游海燕
- 作品数：13 被引量：57H指数：5
- 供职机构：上海交通大学医学院附属仁济医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项上海市卫生系统百名跨世纪优秀学科带头人培养计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肝癌DKK1基因的表达及突变分析被引量：9
- 2006年
- 目的:探讨中国地区人肝癌发生发展过程中有无DKK1基因突变。方法:Northernblot方法分析12例肝癌患者癌和癌旁肝组织DKK1mRNA表达水平。采用PCRSSCP方法,检测20例肝癌患者(包括癌和癌旁肝组织)及8种人肝癌细胞株中有无DKK1基因突变,并采用DNA测序对PCRSSCP突变分析结果加以验证。结果:Northernblot显示12例肝癌患者中7例存在癌组织DKK1mRNA高表达而癌旁肝组织微弱表达或不表达。突变检测发现20例肝癌患者及8种人肝癌细胞株中仅1例肝癌患者存在DKK1基因的同义突变(单核苷酸多态现象)。结论:DKK1在中国人肝癌中存在高表达,但未发现突变发生,提示DKK1基因参与肝癌的癌变过程可能并不依赖于该基因的突变。
- 于彬余艳军游海燕程勤姚根富舒惠群覃文新
- 人源DKK1真核悬浮分泌表达系统的建立及其特异性抗体的制备和鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的:利用哺乳动物细胞悬浮培养表达系统分泌表达人源Dickkopf-1(DKK1)蛋白,纯化蛋白并制备特异性抗体。方法:构建DKK1真核表达载体pCMVcStrep-DKK1,并借助脂质体将载体瞬时转染入Free-Style293-F细胞(无血清培养),ELISA和蛋白印迹法检测DKK1蛋白表达量。利用亲和层析法纯化DKK1蛋白,Wnt信号通路荧光素酶报告系统检测其生理活性。以纯化的DKK1蛋白免疫BALB/c小鼠获得相应抗体,并初步鉴定其抗原特异性。结果:DKK1蛋白分泌表达在Free-Style293-F细胞培养液中,蛋白浓度在转染后第5天达最高(20mg/L)。所纯化的DKK1蛋白能够抑制Wnt3a蛋白诱导的报告基因的表达。抗DKK1小鼠抗体能特异性识别细胞内源性DKK1蛋白。结论:建立了在哺乳动物细胞悬浮培养系统中高效分泌表达人源DKK1重组蛋白的表达系统,并获得相应的特异性抗体,为其下一步结构与功能研究及在肿瘤中的应用奠定了实验基础。
- 沈秋瑾孔娟邓云蒋华胡素文孔洁倪涛游海燕李宗海屠红张志刚覃文新
- 关键词：细胞培养技术哺乳动物细胞
- 靶向ATP6L的RNA干扰抑制乳腺癌细胞的体外侵袭能力
- 2010年
- 目的:通过靶向ATP6L的RNA干扰抑制质子泵的功能,检测MCF-7/ADR乳腺癌细胞的体外侵袭情况。方法:采用有效ATP6L干扰片段及干扰对照分别转染MCF-7/ADR细胞,通过荧光分光光度计检测BCECF与细胞分泌上清孵育后在不同激发光激发后发射的荧光量;用实时荧光定量PCR检测细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达情况;用明胶酶谱方法检测细胞分泌上清中的MMP-2活性;用细胞侵袭实验(Transwell)检测细胞体外侵袭能力。结果:在MCF-7/ADR细胞中,下调ATP6L基因的表达可以使细胞的泌H+能力减弱;细胞中MMP-2表达水平无变化;细胞分泌上清中的MMP-2活性减弱;细胞的体外侵袭能力下降。结论:靶向ATP6L的RNA干扰可抑制质子泵的功能,从而抑制MCF-7/ADR乳腺癌细胞的体外侵袭能力。
- 游海燕金洁唐宁邓云舒惠群沈秋瑾覃文新
- 关键词：RNA干扰肿瘤
- V-ATPase质子泵在肝癌转移中作用的研究
- 覃文新李锦军游海燕杨胜利顾健人
- 恶性肿瘤侵袭和转移是造成肿瘤病人治疗失败的根本原因。肿瘤侵袭和转移过程中需要蛋白水解酶参与细胞外基质（Extracellular matrix，ECM）的降解。V-ATPase（vacuolar H+-ATPase）是近...
- 关键词：
- 关键词：V-ATPASE质子泵肿瘤转移降解ECM
- 皮质酮诱导Leydig细胞凋亡机制的研究
- 超生理剂量的糖皮质激素(大鼠体内为皮质酮)能诱导Leydig细胞凋亡.但有关皮质酮诱导Leydig细胞凋亡的细胞内机制尚不清楚.该研究旨在观察皮质酮是否经Fas/FasL途径及caspase-3激活诱导Leydig细胞凋...
