎前的水平.另外,在长期毒性研究中,用中和方法检测了腺病毒抗体产生的情况,发现腺病毒抗体在第4次注射后产生,达到高峰后缓慢下降,于停药12周后消失.总之,Ad-HGF对心肌缺血的治疗是有效的,同时也会诱导机体产生抗体中和体内的腺病毒,这可能是腺病毒载体的清除机制.
- 吴丹莉张友荣劳妙芬袁丽珍王澜哈小琴吴祖泽
- 关键词：肝细胞生长因子心肌缺血基因治疗重组腺病毒中和性抗体
- 人胎肝抑瘤物体外净化自体骨髓治疗急性白血病13例报告被引量：2
- 1994年
- 用人类胎肝低分子天然抑瘤物（ＬＭＷ－ＮＴＳ）对１３例缓解期（ＣＲ）急性白血病休外净化后自体骨髓移植（ＡＢＭＴ），其中ＡＬＬ４例（ＣＲ１３例，ＣＲ２１例），ＡＮＬＬ９例（ＣＲ１７例，ＣＲ２２例）。１２例获造血重建，１例因霉菌败血症早期死亡。移植后持续缓解８例，缓解时间＞１２个月７例，＞６个月１例。４例移植后３月～６月复发。木文对该净化方法及ＡＢＭＴ近期疗效进行讨论。
- 朱军姚善谦刘海川王连元楼方定阎影周绮刘景汉王小沛裴雪涛吴祖泽劳妙芬徐黎
- 关键词：自体骨髓移植白血病体外净化
- 重组质粒pUDKH的质量分析被引量：2
- 2006年
- 目的:分析研究pUDKH的质量。pUDKH是由本实验室构建的携带人肝细胞生长因子(HGF)基因的真核表达质粒,具有治疗肢体动脉闭塞病的应用潜能。方法:用光密度法分析pUDKH的浓度及纯度;用0.8%琼脂糖凝胶电泳分析超螺旋pUDKH比例及RNA;以地高辛标记的核酸探针固相斑点杂交法测定残留宿主DNA含量;用酶联免疫法测定残留宿主菌蛋白;以4组限制性内切酶分析一致性;PCR扩增目的基因片段;抑菌圈测定板测定残余抗生素;用鲎试剂检测细菌内毒素;对CHO细胞进行基因转染;ELISA检测上清HGF表达量;用Transwells法分析表达的上清液诱导ECV304细胞迁移数。结果:03批次pUDKH的浓度为1.97mg/mL,D260nm/D280nm值为1.84,超螺旋pUDKH比例为95.5%;电泳图谱中未见RNA;残留宿主DNA含量低于质粒DNA的0.2%;菌体蛋白质残留含量低于质粒DNA的0.1%;限制性酶切图谱与自行制备的对照品一致;PCR扩增到HGF基因片段,长约2.2kb;未见残余抗生素(卡那霉素)抑菌圈;细菌内毒素≤0.03125EU/mL;转染的CHO细胞上清HGF表达量为39.32ng/mL;表达的上清诱导ECV304细胞迁移数高于对照组2倍。结论:03批次pUDKH的质量符合药学规格。
- 张庆林肖凤君毕建进刘红军段海峰劳妙芬吴祖泽
- 关键词：重组质粒基因治疗
- 腺病毒介导多基因在肺癌细胞中的表达及致凋亡效应被引量：12
- 1999年
- 目的:观察重组腺病毒介导入野生型p53,B7-1和GM-CSF基因在肺癌细胞中的表达及致调亡效应.方法:以复制缺陷型重组腺病毒为载体,将入野生型P53,B7-1和GM-CSF基因导入肺癌细胞,分别以免疫组织化学法、流式细胞分析法和ELJSA法检测了外源基因在肺癌细胞中的表达,通过苔盼蓝染色后计数活细胞数绘制细胞生长曲线,末端标记法检出细胞凋亡.结果:观察到重组腺病毒分导的多种外源基因均可在肺癌细胞中高效表达,并可明显抑制肺癌细胞增殖并诱导其凋亡.结论:以上工作为进一步开展肺癌的多基因治疗打下了基础.
- 邱兆华劳妙芬王艳飞吴祖泽
- 关键词：重组腺病毒肺癌基因表达
