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绿色荧光蛋白转基因成纤维细胞与义齿基托树脂复合生长状况的活体观察被引量：3: 2004年; 细胞与材料复合生长状况的活体动态监测可能理想地反映材料的体外生物相容性。本研究通过绿色荧光蛋白 (Green fluorescent protein,GFP)转基因技术成功标记了小鼠成纤维细胞 L 92 9。该荧光蛋白标记细胞与义齿基托树脂复合培养过程中 ,通过倒置相差显微镜和荧光显微镜活体动态监测了材料周围和材料表面细胞形态、增殖及其对材料的黏附等状况。结果发现 ,义齿基托树脂制备过程中残留的甲基丙烯酸甲酯单体表现了一过性的细胞毒作用 ,但该细胞毒作用可以通过树脂的短时间浸泡而得以消除。活体动态观察可以发现材料很轻微的毒副作用 ,表明细胞与材料复合生长状况的活体动态监测能更真实。; 刘瑾万琳卢晓风李胜富张杰程惊秋; 关键词：绿色荧光蛋白转基因技术成纤维细胞义齿基托树脂生物医用材料

锌离子对sTRAIL分子聚合状态及肿瘤细胞杀伤活性的影响被引量：2: 2013年; 可溶性肿瘤坏死因子相关诱导配体(sTRAIL)因对多种肿瘤细胞具有超强选择性杀伤活性而极可能成为新型抗肿瘤药物。基因工程重组表达sTRAIL过程中缺乏锌离子(Zn2+)可能是导致该蛋白对肿瘤细胞杀伤活性较低的重要原因。本文通过化学合成方法获得了sTRAIL编码基因,将其克隆到pQE30载体中获得了高表达。比较不同Zn2+浓度条件下制备的sTRAIL蛋白分子聚合状态和肿瘤细胞杀伤活性发现,无Zn2+的sTRAIL主要以单体形式存在,活性弱;有Zn2+的sTRAIL主要以同源三聚体形式存在,活性强。这表明Zn2+对维持sTRAIL肿瘤细胞杀伤活性极为重要,有必要在sTRAIL蛋白生产体系中添加适当浓度的Zn2+。; 胡立强杨浩万琳卢晓风; 关键词：肿瘤生物治疗生物技术药物

恒河猴可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的基因克隆、重组表达和功能研究: 2015年; 人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(hTRAIL)因对肿瘤细胞有选择性杀伤作用而成为新型抗肿瘤候选药物。预测的恒河猴TRAIL(mmTRAIL)与hTRAIL高度同源,提示其有杀伤人肿瘤细胞的可能性。但目前尚无mmTRAIL蛋白功能的报道。本文首先从恒河猴外周血单个核淋巴细胞中扩增了可溶性mmTRAIL编码基因,然后构建了pQE30-mmTRAIL表达质粒并进行诱导表达。通过Ni-NTA agarose亲和层析从破菌上清液中获得mmTRAIL蛋白。聚丙烯酰胺凝胶电泳和凝胶过滤层析表明,mmTRAIL在溶液中主要以三聚体形式存在。体外条件下,mmTRAIL对结肠癌细胞COLO205显示强烈的杀伤作用,而对正常细胞BEA2b无害,表明其对肿瘤细胞的杀伤有选择性。裸鼠荷瘤模型进一步证实mmTRAIL能够抑制肿瘤生长,具有抗肿瘤作用。这些结果表明,mmTRAIL能够杀伤人肿瘤细胞,可作为新型肿瘤靶向治疗药物进一步深入研究。; 樊淼淼贾殿隆杨浩万琳卢晓风; 关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体细胞凋亡肿瘤靶向治疗

