于彬
- 作品数：15 被引量：71H指数：5
- 供职机构：上海交通大学医学院癌基因及相关基因国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项上海市国际科技合作基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肝癌DKK1基因的表达及突变分析被引量：9
- 2006年
- 目的:探讨中国地区人肝癌发生发展过程中有无DKK1基因突变。方法:Northernblot方法分析12例肝癌患者癌和癌旁肝组织DKK1mRNA表达水平。采用PCRSSCP方法,检测20例肝癌患者(包括癌和癌旁肝组织)及8种人肝癌细胞株中有无DKK1基因突变,并采用DNA测序对PCRSSCP突变分析结果加以验证。结果:Northernblot显示12例肝癌患者中7例存在癌组织DKK1mRNA高表达而癌旁肝组织微弱表达或不表达。突变检测发现20例肝癌患者及8种人肝癌细胞株中仅1例肝癌患者存在DKK1基因的同义突变(单核苷酸多态现象)。结论:DKK1在中国人肝癌中存在高表达,但未发现突变发生,提示DKK1基因参与肝癌的癌变过程可能并不依赖于该基因的突变。
- 于彬余艳军游海燕程勤姚根富舒惠群覃文新
- 慢病毒介导的双干扰RNA同时沉默IGF1R和EGFR蛋白治疗肝癌的实验研究被引量：2
- 2009年
- 目的研究双靶向IGF1R和EGFR基因的小干扰RNA(si RNA)慢病毒对肝癌细胞SMMC7721中IGF1R和EGFR表达的影响及其对细胞生长的作用。方法针对已经筛选确定的IGF1R和EGFR基因干扰有效序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与pLVTHM载体连接产生pLVTHM-IGF1R。RT-PCR合成含H1启动子EGFR-si RNA表达框,克隆入pLVTHM-IGF1R中形成pLVTHM-IGF1R-EGFR-si RNA。用pLVTHM-IGF1R-EGFR-si RNA、psPAX2和pMD2G 3质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒LVTHM-IGF1R-EGFR-si RNA,大量扩增,氯化铯梯度离心纯化,测病毒滴度。用LVTHM-IGF1R-EGFR-si RNA感染SMMC7721细胞(感染组),以未经处理的SMMC7721细胞(细胞对照组)及空载体质粒LVTHM(空载体对照组)作为对照。RT-PCR及Western blot法检测细胞中IGF1R和EGFR的表达,Cell Counting Kit-8法检测细胞生长,TUNEL法检测细胞凋亡。结果成功构建慢病毒LVTHM-IGF1R-EGFR-si RNA;病毒滴度为4.58×109pfu/ml;LVTHM-IGF1R-EGFR-si RNA明显抑制肝癌细胞中IGF1R和EGFR的mRNA和蛋白的表达,分别为细胞对照组及空载体对照组的5%、4%和4%、3%以及10%、11%和8%、9%(P<0.05),同时能抑制肝癌细胞生长(P<0.05),促进肝癌细胞凋亡(P<0.05)。结论靶向IGF1R和EGFR基因siRNA慢病毒可同时有效封闭肝癌细胞中的IGF1R及EGFR,降低肝癌细胞的增殖能力,为以IGF1R和EGFR基因为靶点的肝癌生物治疗奠定了理论基础。
- 牛坚刘斌潘晴于彬李向农
- 关键词：慢病毒肝癌
- Dickkopf(DKK1)在肝癌组织及多种人肿瘤细胞系中的表达分析被引量：17
- 2006年
- 目曲：检测dickkopf（DKK1）在肝癌组织及多种恶性肿瘤细胞系中的表达情况。方法：采用酶联免疫吸附实验、real time PCR、RT—PCR及Western blot对DKK1在肝癌组织及多种恶性肿瘤细胞系的表达情况进行检测。结果：肝癌组织检测RT—PCR，10／15肝癌中高表达；Real—time PCR方法检测，8／8肝癌中高表达；Western blot方法检测，5／8肝癌中高表达。酶联免疫吸附实验检测到DKK1在多种恶性肿瘤细胞系的细胞培养液上清液中均有表达，蛋白质表达量波动于5～210ng／mL之间；10种人恶性肿瘤细胞系在mRNA水平和蛋白质水平DKK1的表达均能检测到。结论：DKK1高表达于肝癌组织及广泛表达于多种恶性肿瘤细胞系，提示DKK1可能在肿瘤的发生、发展中起到重要作用。
- 余艳军万晓桢于彬游海燕舒惠群姚根富覃文新
- 靶向LASS2基因的小干扰RNA对人肝癌细胞侵袭能力的影响被引量：18
- 2009年
