刘扬
- 作品数：12 被引量：9H指数：1
- 供职机构：中国科学院天津工业生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市科技支撑计划中国科学院知识创新工程重要方向项目更多>>
- 相关领域：生物学化学工程经济管理农业科学更多>>
- 烯酮还原酶基因的克隆与优化表达被引量：6
- 2011年
- 烯酮/酯还原酶可以专一性地还原烯酮/酯中的碳碳双键,并引入两个手性中心,是手性化合物生物催化合成的重要酶类之一;在使用烯酮/酯还原酶进行全细胞手性分子生物催化合成中,其他还原酶的存在常导致副反应的产生.为研究烯酮/酯还原酶的理化性质、底物的专一性、产物的手性特点等,需要经过纯化的烯酮/酯还原酶.为此,根据烯酮还原酶(Enoate reductase,ERs,EC 1.3.1.31)的基因序列设计引物,以丙酮丁醇梭菌(Clostridium acetobutylicum)ATCC824基因组DNA为模板,通过PCR扩增技术得到了目标酶的基因,目的片段全长为1 995 bp,共编码664个氨基酸,相对分子质量为73×103.将烯酮还原酶基因连接到pET-32a(+)上,构建表达质粒pET-32a(+)-ERs,并成功在Escherichia coli Rosetta(DE3)pLysS中表达.在摇床上优化的表达条件为:诱导温度为18℃,诱导起始时菌体D600 nm为0.6～0.8,转速为100 r/min,诱导剂IPTG浓度为0.1 mmol/L,诱导培养时间为12 h,表达的烯酮还原酶大部分以可溶性形式存在于菌体内.
- 吕彤刘扬赵青任杰王敏吴洽庆朱敦明
- 关键词：丙酮丁醇梭菌
- 公共服务平台破解医药科技型中小企业融资困局被引量：1
- 2014年
- 我国的金融体系相对落后,融资难、融资渠道单一成了困扰企业,尤其是医药科技型中小企业发展的主要瓶颈。文章以国内外先进经验为例,阐述了公共服务平台存在的现实意义,以及搭建平台解决融资困局的理论依据与实现方式。
- 张林刘扬
- 关键词：公共服务平台
- 酸性β-甘露聚糖酶基因的克隆、表达及酶学性质分析
- 从本实验室保存的一株黑曲霉(Aspergillus sulphureus TCCC21273)中筛选克隆到一种酸性β-甘露聚糖酶编码基因man 273,并在Pichia pastoris GS115中实现了高效异源表达;...
- 刘扬张文会张会图王洪彬王海宽路福平
- 关键词：Β-甘露聚糖酶毕赤酵母黑曲霉
- 生产新型靛蓝染料谷氨酸棒杆菌及其构建方法与应用
- 本发明涉及一种构建重组谷氨酸棒杆菌生产新型靛蓝染料的方法，属于生物工程领域。通过将靛蓝合成酶基因(bpsA)及4’‑磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶基因(sfp)克隆重组，共表达至谷氨酸棒杆菌中，构建重组谷氨酸棒杆菌C.glut...
- 王猛徐捷刘扬程海娇
- 耐酸β-甘露聚糖酶编码基因的筛选及高效异源表达
- 从本实验室保存的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis TCCC11286)中筛选克隆到一种β-甘露聚糖酶编码基因man286,该基因所编码的β-甘露聚糖酶不仅具有较强的酸稳定性,而且对胰蛋白酶具有较好的抗性;...
- 刘扬孙同韦张会图王洪彬王海宽路福平
- 关键词：Β-甘露聚糖酶发酵工艺编码基因基因筛选异源表达
- 紫红红球菌9α–羟化酶loop对酶活性的影响被引量：1
- 2018年
- 3–甾酮–9α–羟化酶是转化雄甾–4–烯–3,17–二酮生成9α–羟基雄甾–4–烯–3,17–二酮的关键酶,其加氧酶组分在底物进入酶活性中心入口处,存在一个由16个氨基酸构成的柔性loop.为了明晰loop对酶活性的影响,利用定点突变技术对loop上结构变化较大的氨基酸进行研究,解析出了各氨基酸的作用,T224、N225、Y226与周围α5螺旋和β折叠存在一定相互作用,共同调节底物通道与底物运送能力;D227和D228起到支撑固定loop结构的作用,使T224–Y226能与其周围的氨基酸产生相互作用.这为进一步采用蛋白质工程改造9α–羟化酶提供了理论依据.