人脐动脉平滑肌细胞体外培养的生物学特性及其永生株的初步建立被引量：5: 2003年; 目的　建立人脐动脉血管平滑肌细胞 (HU ASMC)原代、传代培养的最佳方法 ,并初步建立其永生株。方法　采用人脐动脉血管中膜组织块贴壁法原代培养 ,比较不同培养基对原代及传代细胞增殖的影响 ;选择标记为新霉素 (G4 18)的带有端粒酶催化亚基 (h TERT)基因的重组质粒导入人脐动脉血管平滑肌细胞。结果　经 α-肌动蛋白鉴定 ,组织块贴壁法可获得高纯度的 HUASMC。原代培养的 HU ASMC1～ 4代细胞增殖能力强、生长旺盛 ,此后细胞的增殖能力逐渐降低 ,到第 10代几乎丧失增殖力。原代培养以 MCDB131为最佳培养基。 h TERT转染细胞克隆由长梭形变为短梭形 ,接触抑制消失 ,生长速度快 ,目前已传至 2 0代 ,增殖能力与第 1代无差别。转染前后平滑肌特异的α-肌动蛋白表达阳性。结论　 h TERT转染的 HU ASMC保留了 HU ASMC的基本生物学特征。; 李胜富田佳刘瑾万琳卢晓风冯莉孙明菡樊瑜波步宏李幼平; 关键词：人脐动脉平滑肌细胞端粒酶催化亚基

人外周血单个核细胞与猪内皮细胞相互作用表达上调基因的鉴定: 2003年; 目的　探讨人外周血单个核细胞与猪内皮细胞相互作用后基因表达的变化。方法　人外周血单个核细胞 (PBMC)与猪内皮细胞系 PIEC共培养 18h,对照组为未共培养的 PBMC和 PIEC。合成两组细胞的 c DNA进行抑制消减杂交 (SSH)。共培养中上调的 c DNA用 p GEM- T Easy载体进行 T/ A克隆 ,然后测序。用 BL AST程序进行同源性分析。结果　经过 SSH和克隆 ,获得一包含 30 0克隆的消减文库。从文库中随机挑取 2 4个克隆进行测序 ,并在 Gen Bank中进行同源性比较。其中 4个为已知的人的基因片段 ,8个为猪的表达序列标记 (EST) ,9个片段与人的基因有高度的同源性 ,3个片段未检索到相匹配的同源性序列。; 胡为民程惊秋李胜富卢晓风万琳李幼平; 关键词：外周血单个核细胞内皮细胞抑制消减杂交异种移植

人源细胞色素C在大肠杆菌中的重组表达和分离纯化被引量：4: 2007年; 细胞色素C在电子传递、缺氧应激和细胞凋亡的过程中起重要作用。通过人源细胞色素C和酵母细胞色素C亚铁血红素裂解酶共表达,从大肠杆菌中获得了可溶性的重组人源细胞色素C蛋白。细菌经过超声破碎后,获得的上清经350g/L硫酸铵沉淀去除杂蛋白,再经过两次SP-Sepharose Fast Flow阳离子交换层析,获得了纯度大约为80%的人源细胞色素C。每升菌可产出10mg以上重组细胞色素C。人源细胞色素C的重组表达和纯化有助于细胞色素C功能的深入研究和应用。; 蔡华伟万琳杨浩陈利弘卢晓风; 关键词：细胞色素C 大肠杆菌