- 目的:研究靶向人源性长寿保障基因2(homosapiens longevity assurance homologue2,LASS2)的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人肝癌细胞MHCC97-L体外侵袭能力的影响。方法:通过脂质体转染将靶向LASS2的siRNA转染MHCC97-L细胞,运用实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)检测转染后LASS2mRNA的表达,筛选有效的siRNA片段;运用BCECF氢离子敏感荧光探针检测MHCC97-L细胞跨膜运输氢离子的功能;采用Western印迹法分析MHCC97-L细胞及上清液中基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase2,MMP-2)的表达情况;应用明胶酶谱法检测MHCC97-L细胞上清液中MMP-2的活性;Transwell法检测细胞体外侵袭能力。结果:筛选得到靶向LASS2的有效siRNA-1片段。MHCC97-L细胞转染LASS2siRNA-1后,其跨膜运输氢离子的能力增强,与空白对照组比差异有统计学意义(P<0.05);MMP-2蛋白的表达及分泌无明显变化,但分泌的MMP-2活性形式增加,与空白对照组和无关序列组比明显提高,差异有统计学意义(P<0.05);且细胞的体外侵袭能力明显高于无关序列组和空白对照组(P<0.05)。结论:靶向LASS2的siRNA能有效下调其表达,并能提高MHCC97-L细胞在转染LASS2siRNA后的体外侵袭能力。
- 唐宁游海燕金洁于彬覃文新
- 关键词：肝肿瘤肿瘤浸润
- 肝癌患者β-catenin基因第三外显子的体细胞突变被引量：3
- 2005年
- 目的探讨中国地区人肝癌发生发展过程中有无β-catenin基因突变。方法采用PCR-SSCP方法,设汁扩增β-catenin 基因第三外显子的引物,检测20例肝癌患者及7株人肝癌细胞中有无β-catenin基因突变,并通过DNA测序及限制性内切酶对突变加以验证。结果20例肝癌患者中有2例发生β-catenin基因突变,均为41位密码子由编码苏氨酸变成编码丙氨酸。7株人肝癌细胞均无β-catenin基因突变。结论10%(2,20)的肝癌组织样品有β-catenin基因突变。提示β-catenin基因突变可能参与了部分肝癌癌变过程,但不是中国地区肝癌发生发展过程中的主要和关键原因。
- 游海燕姚根富于彬张海涛余艳军谢丽覃文新
- 关键词：肝肿瘤Β-CATENIN单链构象多态性突变
- Dickkopf-1时间分辨免疫荧光分析方法的建立及其在肺癌诊断中的应用被引量：2
- 2008年
- 目的建立Dickkopf-1（DKK-1）时间分辨免疫荧光分析（TR—IFMA）方法，并评价其在肺癌诊断和病理分期中的价值。方法用双抗夹心原理建立DKK-1 TR—IFMA，并对其灵敏度、批内、批间差异和准确性等各项指标进行考核。同时用以测定212例肺癌、72例肺良性疾病患者和120名健康人血清DKK-1含量，以分析血清DKK-1水平与肺癌不同临床病理特性的相关性。结果DKK-1 TR-1FMA的稳定性好，线性宽，其检测灵敏度为0．08μg／L，批内和批间变异系数均〈6．5％，与商业ELISA试剂盒相关性好（r=0．972，P=0．01）。肺癌组血清DKK-1水平[31．93（79．47～18．03）μg/L]显著高于肺良性疾病组[15．25（18．41-11．49）μg/L]和正常对照组[13．90（16．91～11．02）μg／L]，但DKK—1水平与年龄、性别、肺癌病理组织类型无关，与TNM分期（r=0．37，P〈0．001）、有无淋巴结转移（r=0．52，P〈0．001）和远处转移（r=0．62，P=0．001）显著相关；血清DKK-1诊断肺癌的总敏感度为68．4％，特异度为92．2％，准确性为82．1％，阳性预测值为90．6％，阴性预测值为72．5％；血清DKK-1诊断小细胞性肺癌的敏感度和准确性稍高于非小细胞性肺癌（70．7％vs69．5％，85．6％vs80．7％）。结论DKK-1可作为一项肺癌血清学标志，适用于肺癌的辅助诊断和病理分期。TR—IFMA检测血清DKK-1方法准确可靠，且为肺癌的DKK-1定量检测提供了技术平台。
- 盛世乐王青覃文新于彬黄钢
- 关键词：肺肿瘤荧光免疫测定
- 双标记时间分辨荧光免疫分析检测AFP和AFP-IgM在HCC中的应用被引量：2
- 2009年
