黄学文
- 作品数：8 被引量：4H指数：2
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- 可用体外翻译获得的可溶天然型EGFP的表达
- 2007年
- 目的构建能在体外大量表达可溶性天然型增强绿色荧光蛋白(EGFP)的pET28a-EGFP原核表达载体。方法以质粒pEGFP-N1为模板扩增EGFP基因,EcoR I和Hind III双酶切EGFP基因序列和pET28a载体。T4 DNA连接酶连接,转化大肠埃希菌DH5α,提取载体,酶切和DNA测序鉴定。将pET28a-EGFP转化大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,观察荧光。体外翻译系统中加入重组pET28a-EGFP载体,孵育后观察荧光。免疫印迹法(Western blott)鉴定EGFP。结果测序证实pET28a-EGFP中的EGFP基因序列与GenBank中序列完全一致,荧光显微镜下观察到大肠埃希菌BL21(DE3)和体外翻译系统中强烈荧光,West-ern blot结果显示相对分子质量约为27 000的EGFP高效表达。结论成功构建了能在体内和体外稳定表达的可溶性天然型EGFP的pET28a-EGFP载体,为进一步体外筛选抑菌药物提供了可靠的报告载体。
- 黄学文潘杰安仙园诸葛洪祥
- 关键词：原核表达
- P3级生物安全柜污染物转移消毒装置
- 本发明公开了一种P3级生物安全柜污染物转移消毒装置，该生物安全柜的一侧开设有出料口，出料口处设有可向内打开的隔离门，该消毒装置包括具有封闭内腔的负压抽风柜、设于负压抽风柜中的高压消毒筒、收容在高压消毒筒中的传递筒，传递筒...
- 诸葛洪祥朱远见诸葛纯一张梦寒许飞黄学文程绣李明
- 文献传递
- 靶向23SrRNA domainⅡ区的多肽核酸(peptide nucleic acids，PNAs)抑制蛋白翻译和细菌生长的研究
- 目的：⑴构建能在大肠杆菌BL21（DE3）和体外翻译系统中大量表达可溶性天然型增强绿色荧光蛋白（EGFP）的pET28a—EGFP载体。⑵尝试研究反义多肽核酸（PNA）在体外翻译系统中抑制细菌蛋白的翻译。⑶研究肽—PNA...
- 黄学文
- 关键词：大肠杆菌细菌耐药基因测序
- P3级生物安全柜污染物转移消毒装置
- 本实用新型公开了一种P3级生物安全柜污染物转移消毒装置，该生物安全柜的一侧开设有出料口，出料口处设有可向内打开的隔离门，该消毒装置包括具有封闭内腔的负压抽风柜、设于负压抽风柜中的高压消毒筒、收容在高压消毒筒中的传递筒，传...
- 诸葛洪祥朱远见诸葛纯一张梦寒许飞黄学文程绣李明
- 文献传递
- 多肽核酸在分子生物学中的应用被引量：2
- 2007年
- 多肽核酸(peptide nucleic acid,PNA)是DNA类似物,其生物性质稳定,不被核酸酶和蛋白酶消化降解。PNA遵循Watson-Crick规则和Hoogsteen规则与单链DNA(RNA)以序列特异性形成极其稳定的杂交二聚体或三聚体。根据PNA的生物特性,以PNA为基础的PNA探针和PCR钳制技术在肿瘤和老化研究以及染色体畸形、细菌和DNA点突变诊断等方面的应用日益增多。PNA协助的携带非天然氨基酸的氨基酰化tRNA的改造已获得成功,并且合成了人工蛋白。作为反义抑制药物,PNA在抑制细菌和病毒的基因表达以及蛋白质翻译方面也取得了初步成果。基于PNA的由RNA触发的药物释放系统设计巧妙,是十分有希望的靶向治疗药物。
- 黄学文诸葛洪祥
- 关键词：杂交反义寡核苷酸
- 靶向23S rRNA的多肽核酸体外抑制细菌蛋白翻译被引量：3
- 2007年
- 目的 尝试研究反义多肽核酸（peptide nucleic acid，PNA）在体外翻译系统中抑制细菌蛋白的翻译。方法以增强绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）为报告分子，将重组载体pET-28a—EGFP和靶向23S rRNA domainⅡ区的PNA在体外翻译系统中共同孵育后，用荧光显微镜观察荧光强度减弱，放射自显影证明荧光强度减弱是因为EGFP减少。为了分析PNA体外抑制蛋白翻译的浓度，我们用蛋白沉淀方法分析PNA体外抑制[^35S]methionine渗入蛋白比例。最后，用浊度分析观察PNA（G1138）在MH肉汤培养基中的抑菌作用。结果在体外翻译系统中，靶向23S rRNA do-mainⅡ区的PNA（G1138）以剂量和序列依赖方式抑制蛋白合成，抑制浓度（IC50）为0．15μmol／L。在MH培养基中，PNA（G1138）抑菌效果不明显（MIC〉50μmol／L）。结论靶向23S rRNA domainⅡ区的PNA（G1138）在体外翻译系统中能有效抑制细菌蛋白合成。在MH肉汤培养基中，PNA（G1138）抑菌效果不明显。
- 黄学文潘杰安仙园诸葛洪祥
- INF-γ影响豚鼠嗜肺军团菌感染后生化指标改变的实验研究
- 2005年
- 目的:观察INF-γ对豚鼠1型军团菌感染后生化指标改变的影响作用。方法:将豚鼠制成1型嗜肺军团菌感染的模型,随机分成两组,即感染后对照组和感染后治疗组,治疗组给予肌注INF-γ。观察各时间段两组豚鼠血清CPK、AST、ALT、AKP、BUN、Cr和LDH水平。结果:治疗组豚鼠CPK水平均明显低于对照组,部分AST、AKP、BUN、Cr和LDH水平低于对照组。结论:外源性INF-γ对感染1型嗜肺军团菌豚鼠的肝肾功能有明显的保护作用。
- 张兴虎诸葛洪祥周霞徐培君许菊张惠琴黄学文
- 关键词：INF-Γ嗜肺军团菌细菌感染生化指标
- P3级生物安全柜污染物转移消毒装置
- 本发明公开了一种P3级生物安全柜污染物转移消毒装置，该生物安全柜的一侧开设有出料口，出料口处设有可向内打开的隔离门，该消毒装置包括具有封闭内腔的负压抽风柜、设于负压抽风柜中的高压消毒筒、收容在高压消毒筒中的传递筒，传递筒...
- 诸葛洪祥朱远见诸葛纯一张梦寒许飞黄学文程绣李明