人可溶性TRAIL基因的克隆及其在毕赤酵母中的重组表达被引量：1: 2010年; TRAIL是肿瘤坏死因子TNF家族成员,对肿瘤细胞具有高效和选择性杀伤活性,可能发展为新型抗肿瘤药物。基因重组表达是生产蛋白药物的重要手段。本文首先通过PCR扩增获得人可溶性TRAIL（114-281氨基酸组成的片段）基因,然后将其插入毕赤酵母表达载体pPIC9K中进行表达。结果发现,经G418筛选获得的高拷贝转化子,在含有3%甲醇的BMMY培养基中,人可溶性TRAIL获得高效分泌表达。表达产物经Ni-Agarose亲和层析,纯度大约为80%,产量可达1-2 mg/L。细胞毒性实验表明,0.05μg/ml可溶性TRAIL对白血病细胞Jurkat有很强的杀伤活性,细胞存活率只有10%。0.1μg/ml TRAIL可对人肺癌细胞A549显示剂量依赖的杀伤作用;当TRAIL浓度达到1μg/ml时,细胞存活率大约为30%。而在测试的浓度范围内,可溶性TRAIL对人皮肤成纤维细胞HSF均无明显细胞毒作用,表明毕赤酵母表达的人可溶性TRAIL对肿瘤细胞的杀伤有选择性。该表达体系的建立,为进一步利用毕赤酵母大量生产人可溶性TRAIL和基于人TRAIL的新型融合蛋白奠定了基础。; 李莹莹万琳杨浩刘珊蔡华伟卢晓风; 关键词：TRAIL 细胞凋亡肿瘤治疗毕赤酵母

阳离子抗菌肽融合细胞穿透肽增强其肿瘤细胞杀伤活性的实验研究: 2011年; 具有肿瘤细胞杀伤活性的膜作用型抗菌肽因不易诱导抗性而在肿瘤治疗中极具潜力。阳离子抗菌肽的细胞结合能力是影响其细胞杀伤活性的重要因素。通过偶联有较强细胞结合能力的细胞穿透肽可能增强阳离子抗菌肽的细胞杀伤活性。本文选择了细胞毒性较弱的抗菌肽MP,与细胞穿透肽Antp偶联,并观察融合肽细胞杀伤活性的变化。结果发现,未偶联的抗菌肽MP和细胞穿透肽Antp对肿瘤细胞无明显杀伤,但两者偶联形成的融合肽MPGA通过破坏细胞膜而显示强烈的肿瘤细胞杀伤作用。这表明将抗菌肽与细胞穿透肽偶联能够显著提高其细胞毒性,可能成为研发新型抗肿瘤药物的途径之一。; 刘珊杨浩蔡华伟万琳卢晓风; 关键词：肿瘤生物治疗抗菌肽细胞穿透肽

大肠菌素Colicin S4的重组表达、分离纯化和性质: 2010年; 传统抗生素的广谱抗菌特性是诱导细菌普遍产生耐药性重要原因之一。细菌素由于具有窄谱抗菌活性而可能被开发为新一代抗菌药物。大肠菌素因被认为对人体安全而倍受关注。本研究利用PCR方法获得了大肠菌素S4及其抑制蛋白基因并将其克隆到pQE30质粒中,构建了表达质粒pQE30-Col S4。大肠菌素S4在该表达体系中以可溶形式高表达,产量达到30-50 mg/L。活性分析发现,带有6His标签的重组大肠菌素S4与天然大肠菌素S4特性一致,仍具有对大肠杆菌的选择性抗菌活性,是一种有潜力的抗菌物质。; 李小未杨浩万琳卢晓风; 关键词：抗生素细菌素

表达于大肠杆菌中的人源性抗CTLA4单链抗体复性方法探索被引量：4: 2005年; 探索表达于大肠杆菌中的人源性抗CTLA4单链抗体(Anti-CTLA4-scFv)的体外复性方法.采用稀释和透析两种复性方式,并分析影响复性得率的各种因素如复性时间、温度、适宜的氧化-还原体系对其的影响.通过非还原电泳确定复性效果,并测定蛋白含量.结果显示:含0.15 mol·L-1NaCl、1 μmol·L-1氧化型谷胱甘肽和3μmol·L-1还原型谷胱甘肽的50 mmol·L-1Tris-HCl(pH 8.0)缓冲液作为Anti-CTLA4-scFv的复性液,4℃下透析复性48～54 h,可获得具有天然构象的蛋白质.该方法复性蛋白得率高,从3.9 g菌体中可复性获得28 mg蛋白.; 曾令宇黄强陈利弘万琳卢晓风; 关键词：基因表达大肠杆菌重组蛋白

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万琳

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