- 游海燕
- 关键词：皮质酮LEYDIG细胞FASFASLBCL-2神经酰胺
- 文献传递
- 重组腺病毒载体介导人LASS2基因在肝癌细胞转移中的抑制作用被引量：6
- 2012年
- 目的:探讨人源性长寿保障基因(homo-sapiens longevity assurance homologue 2 of yeast LAG1,LASS2)对人肝癌HCCLM3细胞体外转移的影响及可能的作用机制。方法:构建含人LASS2基因的重组腺病毒并转染入HCCLM3细胞;采用蛋白质印迹法检测HCCLM3细胞中LASS2蛋白的表达水平;划痕实验及体外侵袭实验检测LASS2基因过表达对HCCLM3细胞在迁移和侵袭等转移能力上的改变;免疫共沉淀法验证LASS2蛋白与V-ATPase(vacuolarH+-ATPase)质子泵中的c亚基(ATP6L)在细胞内相互结合的情况;通过对细胞内外H+浓度的测定,探讨LASS2过表达对V-ATPase功能抑制的情况。结果:成功构建了含人LASS2基因的重组腺病毒,LASS2基因在HCCLM3细胞中能有效表达;LASS2过表达可使HCCLM3细胞的侵袭和迁移能力均明显下降(P<0.01),其中侵袭能力下降达(48.3±7.6)%,穿过划痕的细胞个数从对照组的(59.00±6.87)个下降至(10.83±3.75)个;LASS2蛋白与ATP6L蛋白在HCCLM3细胞内特异性结合;LASS2过表达后,细胞内外H+浓度发生明显变化,表明V-ATPase质子泵功能受到抑制。结论:LASS2基因在HCCLM3细胞中过表达可抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与LASS2蛋白结合ATP6L,抑制其分泌H+功能相关。
- 游海燕金洁唐宁邵根宝彭琬昕龚爱华覃文新
- 关键词：肿瘤转移
- 肝癌细胞中WIF-1的甲基化状态分析被引量：3
- 2007年
- 目的探讨WIF-1基因在肝癌细胞中的甲基化状态及其与蛋白表达的关系,并初步研究了WIF-1与肝癌发生发展的关系。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)和测序方法分析了9种肝癌细胞系中WIF-1启动子区的甲基化状态,用RT-PCR检测了其mRNA的表达。用去甲基化药物5-氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理肝癌细胞株并分析其mRNA和蛋白的表达的变化。结果6种肝癌细胞中检测到异常的甲基化,甲基化率为66.7%。在用5-Aza-CdR处理细胞后,WIF-1表达缺失的肝癌细胞系不同程度地恢复了表达。MTT法分析发现WIF-1对SMMC-7721(7721)细胞生长有较为显著的抑制效果。结论推断WIF-1启动子区频繁甲基化的现象可能是它在肝癌中表达沉默的主要机制,并在肝癌的发生发展起作用。
- 程勤金洁于彬万晓桢游海燕舒惠群姚根富覃文新
- 关键词：WNT信号通路WIF-1DNA甲基化肝癌
- V-ATPases的功能及其抑制剂研究进展被引量：6
- 2009年
- V-ATPases作为一类酶,在真核细胞中广泛存在。V-ATPases是一个由多个亚基组成的复合物,主要有两个结构域,分别是位于外周的V1结构域和跨膜的V0结构域。V1结构域可以通过水解ATP供能;而V0结构域是质子的通道。它们发挥作用主要是通过水解ATP供能,泵运H+进入囊泡腔中或泵H+出细胞外。V-ATPases定位于细胞器膜及某些特殊细胞的细胞质膜,参与骨吸收、肿瘤的侵袭及耐药等生理及病理过程,因而V-ATPases是治疗骨质疏松、糖尿病及肿瘤等人类疾病的候选分子靶标。目前有许多研究致力于发现新的潜在的特异的V-ATPase抑制剂。
- 游海燕邓云覃文新
- 关键词：耐药肿瘤骨质疏松抑制剂
- 靶向LASS2基因的小干扰RNA对人肝癌细胞侵袭能力的影响被引量：18
- 2009年
- 目的:研究靶向人源性长寿保障基因2(homosapiens longevity assurance homologue2,LASS2)的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人肝癌细胞MHCC97-L体外侵袭能力的影响。方法:通过脂质体转染将靶向LASS2的siRNA转染MHCC97-L细胞,运用实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)检测转染后LASS2mRNA的表达,筛选有效的siRNA片段;运用BCECF氢离子敏感荧光探针检测MHCC97-L细胞跨膜运输氢离子的功能;采用Western印迹法分析MHCC97-L细胞及上清液中基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase2,MMP-2)的表达情况;应用明胶酶谱法检测MHCC97-L细胞上清液中MMP-2的活性;Transwell法检测细胞体外侵袭能力。结果:筛选得到靶向LASS2的有效siRNA-1片段。MHCC97-L细胞转染LASS2siRNA-1后,其跨膜运输氢离子的能力增强,与空白对照组比差异有统计学意义(P<0.05);MMP-2蛋白的表达及分泌无明显变化,但分泌的MMP-2活性形式增加,与空白对照组和无关序列组比明显提高,差异有统计学意义(P<0.05);且细胞的体外侵袭能力明显高于无关序列组和空白对照组(P<0.05)。结论:靶向LASS2的siRNA能有效下调其表达,并能提高MHCC97-L细胞在转染LASS2siRNA后的体外侵袭能力。
- 唐宁游海燕金洁于彬覃文新
- 关键词：肝肿瘤肿瘤浸润
- 肝癌患者β-catenin基因第三外显子的体细胞突变被引量：3
- 2005年
- 目的探讨中国地区人肝癌发生发展过程中有无β-catenin基因突变。方法采用PCR-SSCP方法,设汁扩增β-catenin 基因第三外显子的引物,检测20例肝癌患者及7株人肝癌细胞中有无β-catenin基因突变,并通过DNA测序及限制性内切酶对突变加以验证。结果20例肝癌患者中有2例发生β-catenin基因突变,均为41位密码子由编码苏氨酸变成编码丙氨酸。7株人肝癌细胞均无β-catenin基因突变。结论10%(2,20)的肝癌组织样品有β-catenin基因突变。提示β-catenin基因突变可能参与了部分肝癌癌变过程,但不是中国地区肝癌发生发展过程中的主要和关键原因。
- 游海燕姚根富于彬张海涛余艳军谢丽覃文新
- 关键词：肝肿瘤Β-CATENIN单链构象多态性突变