- 刘扬申雁冰王九彬王敏
- 关键词：LOOP定点突变
- 高通量构建与筛选信号肽库提高枯草芽孢杆菌外源蛋白的表达分泌
- 2024年
- 【目的】基于信号肽在分泌表达系统中的重要作用,利用自动化高通量设备,搭建枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)酶蛋白信号肽库的高通量自动化构建与筛选平台,探索枯草芽孢杆菌中不同信号肽对酶蛋白的表达分泌作用。【方法】首先以大肠杆菌-芽孢杆菌穿梭载体pHP13以及pMA5为骨架,将编码毒性蛋白的ccdB基因插入大肠杆菌-芽孢杆菌穿梭载体的启动子和目标基因之间,构建针对绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)以及普鲁兰酶(pullulanase,PulA)的信号肽筛选载体。以枯草芽孢杆菌168基因组为模板,扩增173条信号肽序列,基于高通量自动化设备搭建枯草芽孢杆菌外源蛋白表达及活性筛选平台,构建含有不同信号肽的外源蛋白重组菌株,筛选并考察不同信号肽对外源蛋白表达分泌的影响。【结果】RpmG、AspB、CitH、LytF和YkwD这5个信号肽具有较强的引导GFP胞外蛋白分泌能力,其中RpmG引导GFP胞外分泌能力最强,其重组菌株与对照菌株相比胞外GFP的荧光值提高了236%。针对PulA的信号肽筛选,其中41个信号肽与PulA的适配性很低,2个信号肽RpmG、AspB引导PulA胞外分泌的能力较强。含AspB信号肽的PulA重组菌株分泌率可达到74%,与对照菌株相比分泌率提高了68%;RpmG信号肽引导的PulA酶活与其他信号肽相比最高,总酶活可达116 U/mL,细胞外酶活为52 U/mL。【结论】本研究建立了枯草芽孢杆菌酶蛋白信号肽库的高通量自动化构建与筛选平台,分别获得可以提高GFP和PulA表达分泌的信号肽。该自动化平台允许大量样品的并行处理,这简化了纯手工的重复性实验工作,并且我们发现高通量实验平台不论在时间和成本方面都优于手工操作。自动化高通量平台的优势将随着样本量的增加而更加显著。综上所述,我们建立的自动化高通量筛选平台不仅可以加速外源蛋白的信号肽筛选优化过程,也为其他高�
- 李昊霓李颖于思礼涂然涂然花尔并刘扬
- 关键词：枯草芽孢杆菌信号肽
- 恩拉霉素生产菌株的遗传改造被引量：1
- 2017年
- 【目的】提高杀真菌素链霉菌发酵生产恩拉霉素的产量。【方法】利用定点突变技术,对恩拉霉素生产菌株杀真菌素链霉菌F1中影响细胞次级代谢及抗生素合成的核糖体S12蛋白的编码基因rps L进行改造,将第43位的赖氨酸(Lys)分别替换为天冬酰胺(Asn)和精氨酸(Arg),并对改造菌株L-M1(Asn43)和L-M2(Arg43)的生长特性、抗生素合成以及摇瓶发酵性能进行研究。【结果】与野生型菌株相比,改造菌株的生长特性及生理生化特性均发生了明显的改变:产孢周期明显缩短,野生型菌株在MS培养基中,28°C下需要培养5-7 d后才能产生孢子,而在相同条件下,改造菌株3 d后就能产生大量的孢子;恩拉霉素产量相对提高,摇瓶发酵条件下,改造菌株L-M1(Asn43)和L-M2(Arg43)的恩拉霉素产量分别可达到1 334 U/m L和1 456 U/m L,与野生型菌株F1相比分别提高了11.9%和22.1%。【结论】通过遗传改造,恩拉霉素的产量得到了提高,为其他位点的遗传改造提供了可行性。
- 牟慧艳刘扬王应东刘宝爱魏建军张会图
- 关键词：恩拉霉素定点突变
- 羟丙基-β-环糊精对三种微生物细胞转运特性的影响
- 环糊精在以完整微生物细胞为催化剂的疏水化合物生物催化中有着多重的复杂机制,除了增溶作用外,环糊精还会与细胞直接作用,通过改变细胞的通透性和底物／产物的转运过程影响生物催化的效率.由于环糊精超分子介质对微生物细胞的表面结构...
- 王敏栗华楠申雁冰梁静婷刘扬
- 生产新型靛蓝染料谷氨酸棒杆菌及其构建方法与应用
- 本发明涉及一种构建重组谷氨酸棒杆菌生产新型靛蓝染料的方法，属于生物工程领域。通过将靛蓝合成酶基因(bpsA)及4’‑磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶基因(sfp)克隆重组，共表达至谷氨酸棒杆菌中，构建重组谷氨酸棒杆菌C.glut...
- 王猛徐捷刘扬程海娇
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