- 目的建立可同时测定血清甲胎蛋白（AFP）和AFP免疫复合物（AFP-IgM）的快速、灵敏检测方法，探讨其在原发性肝细胞癌（HCC）诊断中的临床价值。方法利用时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）技术，分别用Sm^3＋标记鼠抗人IgM单克隆抗体（M94181），Eu^3＋标记鼠抗人AFP单克隆抗体（M19301），建立双标记TRFIA（dual-TRFIA）。选择HCC患者118例和肝良性病变（BLD）患者123例（肝硬化60例，慢性肝炎63例），健康体格检查者286例。分别用该法检测血清AFP和AFP-IgM水平，并用受试者工作特征（ROC）曲线进行临床诊断特性分析。采用SASS 6．12软件进行统计学处理。结果dual-TRFIA法检测AFP和AFP-IgM的灵敏度分别为0．41μg／L，10．00U／L，与试剂盒[电化学发光免疫（ECLIA）AFP test和Hepa AFP-IC kit]相关性好（r=0．9987和0．9854，P均〈0．05）。AFP和AFP-IgM在HCC中的诊断灵敏度分别为46．61％（55／118），63．56％（75／118），诊断准确性分别为77．10％和77．40％。AFP和AFP-IgM联合检测可将灵敏度提高至72．88％（86／118，χ^2=9．45，P=0．02），诊断准确性提高至84．10％（χ^2=6．24，P=0．04）。结论AFP-IgM是HCC新型血清标志物，同时检测AFP和AFP-IgM能明显提高对HCC的诊断灵敏度和准确性，有利于肝癌的早期诊断。dual-TR-IMFA法同时检测AFP和AFP-IgM稳定可靠，可以满足临床使用需要。
- 盛世乐王青黄钢于彬覃文新
- 关键词：荧光免疫测定甲胎蛋白类单克隆
- 结直肠癌组织及细胞株中分泌型卷曲相关蛋白家族的甲基化研究
- 2009年
- 目的研究分泌型卷曲相关蛋白（SFRP）基因启动子区CpG岛甲基化与结直肠癌的关系。方法采用甲基化特异性PcR（MsP）技术检测20对结直肠癌及相应癌旁组织中SFRP基因启动子区CpG岛甲基化状况，T—A克隆测序验证MSP产物。5氮杂-2＇-脱氧胞苷对结直肠癌细胞株HCT116、SW480进行去甲基化处理，MSP和Western印迹法分别检测细胞株中SFRP基因甲基化和蛋白表达。结果SFRP1、2、4、5在结直肠癌中甲基化率分别为19／20、17／20、3／20、13／20，癌旁组织中分别为12／20、8／12、1／20、7／20。结直肠癌中SFRP1、2、5甲基化率均高于癌旁组织，差异有统计学意义（P〈0．05）。HCT116细胞株SFRP1、2、4、5基因均发生甲基化，而SW480细胞株中仅SFRPI和SFRP2出现启动子甲基化。SFRP蛋白表达与启动子甲基化呈明显负相关，经5-氮杂-2＇-脱氧胞苷处理后能有效恢复SFRP蛋白表达。结论SFRP1、2、5甲基化可能与结直肠癌的发生有关，SFRP基因甲基化与其表达失活密切相关。
- 黄丹于彬覃文新黄朝晖盛伟琪彭之磊倪淑娟杜祥
- 关键词：结直肠肿瘤分泌型卷曲相关蛋白甲基化
- 肝癌细胞中WIF-1的甲基化状态分析被引量：3
- 2007年
- 目的探讨WIF-1基因在肝癌细胞中的甲基化状态及其与蛋白表达的关系,并初步研究了WIF-1与肝癌发生发展的关系。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)和测序方法分析了9种肝癌细胞系中WIF-1启动子区的甲基化状态,用RT-PCR检测了其mRNA的表达。用去甲基化药物5-氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理肝癌细胞株并分析其mRNA和蛋白的表达的变化。结果6种肝癌细胞中检测到异常的甲基化,甲基化率为66.7%。在用5-Aza-CdR处理细胞后,WIF-1表达缺失的肝癌细胞系不同程度地恢复了表达。MTT法分析发现WIF-1对SMMC-7721(7721)细胞生长有较为显著的抑制效果。结论推断WIF-1启动子区频繁甲基化的现象可能是它在肝癌中表达沉默的主要机制,并在肝癌的发生发展起作用。
- 程勤金洁于彬万晓桢游海燕舒惠群姚根富覃文新
- 关键词：WNT信号通路WIF-1DNA甲基化肝癌
- Dickkopf1在肝癌组织中的表达被引量：2
- 2009年
- 目的检测Dickkopf1(DKK1)在肝癌组织中的表达。方法采用四种不同方法检测DKK1在肝癌组织和癌旁肝组织的表达。结果半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测显示,DKK1在4/5肝癌中高表达;适时-PCR(Real-time PCR)方法检测显示,DKK1在8/14肝癌中高表达;Western blot方法检测显示,DKK1在2/4肝癌中高表达;免疫组化方法检测显示,DKK1在46/79肝癌中高表达,但与AFP表达水平、分化程度、TNM分期等临床病理特征无关。四种方法检测结果均显示DKK1在肝癌组织的表达显著高于癌旁肝组织。结论DKK1在肝癌组织表达高于癌旁肝组织,可能与肝癌发生、发展相关。
- 黄于彬覃文新
- 关键词：肝细胞癌基因表达
